SNT 3506-2013 布氏杆菌病荧光偏振试验操作规程.pdf

SN/T3506-20136.2微量板振荡器。6.3温箱：温度范围应满足16一26。7被检样品被检样品为血清样品。样品应避免含有颗粒物，如出现颗粒物应作离心处理。溶血样品可用于本试验，冻干样品应用蒸馏水进行复原，冷冻样品需完全融化并混匀。8操作方法8.1将试剂和样品恢复至室温(1626)。8.2将25浓缩反应缓冲液用蒸馏水作1：25稀释。制备稀释的反应缓冲液应避免有颗粒物，配制后的溶液放置室温保存，并在1个月丙使用。8.3取20L阴性对照加人微量板A1、B1、C1孔中，取20L阳性对照加人微量板D1孔中，取20L血清样品加入其余相应孔中。在向微量板加样或加液体时应避免气泡产生。8.4取180uL稀释的反应缓冲液加入到微量板的每个反应f孔中，置振荡器上中速振荡2mi。8.5将反应板置室温(1626孵育3min5rrr后，置荧光偏振仪（激发波长485nm,发射波长528nm)上读取缓冲液和样品的初始值，作为空白偏振值。8.6取10L结合物加入到每个反应孔中，置振荡器上中速振荡2min:8.7将反应板置室温(1626瓣育2mim3mi,置荧光偏振仪上读取最终偏振值。9结果判定对照或样品的偏振值计算见式(1)：FP A-B(1）式中：FP一对照或样品的偏振值mP:A一对照或样品的最终偏振值，mP;B对照或样品的初始偏振值，mP。当阳性对照的偏振值在120mP50mP之间y阴性对照的偏振值在70mP95mP之间时，方可进行被检样品的结果判定。若阳性对照或阴性对照的偏振值超岳规定的范围，需要根据仪器手册的说明重新校正仪器。结果判定计算见式(2)：=FP-Ct(2）式中：V一样品的偏振值与阴性对照平均偏振值的差值，mP;FP一对照或样品的偏振值，mP;C一阴性对照平均偏振值，mP。被检样品为牛血清时，20mP,样品判为阳性。被检样品为羊血清时，15mP,样品判为阳性。被检样品为猪血清时，20mP,样2