JJF（新）88-2022 快速核酸检测仪温度参数校准规范.docx

新疆维吾尔自治区地方计量技术规范 JJF（新） 88－2022 快速核酸检测仪温度参数校准规范 Calibration Specification for Temperature Parameter of Rapid Nucleic Acid Analyzers 2022-12-14发布 2023-06-14实施 新 疆 维 吾 尔 自 治 区 市 场 监 督 管 理 局 发 布 JJF（新） 88－2022 JJF（新）88－2022 快速核酸检测仪 温度参数校准规范 Calibration Specification for Temperature Parameter of Rapid Nucleic Acid Analyzers 归 口 单 位：新疆维吾尔自治区市场监督管理局 主要起草单位：新疆维吾尔自治区计量测试研究院 参加起草单位：新疆医科大学附属中医医院 新疆医科大学附属肿瘤医院 本规范委托起草单位负责解释 本规范主要起草人： 麻 锐（新疆维吾尔自治区计量测试研究院） 卓 华 (新疆维吾尔自治区计量测试研究院) 薛文艳（新疆维吾尔自治区计量测试研究院） 参加起草人： 徐菲莉(新疆医科大学附属中医医院) 封 敏(新疆医科大学附属肿瘤医院) 杨 丽(新疆医科大学附属中医医院) 陈新健(新疆医科大学附属肿瘤医院) I 目 录 引言 …………………………………… ……………………………（Ⅲ） 1 范围 ……………………………………………………………………（1） 2 引用文件 ……………………………………………………………………（1） 3 术语 …………………………………………………………………………（1） 4 概述 ……………………………………………………………………（2） 5 计量特性 ……………………………………………………………………（2） 6 校准条件 ……………………………………………………………………（2） 6.1 环境条件 ……………………………………………………………………（2） 6.2 测量标准及其他设备 ……………………………………………………（3） 7 校准项目和校准方法 ……………………………………………………………（3） 7.1 校准项目………………………………………………………………………（3） 7.2 校准方法 ……………………………………………………………………（3） 8 校准结果表达 ……………………………………………………………………（8） 9 复校时间间隔 …………………………………………………………………（9） 附录A校准结果记录参考格式……………………………………………………（10） 附录B校准证书内页参考格式……………………………………………………（12） 附录C温度偏差校准结果的不确定度评定模型 ………………………………（14） 1 引 言 本规范是以JJF1071-2010《国家计量校准规范编写规则》、JJF1001-2011《通用计量术语及定义》和JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》为基础性系列规范进行编写。 本规范包含了对快速核酸检测仪温度、时间物理参数的计量要求和具体校准项目。计量性能主要包括温度偏差、平均升温速率、平均降温速率、最大温度过冲量、温度波动度、温度持续时间准确性的具体要求。 本规范为首次发布。 III JJF（新）88－2022 快速核酸检测仪温度参数校准规范 1 范围 本规范适用于基于实时荧光PCR技术、恒温核酸扩增技术的快速核酸检测仪（以下简称检测仪）的温度参数的校准，其他类似设备也可参照本规范进行校准。 2 引用文件 JJF 1527-2015 聚合酶链反应分析仪校准规范 YY∕T 1173-2010 聚合酶链反应分析仪 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文件， 其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。 3 术语和计量单位 3.1 实时荧光PCR real-time fluorescence polymerase chain reaction 一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的技术，由变性——退火——延伸三个基本反应步骤构成，扩增的过程中荧光染料能同步整合在产物上，可以通过荧光信号的强弱，进行实时检测。 3.2 恒温核酸扩增 thermostatic nucleic acid amplification 在目标基因的特定区域设计特异性引物，并使用链置换DNA聚合酶在恒温条件下保温数十分钟以实现核酸扩增的方法。 3.3 温度偏差 temperature deviation 恒温过程中模块内实测温度平均值与设定温度之差。 