rI中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1421-2004猪水疙病病毒微量血清中和试验Micro-serumneutralizationtestforswinevesiculardiseasevirus2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局SN/T1421-2004..J‘.曰‘.ol1青本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录.本标准由国家认证认可监督委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国珠海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:杨素、潘文波、廖秀云、冯家望。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。SN/T1421-2004猪水疙病病毒微t血清中和试验范围本标准规定了猪水疙病病毒微量血清中和试验方法。本标准适用于猪水疙病病毒中和抗体的检测。2缩略语下列缩略语适用于本标准2.1CPE:致细胞病变作用。TCID,o:半数细胞感染量。SVD:猪水疤病。原理特异性的血清中和抗体与病毒结合后，能使病毒失去对敏感细胞的感染能力，从而阻止病毒的繁殖。这一反应不但表现为一种病毒只能被相应的免疫血清所中和，而且还表现在中和一定量的病毒，必须有一定效价的免疫血清。本标准规定的中和试验是以定量病毒稀释血清为基础，当血清能阻止定量病毒50%致细胞病变能力时，其血清的稀释度即为其效价。因而本中和试验是一种定量测定猪水疙病血清抗体的方法。试荆和材料4,1本标准所用试剂配制见附录A,4.2本标准试剂除特殊规定外，均指分析纯试剂。4.3本标准所用试剂、玻璃器皿除有特殊规定外，均需高压灭菌。4.4病毒:用经蚀斑法纯化并经血清学鉴定的猪水疙病病毒作为标准病毒。4.5标准血清:标准阴性血清采用无SVD病毒抗体的猪血清，标准强阳性和弱阳性血清采用SVD病毒感染发病后康复的猪血清。4.6细胞系:IB-Rs-2传代细胞系.4.7细胞培养液:含10%胎牛血清(经560C,30min灭能)及抗生素的细胞培养液。4.8细胞维持液:含2纬胎牛血清(经56-C,30min灭能)及抗生素的细胞维持液。4.9细胞分散液。4.10固定液。4.11染色液。5器械和设备5.1二氧化碳培养箱、微量振荡器、倒置显微镜、冰箱、超声波细胞破碎仪.5.2100mL细胞培养瓶、96孔微量细胞培养板、吸头、多道可调移液器、单道可调移液器.SN/T1421-20046预备试验6.1将SVD病毒接种IB-Rs-2细胞单层，37℃吸附Ih后加人维持液，置5%二氧化碳培养箱于37`C培养，接种24h后用倒置显微镜逐日观察，待CPE达75%以上，冻融一次或置冰浴中用超声波处理(40pA,lmin),2000r/min离心20min，上清液分装小瓶，每瓶1mL，置一70℃保存备用。6.2病毒毒价的测定及其工...
