NY-T 405-2000 脱毒大蒜种蒜(苗)病毒检测技术规程.pdf

B 1 5N丫中华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准N Y/T 4 0 5-2 0 0 0脱毒大蒜种蒜(苗)病毒检测技术规程R u l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s-f r e e s e e d(s e e d l i n g)g a r l i c2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 发布2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 实施中华人民共和国农业部发 布N Y/T 4 0 5-2 0 0 0前言 为了有效地实施对脱毒大蒜种蒜质量检验和管理，规范脱毒大蒜种蒜市场，促进大蒜脱毒技术的推广，实现脱毒大蒜种蒜(苗)病毒检测的规范化、标准化，特制定本规程。本规程在参照国内外大蒜病毒检测技术最新研究进展的基础上，结合当前国内 生产实际，力 求达到快速、准确、可操作性强的检测要求。检测对象主要选择生产上发生分布范围 广、危害性大的 病毒。检测方法主 要采用双抗体夹心酶联免疫吸附 检测方法。本规程内容包括脱毒大蒜种蒜(苗)检测的适用范围、检测对象、抽样方法、检测方法和质量要求。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准主要起草单位:农业部植物脱毒种苗质量监督检验测试中心(济南)、山东省植物保护总站。本标准主要起草人:李明立、孙作文、杨勤民、刘敬东、商明清、卢增全。中华人民共和国农业行业标准脱毒大蒜种蒜(苗)病毒检测技术规程N Y/T 4 0 5-2 0 0 0R u l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s-f r e e s e e d(s e e d l i n g)g a r l i c1 范围 本标准规定了脱毒大蒜种蒜(苗)的病毒检测方法和操作规程。本标准适用于脱毒大蒜种蒜(苗)的病毒检测。2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。N Y/T 4 0 1-2 0 0。脱毒马铃薯种薯(苗)病毒检测技术规程3 定义 本标准采用下列定义。3.1 脱毒苗 应用茎尖组织培养技术获得的再生试管苗，经检测确认不带洋葱黄矮病毒(O Y D V)、大蒜普通潜隐病毒(G C L V)，才确认是脱毒苗。3.2 脱毒种蒜 从繁殖脱毒苗开始，经逐代繁殖 增加种蒜数量的种蒜生产体系生产出来的。分原原种、原种、生产用种三个级别。3.2.1 原原种p r e-e l i t e 用脱毒苗在防虫网室、温室条件下生产出的符合质量标准的种蒜。3.2.2 原种e l i t e 用原原种作种蒜，在良好隔离条件下生产出的符合质量标准的种蒜。3.2.3 生产用种 c e r t i f i e d s e e d 用原种作种蒜，在隔离条件下生产出的符合质量标准的种蒜。3.3 病毒病株允许率 脱毒种蒜繁殖田中 病毒病株的允许比 率。4 检测对象 洋葱黄矮病毒(O n i o n y e l l o w d w a r f v i r u s,O Y D V);大蒜普通潜隐病毒(G a r l i c c o m m o n l a t e n t v i r u s,G C L V),抽样组培苗抽样 脱毒核心材料:每株必须检测。5引51中华人民共和国农业部2 0 0 0 一 0 9 一 2 2批准2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 实施 ;N Y/T 4 0 5-2 0 0 05.1.2 扩繁苗:随机抽取 1%-2%的扩繁苗检测。5.2 田间抽样5.2.1 原原种和原种抽样:大蒜生长前、中、后期，在目 测全田的基础上，采用五点取样法，抽样数量为 一 一、0.1 h m，以 下2 0 0 株;。1 1-1 h m 5 o 0 株;超出1 h m 面积，划出另一检验区，按本规程规定面积取样。每株取叶片 1 一5g，低温保湿存放待检。5.2.2 生产用种抽样:抽鳌前一周，在 目测全田的基础上，采用随机取样法，0.1 h m，以下检验 2 点，每点 1 0 0 株;0.1 1 -1 h m，检验 5 点，每点1 0 0株;1.1-5 h m 检验 1 0 点，每点 1 0 0 株;超出5 h m 面积，划出另一检验区，按本规程规定的面积取样。取样方法及样品保存同5.2.1,5.3 商品种蒜抽样 没有经过田间检验的商品种蒜必须进行鳞茎检验。5.3.1 根据种蒜不同存放方式，采用分层设点或随机取样的方法，抽样数量见表 1,表 1 种蒜抽样数量标准表种蒜总量，k g抽样百分率，%抽样最低数量,k g(1 0 0 0 06-1 01 0 0 1 0 0 0 03-5注:不足抽样最低数量的全部作为混合样品。5.3.2 将第一次抽取的样品混合后进行二次抽样，随机抽取 1 0%的混合样品检测。6 检测方法双抗体夹心酶联免疫吸附检测法(D A S-E L I S A)按NY/T 4 0 1-2 0 0。中附录 A的方法执行。7质f要求凡酶联免疫检测呈阳性反应的为带毒种蒜。原原种:病毒病株允许率为。原种:病毒病株允许率Sz 0 0 o生产用种:病毒病株允许率(1 o%.