SNT 2700-2010 母羊地方流行性流产补体结合试验操作规程.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准?母羊地方流行性流产补体结合试验操作规程?发布?实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前?言?本标准按照?给出的规则起草?本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口?本标准起草单位?中华人民共和国湖北出入境检验检疫局?湖北省农业科学院畜牧兽医研究所?本标准主要起草人?张汉协?刘泽文?陈平?徐涤平?段正赢?汪宏才?杨宜生?母羊地方流行性流产补体结合试验操作规程?范围本标准规定了母羊地方性流产?羊衣原体病?补体结合试验操作规程?本标准适用于母羊地方流行性流产的血清学诊断和流行病学调查?规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的?凡是注日期的引用文件?仅注日期的版本适用于本文件?凡是不注日期的引用文件?其最新版本?包括所有的修改单?适用于本文件?实验室?生物安全通用要求?缩略语下列缩略语适用于本文件?补体结合试验?设备?材料和试剂?器材?试管?试管架?水浴箱?型微量滴定板?孔?孔?补体?由指定单位供应?按说明书使用和保存?溶血素?由指定单位供应?敏化红细胞?制备及使用方法见附录?中表注?绵羊红细胞悬液?制备方法见附录?抗原和标准阳性血清?阴性血清?由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所供应?按说明书使用?采样?送检和处理按常规方法采血?分离血清?要求不溶血?无腐败?在血清中加入?硫柳汞或?叠氮钠防腐?保存?试验前需?灭活?操作步骤?预备试验?补体效价滴定?试验前应对补体进行效价滴定?滴定方法见附录?溶血素效价滴定?试验前应对溶血素进行效价滴定?以后每隔?个月测定效价一次?滴定方法见附录?抗原?阳性血清效价滴定?抗原和阳性血清效价滴定的方法见附录?正式试验?包括试管法和微量法?试管法?按表?的程序操作?试验要同时设抗补体对照?阳性血清对照?阴性血清对照?抗原对照?溶血素对照和生理盐水对照?表?补体结合试验?试管法?单位为毫升成分被?检?血?清各?项?对?照试?验?管抗补体对照阳性血清阴性血清抗原对照溶血素生理盐水效价?个工作量?个工作量血清?工作量抗原?单位补体?生理盐水?混匀?感作?取出后?水浴?敏化红细胞?混匀?水浴?结果判定?全不溶全不溶?溶?溶?溶全溶全溶全不溶全溶全溶全溶全不溶?微量法?用?型?孔反应板?按表?的程序操作?试验同时设抗补体对照?阳性血清对照?阴性血清对照?抗原对照?溶血素对照和生理盐水对照?表?补体结合试验?微量法?单位为微升成分被?检?血?清各?项?对?照试?验?孔抗补体对照阳性血清阴性血清抗原对照溶血素生理盐水效价?个工作量?个工作量血清?工作量抗原?单位补体?生理盐水?表?续?单位为微升成分被?检?血?清各?项?对?照试?验?孔抗补体对照阳性血清阴性血清抗原对照溶血素生理盐水效价?个工作量?个工作量混匀?感作?取出后?水浴?敏化红细胞?混匀?水浴?结果判定?全不溶全不溶?溶?溶?溶全溶全溶全不溶全溶全溶全溶全不溶?结果判定?在最后一次?水浴?或汽浴?后?立即进行试验结果判定?各组对照为如下结果时试验方成立?否则应重复试验?被检血清抗补体对照?完全溶血?阳性血清加抗原对照?完全抑制溶血?阴性血清加抗原对照?完全溶血?抗原抗补体对照?完全溶血?溶血素对照?完全溶血?生理盐水对照?完全抑制溶血?判定标准?血清效价以?溶血?为判定终点?被检血清效价?判为阳性?判为阴性?判为可疑?重复试验仍为可疑?则判为阳性?附?录?规范性附录?补体效价滴定?用生理盐水将补体作?稀释?按表?测定补体效价?表?补体效价滴定单位为毫升组别抗原生理盐水试管号?二单位抗原?生理盐水?补体?混匀?水浴?敏化红细胞?混匀?水浴?结果示例?全不溶?溶?溶?溶全溶全溶全溶 全不溶?溶?溶?溶全溶全溶全溶?注?敏化红细胞系由?公绵羊红细胞悬液加等量的?个工作单位的溶血素?放?水浴?后再滴加?补体效价的计算?能使红细胞完全溶血的补体量即为?个补体单位?表?所示第?管?为一个补体单位?而正式试验使用两个补体单位?原补体在使用时应稀释的倍数按下列公式计算?原补体应稀释倍数?使用时每管加入量?滴定时补体稀释倍数一个单位量?倍?附?录?规范性附录?绵羊红细胞悬液的制备?颈静脉采取成年健康公绵羊血液?以常规方法脱纤后?按?加入红细胞保存液?混匀后分装成?一瓶?封固后放?冰箱可保存?个周?用前用生理盐水洗涤?次?最 后 一 次 在?离心?按红细胞泥容量加生理盐水配成?红细胞悬液?红细胞保存液配方?葡萄糖?氯化钠?柠檬酸三钠?柠檬酸?蒸馏水加至?灭菌?备用?附?录?规范性附录?溶血素效价滴定?先将溶血素?稀释?含甘油的溶血素加?生理盐水?按表?稀释成不同倍数?再按表?操作?表?溶血素稀释单位为毫升成?分管号及稀释倍数?生理盐水?溶血素?溶血素?表?溶血素效价测定单位为毫升成?分管号及稀释倍数?对照?补体?溶血素?红细胞稀释熔血素?生理盐水?补体?红细胞?充分摇匀?水浴?结?果?全溶全溶全溶全溶全溶全溶全溶?溶?溶 全不溶全溶全不溶?以完全溶血的溶血素最高稀释倍数为一个溶血单位?表?所示为?倍?正式试验时?使用两个溶血素单位?则本例溶血素稀释倍数为?倍?附?录?规范性附录?抗原?阳性血清效价滴定方法?取?支试管?排成纵横各?排的方阵?第?排缺?管?抗原和阳性血清分别从?作倍比稀释?阴性血清作?稀释?设抗原?血清和生理盐水对照?每管按不同稀释度的要求加入阳性血清各?抗原对照组一排不加血清?而用?生理盐水代替?每管再按不同稀释度的要求?各加入不同稀释倍数的抗原?血清对照不加抗原?而用?生理盐水代替?每管中加入?含?单位补体?摇匀?置?冰箱感作?次日取出放?水浴?每管加入敏化红细胞?混匀?置?水浴?后?取出静置?判定结果?效价判定?能与最高稀释度的阳性血清呈现完全抑制溶血?反应的最高抗原稀释度?即为抗原效价?一个工作量?如表?所示?抗原效价为?阳性血清效价为?一个血清工作量?表?抗原阳性血清滴定结果?举例?抗原稀释倍数血清稀释倍数?阴性血清?抗原抗补体对照?血清抗补体对照?盐水对照?