SNT 2521-2010 单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法.pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法犛 犲 狉 狅 狋 狔 狆 犻 狀 犵狅 犳犔 犻 狊 狋 犲 狉 犻 犪犿 狅 狀 狅 犮 狔 狋 狅 犵 犲 狀 犲 狊 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布食品伙伴网http:/书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元食品伙伴网http:/书书书前言本标准的附录 为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人：曾静、魏海燕、张西萌、王金花、陈广全、张惠媛、饶红、付溥博、畅晓辉、张昕、汪琦、马旭。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 食品伙伴网http:/单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法范围本标准规定了单核细胞增生李斯特氏菌的血清分型方法。本标准适用于对单核细胞增生李斯特氏菌进行血清分型，单核细胞增生李斯特氏菌的溯源可参照本方法。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 实验室生物安全通用要求设备和材料 台式离心机：犵。冰箱：。浊度计。加热器。接种针。试管：。试管架：适用于 试管。移液器：适用于，。恒温水浴：。无菌载玻片。生物安全柜。培养基和试剂 动力琼脂：见第 章。胰蛋白磷酸盐肉汤（）：见第 章。甲醛溶液。灭菌生理盐水：见第 章。含 甲醛生理盐水：见第 章。抗血清。抗血清。方法提要待测菌株应是经鉴定确证为单核细胞增生李斯特氏菌的纯培养物，单核细胞增生李斯特氏菌的抗血清与李斯特属其他种之间存在交叉反应现象，所以错误鉴定的或不纯的培养物，在进行血清型鉴定时会得出错误的结果；抗原，又称鞭毛抗原，抗原位于细菌鞭毛上，在鉴定 抗原时应使用有运动性犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m的菌株；应先鉴定 抗原，后鉴定 抗原。单核细胞增生李斯特氏菌 抗原和 抗原的关系见表。表单核细胞增生李斯特氏菌血清型抗原结构血清型 抗原 抗原，（），（），（），（），检验流程单核细胞增生李斯特氏菌血清分型流程见图。图单核细胞增生李斯特氏菌血清分型程序图犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法 犎抗原鉴定 将活化的待测菌株用接种针垂直穿刺接种于 动力培养基，培养 。典型的单核细胞增生李斯特氏菌在 半固体培养基上呈伞状生长。挑取生长在 动力培养基伞状菌苔边缘，接种于 液体培养基，培养 。在 培养液中加入 甲醛溶液，使甲醛的终浓度为（在 的培养液中加入 的 甲醛溶液），处理菌体细胞。离心收集菌体，犵，离心 。重悬菌体细胞于含 甲醛生理盐水中，调整菌体细胞浓度 ，该菌悬液为标准菌悬液；也可以用经甲醛处理的单核细胞增生李斯特氏菌 菌悬液进行 抗原凝集反应，其凝集反应结果应与用 甲醛生理盐水洗涤的标准菌悬液相同。在 试管中分别加入 经稀释的 抗血清，和，与等体积经甲醛处理的菌悬液充分混匀，同时用 灭菌生理盐水代替抗血清作为阴性对照，水浴保温；在 水浴保温之后，用肉眼观察是否有凝集反应发生。凝集反应表现为：形成沉淀，上清液清澈，有凝集反应发生，为阳性反应，可判定相应 抗原；如无凝集反应发生，则可判断为阴性反应。犗抗原鉴定 将活化的待测菌株接种于 液体培养基，培养 ，犵，离心 收集菌体，如果用玻片法进行凝集反应，用 培养基洗涤菌体细胞一次；如果用试管法进行凝集反应，用含 甲醛生理盐水洗涤菌体细胞一次。玻片法 用含 甲醛生理盐水重悬菌体细胞，制成高浓度的菌悬液（菌悬液的浊度等于或高于 ），置 抗血清于灭菌玻片上，与等体积的菌体抗原充分混合，同时用，灭菌生理盐水与等体积的菌体抗原混合作为阴性对照。用手握住载玻片的两边，在黑色背景衬托下，接近灯光进行观察。如果凝聚反应不典型，用试管法进行凝集反应。试管法 试管法鉴定抗原的方法与鉴定 抗原的方法基本相同。所不同的是将等体积混合的抗血清和菌体抗原，保温后，在冰箱过夜，观察凝集反应结果；或是在 水浴保温过夜，观察凝集反应结果。血清型结果判定根据抗原和抗原凝集反应结果从表查到相应的血清型。安全措施为了保护试验室人员的安全，所有培养物和废弃物应小心处置。并按 中有关规定执行。犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m书书书犛 犖犜 附录犃（规范性附录）培养基和溶液配制犃 犛 犐 犕 动力琼脂犃 成分胰胨 多价胨 硫酸铁胺 硫代硫酸钠 琼脂 蒸馏水 犃 制法将上述各成分加热混匀，调 ，分装小试管，高压灭菌 ，备用。犃 胰蛋白磷酸盐肉汤（）犃 成分胰大豆琼脂 酵母抽提物 蒸馏水 犃 制法用孔径为 细菌过滤器过滤除菌。犃 生理盐水将 氯化钠溶解于 蒸馏水中，分装，高压灭菌 ，。犃 含 甲醛的生理盐水将 氯化钠溶解于 蒸馏水中，加 的甲醛，分装，高压灭菌 ，。犜犖犛书号：定价：元食品伙伴网http:/