中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofListeriamoaocytogenesGB4789.30-941主肠内容与适用范围本标准规定了单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3.1温箱30℃和25℃。3.2天平。3.3500mL三角瓶。3.4接种环。3.5接种针。3.6载玻片。3.7盖玻片。3.8显微镜或相差显微镜。3.，平皿。3.10试管。3.11均质器。3.12无菌注射器。3.13吸管:1mL,10mL.3.14单核细胞增生李斯特氏菌标准株。3.15马红球菌。4培养垂和试荆含。.6%酵母浸膏的胰酪大豆肉汤(TSB-YE)含。.600酵母浸膏的胰酪大豆琼脂(TSA-YE)EB增菌液:见附录A3,LB增菌液(LB,,LB,):见附录A4,三糖铁(TSI)琼脂,GB4789.28中4.26,4.27:见附录A1:见附录A2妇424.34.445中华人民共和国卫生部1994一03-18批准1994一09一01实施GB4789.30-944.6SIM动力培养基:见附录A5.4.7血琼脂:GB4789.28中4.6.4.8改0的McBride(MMA)35}脂:见附录A5,4.9硝酸盐培养基:GB4789.28中3.17.4.10缓冲葡萄糖蛋白陈水(MR和VP试验用):GB4789.28中3.4.4.11糖发酵培养基:GB4789.28中3.2.4.12过氧化氢酶试验:GB4789.28中4.38,4.13盐酸ay咤黄(AcriflavineHCl)(Sigma).4.14蔡q酮酸钠盐(Naladixicacid)(Sigma).5检验程序单核细胞增生李斯特氏菌检验程序如下:增菌分离培养纯培养确证试验327GB4789.30-946操作步骤6.1样品的收集及处理无菌采取样品25g(mL)放灭菌均质器中加225mLEB和LB增菌液中，充分搅拌成均质。如不能及时检验，可暂存4℃冰箱。62增菌培养EB增菌液放30士1℃培养48h-7d,LB，增菌液225mL放30士10C，培养24h，取出0.1ml，加入10mLLB:增菌液中二次增菌。6.3分离培养将EB增菌液和LB:二次增菌液分离于选择培养基MMA琼脂平板上，培养30土1℃48h，挑选可疑菌落，用白炽灯45。角斜光照射平板，李斯特氏菌的菌落为灰蓝或蓝色，小的圆形的菌落。6.4选5个以上的上述可疑菌落接种三糖铁(TSI)琼脂和SIM动力培养基，培养于25士1℃，观察是否有动力，且成伞状或月芽状生长。一般观察2-7d，阳性者可做下一步鉴定。6.5纯培养将上述有动力、形成伞状者并在三糖铁琼脂培基上层、下层的产酸而不产硫化氢的可疑培养物接种于胰酪陈大豆琼脂培养基(TSA-YE)上，做纯培养供做以下鉴定。6.6染色镜检将上述可疑纯培养物做革兰氏染色并做...
