淋巴瘤CD30免疫组织化学检测及结果判读规范.pdf

228欢迎关注本刊公众号中国癌症杂志2023年第33卷第3期 CHINA ONCOLOGY 2023 Vol.33 No.3专家述评淋巴瘤CD30免疫组织化学检测及结果判读规范CD30阳性淋巴瘤病理专家组摘要 CD30可在多种淋巴瘤中表达，其中经典型霍奇金淋巴瘤（classical Hodgkin lymphoma，CHL）和间变性大细胞淋巴瘤（anaplastic large cell lymphoma，ALCL）最为常见。近年来，靶向CD30的抗体药物偶联物维布妥昔单抗已获批应用于复发/难治性CHL和ALCL患者的治疗，并取得显著疗效。然而，该靶向治疗药物能否使其他类型淋巴瘤患者获益目前尚不明确，精确评估CD30表达水平对此类淋巴瘤患者的临床试验和个体化治疗有重要的指导意义。目前，CD30检测仍主要通过免疫组织化学染色的方法，尚缺乏统一、规范的检测流程及结果判读标准。本文通过分析CD30的检测现状，联合多中心研究探索CD30免疫组织化学检测流程及结果判读方法，并结合文献和专家经验，最终达成淋巴瘤CD30免疫组织化学检测及结果判读共识，希望能有助于淋巴瘤CD30表达的规范化检测。关键词 淋巴瘤；CD30；免疫组织化学；检测规范；判读标准中图分类号：R 文献标志码：ADOI:10.19401/ki.1007-3639.2023.03.005The standardization of immunohistochemical detection and interpretation of CD30 expression in lymphomas CD30-Positive Lymphoma Pathology Expert GroupCorrespondence:LI Xiaoqiu,E-mail:.Abstract CD30 can be expressed in a variety of lymphoma subtypes,among which classical Hodgkin lymphoma(CHL)and anaplastic large cell lymphoma(ALCL)are the most common ones.Recently,Brentuximab vedotin,the antibody-drug conjugate 通信作者：李小秋（ORCID:0000-0002-8758-2191），博士，主任医师，复旦大学附属肿瘤医院病理科副主任，E-mail:。李小秋，医学博士，主任医师、教授、博士研究生导师。现任复旦大学附属肿瘤医院病理科副主任、淋巴造血病理专科负责人及淋巴瘤多学科综合诊疗组副首席专家。兼任中国国家卫生健康委能力建设和继续教育中心淋巴瘤专科建设项目专家组顾问暨病理学组组长、中国抗癌协会淋巴瘤专业委员会副主任委员、中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会常务委员暨滤泡性淋巴瘤工作组副主任委员、中国临床肿瘤学会淋巴瘤专家委员会常务委员、中华医学会病理学分会淋巴造血系统病理学组顾问、中华医学会肿瘤学分会淋巴血液学组委员、中国老年保健协会淋巴瘤专业委员会常务委员、中国医疗保健国际交流促进会病理专业委员会常务委员、中国医药教育协会淋巴疾病专业委员会常务委员、上海市抗癌协会淋巴瘤专业委员会副主任委员、上海医药行业协会血液医学转化专业委员会常务委员。曾多次受世界卫生组织和国际癌症研究机构邀请，参与执笔WHO造血淋巴肿瘤分类（2022年）、WHO头颈部肿瘤分类（2017年）、WHO头颈部肿瘤分类（2022年）、WHO消化系统肿瘤分类（2019年）及WHO皮肤肿瘤分类（2023年）相关章节。229中国癌症杂志2023年第33卷第3期1 淋巴瘤CD30的表达、临床意义及检测现状淋巴瘤是一组具有高度异质性的淋巴造血组织肿瘤，传统上分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）两大类，后者按细胞系起源又进一步分为若干种B细胞、T细胞和自然杀伤（natural killer，NK）细胞性肿瘤。CD30作为肿瘤坏死因子家族成员之一，是一种相对分子质量为120103的跨膜蛋白，可在活化淋巴细胞和多种淋巴瘤细胞中表达，发挥其多重生理及病理学作用。在不同类型的淋巴瘤中，CD30的表达特点不尽相同。在绝大部分经典型霍奇金淋巴瘤（classical Hodgkin lymphoma，CHL）和间变性大细胞淋巴瘤（anaplastic large cell lymphoma，ALCL）中，CD30通常呈高表达，表现为所有肿瘤细胞CD30免疫染色均呈较强阳性结果。外周T细胞淋巴瘤中也有较多亚型（包括血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、非特指性外周T细胞淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤、肠病相关T细胞淋巴瘤及诸多原发性皮肤T细胞淋巴瘤等）频度不等地表达CD30，但表达水平存在较大个体差异。此外，相当多的大B细胞性NHL亚型（如原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、灰区淋巴瘤、EB病毒阳性的弥漫性大B细胞淋巴瘤、间变型弥漫性大B细胞淋巴瘤等）也经常呈现CD30阳性的表型。CD30的表达不但对于特定类型淋巴瘤的诊断和鉴别有帮助，而且对于患者的预后评估也有一定价值。约64%的非特指性外周T细胞淋巴瘤可表达CD30 1。35%75%的结外NK/T细胞淋巴瘤表达CD30并具有预后预测意义 2，也有研究 3表明，CD30阳性的弥漫性大B细胞淋巴瘤治疗结局显著优于CD30阴性组。近年来，CD30还被用来研发淋巴瘤靶向治疗的药物，抗体药物偶联物维布妥昔单抗（brentuximab vedotin）由针对CD30的单克隆抗体重组嵌合免疫球蛋白G1（immunoglobulin G1，IgG1）与微管蛋白抑制剂单甲基澳瑞他汀E共价结合组成 4，并于2020年5月正式获得国家药品监督管理局批准用于治疗复发/难治性CHL和ALCL患者。