乳与乳制品中乳与乳制品中乳与乳制品中乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定动物水解蛋白鉴定动物水解蛋白鉴定动物水解蛋白鉴定————L(-)-羟脯氨酸含量测定羟脯氨酸含量测定羟脯氨酸含量测定羟脯氨酸含量测定法法法法1主题内容与适用范围本方法规定了乳与乳制品制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。本方法适用于乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。本方法通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。2引用标准GB9695.23-90肉与肉制品L(L(L(L(----))))----羟脯氨酸含量测定3原理试样经酸水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。4试剂所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。4.1氯化亚锡(GB638):0.75％溶液。将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中,再加入500ml浓盐酸(GB622)。4.2盐酸(GB622):6mol/L溶液。4.3氢氧化钠(GB629);1mol/L、10mol/L溶液。4.4缓冲液:将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水,稀至1L,此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。4.5氯胺T(HG3-972)溶液:将1.41g氯胺T,溶于10mL水中,依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。4.6显色剂:称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。4.7L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。4.7.1标准储备液500μg/mL:称取50.0mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。4.7.2标准工作液5μg/mL:吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中,定容。5仪器和设备5.1实验室常规设备。5.2配有冷凝管的三角瓶:250mL。5.3恒温水浴。5.4试管加热器或水浴,可控温于60℃。5.5分光光度计。6试样处理：6.1方法1：准确称取样品2-5g（液体样品5-10g）放入250mL磨口三角瓶中。加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL,置于水浴上加热回流16h。趁热将水解溶液过滤于200mL容量瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗三角瓶和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL烧杯中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于250mL容量瓶中,用30mL水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。6.2方法2：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；将称好的样品放于水解管中。在水解管内加6mol/L盐酸10～15mL（视样品蛋...