3.4 平均升温速率 mean heating rate 检测仪模块升温过程中，单位时间内上升温度平均值，单位℃/s。 3.5 平均降温速率 mean cooling rate 检测仪模块降温过程中，单位时间内下降温度平均值，单位℃/s。 3.6 最大温度过冲量 Maximum temperature overshoot 检测仪模块温度从基础升温至设定温度时，模块内实际温度超出设定温度的温度值。 3.7 温度波动度 temperature fluctuation 恒温过程中模块内实测温度随时间的变化量。 3.8 温度持续时间准确性 temperature duration accuracy 实测的温度持续时间与设定的温度持续时间的相对偏差。 4 概述 检测仪通常是指基于实时荧光PCR技术、恒温核酸扩增技术的便携式的检测仪器，在现场从生物体上取得待检测的样品，立即开展检测，它将多步骤的核酸检测方法整合到一个设备，在更短时间内完成对核酸分子的扩增，从核酸的特征和核酸复制、转录或翻译水平中分析核酸表达的功能，达到对生物体的疾病做出诊断。快速核酸检测仪技术和方法的核心是将核酸提取、扩增和检测整合于一体并同时进行，用户只需要将样本加入该系统，自动完成检测和结果分析，这极大地简化了传统的核酸检测。检测仪主要由样品载台、热循环部件、光学检测部件、控制模块、显示模块等部分组成。 5 计量特性 检测仪温度参数的技术要求见表1。 表1 检测仪温度参数的技术要求 校准项目 技术要求 类型 实时荧光PCR技术 恒温扩增技术 温度偏差 ≤±0.5℃ 平均升温速率 ≥1.5℃/s - 平均降温速率 ≥1.5℃/s - 最大温度过冲量 ≤1.0℃ - 温度波动度 - ±1.0℃ 温度持续时间相对误差 ≤±5% - 注：1.以上所有指标不用于合格性判别，仅供参考。 6 校准条件 6.1 环境条件 环境温度：(15～30)℃； 相对湿度：不大于85%； 大气压：(70～110)kPa； 供电电源：电压：AC 220±22V，频率：50±1 Hz； 6.2 测量标准及其他设备 测量标准及其他设备技术要求见表 2。 表2 测量标准及其他设备技术要求 名称 测量范围 技术要求 快速核酸检 测仪校准装置 （0～120）℃ 温度传感器： 分辨力：不低于0.01 ℃ 最大允许误差：±0.1℃ 采样时间间隔：≤0.1s / 采用温度记录器的记录时间作为快速核酸检测仪时间测量标准 分辨力：不低于0.1s 最大允许误差：±1s / h 7 校准项目和校准方法 7.1校准项目 见表 3。 表 3 快速核酸检测仪校准项目 项目 实时荧光 PCR 技术 恒温扩增技术 温度偏差 + + 平均升温速率 + - 平均降温速率 + - 最大温度过冲值 + - 温度波动度 - + 温度持续时间相对误差 + - 注：+表示应校准；-表示不校准。 7.2 校准方法 7.2.1外观检查 校准前对快速核酸检测仪目测进行外观检查，外观应符合以下要求:外形结构应完好，标识清晰，应标明设备的名称、型号、规格、制造商、出厂编号、制造年月等明确标识。 7.2.2 测量点位置 将快速核酸检测仪校准装置放置于被测检测仪模块中，校准装置可选择对单个模块或多个模块分别进行校准见图1。 图1 独立模块快速核酸检测仪布点示意图 非独立控温的检测仪作为一个整体进行温度校准，以检测仪8通道和16通道为例，布点遵循均匀分布的原则，见图2（a）、图2（b），每增加8通道应增加3个温度校准点。 图2（a）检测仪（8通道）布点示意图 图2（b）检测仪（16通道）布点示意图 7.2.3 温度参数校准 校准时，采用实时荧光 PCR 技术检测校准程序见表3，采用恒温扩增技术的检测仪温度校准程序见表4。启动检测仪，打开工作舱门，根据模块数放入快速核酸检测仪校准装置，关闭舱门，测量软件设置采样间隔为0.1s，运行检测仪，校准装置采集并记录整个校准程序的温度和时间数据。 表3 检测仪（实时荧光 PCR 技术）校准程序 步骤 设定温度点 设定温度持续时间 1 30℃ 60s 2 95℃ 60s 3 30℃ 60s 4 90℃ 60s 5 50℃ 60s 6 70℃ 60s 7 60℃ 60s 8 30℃ 60s 表 4 检测仪（恒温扩增技术）校准程序 步骤 设定温度点 设定温度持续时间 1 58℃ 10min 2 65℃ 10min 3 95℃ 10min 7.2.4 温度偏差 检测仪设定好校准程序放入相应数量的温度传感器，启动运行，在稳定状态下，当温度达到校准程序设定温度点并充分稳定后，在规定时间内，实时记录检测仪各模块的测量值，共计n次。 温度偏差： (1) (2) (3) 式中： —检测仪模块温度偏差，℃； —温度传感器实测温度的平均值，℃； —检测仪模块设定温度，℃； —次测量温度平均值，℃； —温度传感器第i次测量值，℃； —测量次数； —温度传感器数量。 7.2.5 平均升温速率（实时荧光 PCR 技术） 检测仪从30℃升温至95℃，分别读取校准装置50℃和90℃的测量值，计算升温速率： (4) (5)