此前多项临床研究 5-6均显示，结合CD30靶向治疗的免疫治疗和化疗不仅能改善CHL和ALCL患者的预后，还能对其他多种NHL，特别是外周T细胞淋巴瘤亚型治疗的优化发挥重要作用。应用CD30靶向治疗的前提是对肿瘤的CD30表达状态进行评估，CD30的规范化检测及结果判读对于淋巴瘤的精准治疗至关重要。目前，临床检测CD30表达的主流方法仍是应用石蜡包埋组织的免疫组织化学染色。影响CD30免疫组织化学染色效果的常见技术问题包括抗原修复不足（加热时间太短或温度低）、一抗浓度过低及检测体系灵敏度不够等。Nordi QC7于2017年发布的CD30免疫染色评估报告显示，有17%的病理学实验室存在CD30染色不足，表现为着色强度较弱乃至假阴性。针对这些问题，Nordi QC提出了一些改善措施和建议：选用优质CD30抗体，Ber-H2、CON6D/5和JCM182这3种抗体均可获得最佳染色效果，其中Ber-H2抗体已为多数病理学实验室所采用；抗原修复需在碱性缓冲液或改良的低pH值缓冲液中进行，配合灵敏性、特异性均较好的检测系统；推荐使用扁桃体组织作为外部对照，滤泡生发中心周targeting CD30,has been approved in the treatment of patients with refractory and relapsed CHL and ALCL,and has achieved significant curative effect.However,whether CD30-targeted therapy could benefit patients with other types of lymphoma remains largely unknown.Accurate evaluation of the expression level of CD30 may thus have important guiding significance for the clinical trials and individualized treatment of patients with those lymphomas.To date,CD30 detection is mainly via immunohistochemical staining,however,with no unified and standardized process and interpretation method.We herein described the current status on CD30 testing,and explored the procedures of immunohistochemical detection and interpretation of the results through multicentric studies.A consensus was finally reached,which was based on the combination of our research results,literature review,experts experience,and internal discussion among the panel members,and might hopefully contribute to standardization of the immunohistochemical detection and interpretation of CD30 expression in lymphomas.Key words Lymphoma;CD30;Immunohistochemistry;Standards for detection;Criteria for interpretation230CD30阳性淋巴瘤病理专家组 淋巴瘤CD30免疫组织化学检测及结果判读规范边活化的大、中淋巴细胞和滤泡间区部分免疫母细胞会出现阳性着色，阳性信号强弱不等，定位于细胞膜或细胞质（伴或不伴核旁高尔基体所在区着色）；如果实验室所选用的CD30抗体无法达到最佳染色条件，则需要更换抗体 7。如何半定量判读CD30免疫组织化学染色结果，目前尚无统一标准。基于肿瘤细胞的细胞膜或细胞质染色强度（如划分为0 3+共4个等级）与阳性细胞的百分比所设置的半定量评分方法，仍是评估CD30表达水平最理想的方 法 8-9。然而，这种兼顾阳性细胞比例和染色强度的评分方法在日常诊断实践中并不易推广，在不同病理科医师之间乃至同一病理科医师在不同时期的观察结果可重复性都不高。所以，目前国际病理学界更多是推荐在规定阳性强度（指定位精确、明确可辨的阳性着色，如1+以上的阳性着色）的前提下，单纯评估阳性细胞占比的方法。细胞图像分析等计算机辅助图像分析技术能兼顾单个细胞的阳性强度及阳性细胞的比例，有助于对蛋白表达水平进行更精准的量化评估，但技术平台仍有待普及。本规范专家组成员通过多中心临床研究，针对淋巴瘤CD30免疫组织化学规范化检测及结果判读达成诸多技术层面共识，总结如下。2 淋巴瘤CD30染色条件优化的多中心研究染色流程的探索主要包括CD30抗体和检测平台的选择及染色流程的优化。研究先使用统一分发的多亚型淋巴瘤标本在本规范专家组成员单位按各自染色条件进行CD30免疫染色（图1），并把染色结果汇总、比对，从中选出最满意的染色方案（最终选定瑞士Roche公司即用型Ber-H2抗体及其Ventana染色平台）。选定染色方案后，进一步优化染色条件，并对比不同染色条件下的染色效果，最终确定标准染色流程。3 建议进行CD30免疫组织化学检测的淋巴瘤及标本类型基于CD30在不同类型淋巴瘤中的表达情况及药物治疗的可及性 3，10-12，建议在以下淋巴瘤类型中开展CD30检测：CHL、ALCL、大B细胞性NHL包括但不局限于弥漫性大B细胞淋巴瘤（非特指性）、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、E