SNT 2475-2010 植物类病毒脱除处理规程.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 植物类病毒脱除处理规程犚 狌 犾 犲 狊狅 犳狆 犾 犪 狀 狋 狏 犻 狉 狅 犻 犱 狊 犲 犾 犻 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布食品伙伴网http:/书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准植物类病毒脱除处理规程 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元食品伙伴网http:/书书书前言本标准的附录 为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：李桂芬、王仁睿、马洁、李明福、张永江、魏梅生。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 食品伙伴网http:/植物类病毒脱除处理规程范围本标准规定了植物类病毒脱除处理方法。本标准适用于检验检疫行业、农业、林业对带有类病毒的植物繁殖材料的脱除处理。术语和定义下列术语和定义适用于本标准。类病毒脱除处理狏 犻 狉 狅 犻 犱犲 犾 犻 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀通过有效的方法，脱去植物带有的类病毒的过程。组织培养狆 犾 犪 狀 狋 狋 犻 狊 狊 狌 犲 犮 狌 犾 狋 狌 狉 犲在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体等繁殖材料，培养在人工培养基上，并在人工控制的环境中生长、分化、增殖至再生植株的过程。茎尖培养 狊 犺 狅 狅 狋 犪 狆 犻 犮 犲 狊 犮 狌 犾 狋 狌 狉 犲在无菌条件下剥取植物茎尖（顶端分生组织带个个幼叶原基），在人工控制的条件下分化再生的方法。低温处理 犾 狅 狑狋 犲 犿 狆 犲 狉 犪 狋 狌 狉 犲 狋 犺 犲 狉 犪 狆 狔将植物或植物组织置于低温环境下（），黑暗或光照条件下持续处理个月以上来抑制类病毒增殖的方法。无类病毒苗狏 犻 狉 狅 犻 犱 犳 狉 犲 犲 狊 犲 犲 犱 犾 犻 狀 犵 狊经过类病毒脱除处理过程和检测结果为阴性的再生种苗。原理 处理原则针对检验检疫或生产中发现植物携带管制的类病毒，一般可进行销毁处理。如因植物珍贵或应客户需求，需针对管制的类病毒实施脱除处理。植物类病毒脱除处理针对植物类病毒在植物体内分布不均匀、低温能够抑制类病毒增殖的特性，设计在低温条件下对植物进行处理加上茎尖分生组织培养，以脱去植物类病毒。仪器和用具 仪器 超净工作台。天平（）。犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m 解剖镜。光照培养箱。高压灭菌锅。计或 试纸。仪。分子杂交箱。电泳槽。用具 量筒。容量瓶。接种针。镊子。类病毒检测方法 生物学检测（指示植物法）。往返聚丙烯酰胺凝胶电泳 。方法。核酸杂交方法。类病毒脱除处理程序 植株的低温处理将植株放在条件下，在光照或黑暗条件下连续处理个月以上。材料剪取与灭菌剪取经过低温处理的植株茎尖 ，自来水冲洗 ，剥去外面的叶片。将茎尖置于超净工作台上，无菌条件下进行消毒：的乙醇浸泡，已灭菌的蒸馏水冲洗次次；再用 的升汞浸泡材料，滴入滴滴吐温，消毒时间 ，用灭菌的蒸馏水冲洗次次，每次 。将处理过的材料放入灭菌的培养皿中待用。茎尖剥离与接种将经过上一步处理过的茎尖放在解剖镜下，用已灭菌的解剖刀逐层剥去幼叶，直至出现顶端分生组织，将顶端分生组织和毗邻的个个幼叶原基切下，直立向上接种到适宜的固体培养基上。参见附录。试管苗类病毒检测用上述类病毒的检测方法检测试管苗，如果检测结果为阴性则初步定为脱类病毒试管苗，进行后期的扩繁和生根移栽，如果检测结果为阳性则不是脱类病毒试管苗，需要再进一步进行类病毒脱除处理。试管苗的扩繁与生根培养 试管苗的扩繁检测结果为阴性的试管苗可接种到扩繁培养基上进行增殖。生根培养试管苗长至 时转至生根培养基进行培养。试管苗的驯化将生长茁壮、有片片叶的试管苗移至温室进行炼苗。犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m 移栽 过渡培养取出试管苗，洗净根部培养基，移入适宜的栽培基质中，刚移栽后的试管苗要避光，湿度：，温度：白天 ，夜间 。避光保湿培养后在正常的光照、温湿度条件下进行培养。移入土壤过渡培养周后，将生长茁壮的植株移入土壤。移栽后植株的类病毒复检移栽后的脱类病毒植株长到一定大小需要进行类病毒复检，若复检结果与第一次结果相同，均为阴性，则可认定为脱类病毒苗；若复检结果与第一次结果不同，为阳性，则该再生苗不是脱类病毒苗，需要进一步进行类病毒脱除处理。扩大繁殖经过上述过程，进行两次类病毒检测的无类病毒植株作为健康母株，进行扩大繁殖，完成整个类病毒脱除处理过程。犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m书书书犛 犖犜 附录犃（资料性附录）常见植物的类病毒脱除方法表 犃 植物种类常见类病毒检测方法类病毒脱除方法马铃薯马铃薯纺锤块茎类病毒（犘 狅 狋 犪 狋 狅 狊 狆 犻 狀 犱 犾 犲 狋 狌 犫 犲 狉狏 犻 狉 狅 犻 犱）生物学检测（指示植物法）；往返聚丙烯酰胺凝胶电泳 ；方法；核酸杂交方法低温处理结合茎尖培养：马铃薯植株放在 条件下，每天给与，的光照。处 理 时 间 为个月，剥取 茎 尖；马 铃 薯 块 茎 放 在、黑暗条件下，处理时间为个月，剥取茎尖菊花菊花 矮 化 类 病 毒（犆 犺 狉 狔 狊 犪 狀 狋 犺 犲 犿 狌 犿狊 狋 狌 狀 狋狏 犻 狉 狅 犻 犱）菊花褪绿斑驳类病毒（犆 犺 狉 狔 狊 犪 狀 狋 犺 犲 犿 狌 犿犮 犺 犾 狅 狉 狅 狋 犻 犮犿 狅 狋 狋 犾 犲狏 犻 狉 狅 犻 犱）生物学检测（指示植物法）；往返聚丙烯酰胺凝胶电泳 ；方法；核酸杂交方法低温处理结合茎尖培养：马铃薯植株放在 条 件 下，每 天 给 与 ，的光照。处 理 时 间 为 个月，剥取茎尖啤酒花啤酒花潜隐类病毒（犎 狅 狆犾 犪 狋 犲 狀 狋狏 犻 狉 狅 犻 犱）生物学检测（指示植物法）；往返聚丙烯酰胺凝胶电泳 ；方法；核酸杂交方法低温处理结合茎尖培养：啤酒花植株放在、黑暗条件下，处理时间为个月以上，剥取茎尖犜犖犛书号：定价：元食品伙伴网http:/