中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验4789.12一94GB4789.12-84GB储MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofClostridiumbotulinumandbotulinustoxin飞主题内容与适用范围本标准规定了肉毒梭菌及肉毒毒素的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒释品中肉毒梭菌及肉毒毒素的检验。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3.1离心机及离心管。3.2研钵及细沙。3.3温箱:300C,350C,370C,3.4显微镜。3.5厌氧培养装置:常温催化除氧式或焦性没石子酸除氧式。3.6吸管:1mL,10ml。3.7注射器:1mL,3.8平皿。3.9接种环。3.10载玻片。3.11小白鼠。4培养墓和试剂;.{厄肉培养基:GB4789.28中4.67,卵黄琼脂培养基:GB4789.28中4.68,明胶磷酸盐缓冲液:GB4789.28中3.23,肉毒分型抗毒诊断血清。胰酶:活力1:250,革兰氏染色液:GB4789.28中2.2.，J月q亡J八匕.…J口月﹃月﹃月﹃中华人民共和国卫生部1994一03一18批准1994一09一01实施GB4789门2一945检验程序肉毒梭菌及肉毒毒素检验程序如下:注:①报告(一):检样含有某型肉毒毒家。②报告〔二):检样含有某型肉毒梭菌。③报告(三):由样品分离的菌株为某型肉毒梭菌.如上所示，检样经均质处理后，及时接种培养，进行增菌、产毒，同时进行毒素检测试验。毒素检测试验结果可证明检样中有无肉毒毒素以及有何型肉毒毒素存在。对增菌产毒培养物，一方面做一般的生长特性观察，同时检测肉毒毒素的产生情况。所得结果可证明检样中有无肉毒梭菌以及有何型肉毒梭菌存在。为其他特殊目的而欲获纯菌株，可用增菌产毒培养物进行分离培养，对所得纯菌株进行形态、培养特性等观察及毒素检测，其结果可证明所得纯菌为何型肉毒梭菌。6操作步骤6.1肉毒毒素检测液状检样可直接离心，固体或半流动检样须加适量(例如等量、倍量或5倍量,10倍量)明胶磷酸盐缓冲液，浸泡、研碎，然后离心，取上清液进行检测。另取一部分上清液，调pH6.2，每9份加10%胰酶〔活力1:250)水溶液1份，混匀，经常轻轻搅动37℃作用60min，进行检测。肉毒毒素检测以小白鼠腹腔注射法为标准方法。204Gs4789.12一946.1，检出试验:取上述离心上清液及其胰酶激活处理液分别注射小白鼠2只，每只。.5mL，观察4d,注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24h内发病、死亡。主要症状为竖毛，四肢瘫软，呼吸困难，呼吸呈风箱式，腰部凹陷，宛若蜂腰，最终死于呼吸麻痹。如遇小鼠拌死以至症状不明显时，则可将...
