GB 4789.7-1994 食品卫生微生物学检验 副溶血性弧菌检验.pdf

中华 人 民 共 和 国 国家 标 准食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验47 89.7 一 9 4GB储副 溶 血 性 弧 菌 检 验GB 4 7 8 9.7-8 4Mi c r o b i o l o g i c a l e x a mi n a t i o n o f f o o d h y g i e n e E x a m i n a t i o n o f V i b r i o p a r a h a e m o l y t i c u s1 主题内容与适用范围 本标准规定了副溶血性弧菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。2 引用标准 G B 4 7 8 9.2 8食品 卫生微 生物学检验 染色法、培养基和 试剂3 设备和材料3.1 试管:2 0 mmX2 0 0 m m,1 5 m mX1 0 0 m m,3.2 吸管1 m L,5 m L,1 0 m L,3.3 平皿:皿底直径9 0 m m,3.4 广口瓶或三角瓶。3.5 电动均质器或乳钵。3.6 酒精灯。3.7 接种灯和接种环。3.9 试管架。3.1 0 载玻片。3.1 1 温箱。3.1 2 显微镜。4 培养墓和试荆4.14.24.34.44.54.64.74.84.9氯化钠结晶紫增菌液:按G B 4 7 8 9.2 8 中4.3 9 规定。氯化钠蔗糖琼脂:按G B 4 7 8 9.2 8 中4.4 0 规定。嗜盐菌选择性琼脂:按G B 4 7 8 9.2 8 中4.4 1 规定。3.5 0 0 氯化钠三糖铁琼脂:按G B 4 7 8 9.2 8 中4.4 2 规定。氯化钠血琼脂:按G B 4 7 8 9.2 8 中4.4 3 规定。嗜 盐 性试验培养基:按G B 4 7 8 9.2 8 中4.4 4 规定。3.5 0 0 氯化钠生化试验培养基:按G B 4 7 8 9.2 8 中4.4 5 规定。革兰氏染色液:按G B 4 7 8 9.2 8 中2.2 规定。甲基红试剂:按G B 4 7 8 9.2 8中3.4 规定。中华人民共和国卫生部1 9 9 4 一 0 3-1 8 批准1 9 9 4 一 0 9 一 0 1 实施G B 4 7 8 9.7 一9 44.1 0 靛基质试剂:按G B 4 7 8 9.2 8 中3.1 3 规定。4.1 1 V-P试剂:按G B 4 7 8 9.2 8 中3.4 规定。5 检验程序副溶血性弧菌检验程序如下:6 操作步骤6.1 分离培养:首先称取祥品2 5 g，加2 2 5 m L 3.5%灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜 盐菌选择性琼脂平板各I 个，同时取1 0 m L，加人1 0 0 m L 增菌液中，放3 7 0C 8 1 6 h 培养后，涂上述平板进行分离，于3 7 0C 1 8-2 4 h 培养后取出观察。6.2 挑取上述可疑菌落，转种3.5 0/n 氯化钠三糖铁斜面，3 7 C.2 4 h 观察结果。6.3 涂片镜检:将三搪铁培养基反应可疑者(底层变黄葡萄糖产酸不产气，斜面不变乳塘蔗糖不分解，有动力，不产生硫化氢)进行涂片革兰氏染色镜检形态。6.4 嗜盐性试验:将上述可疑培养物分别接种于不同浓度的盐膝水中，3 7 0C 2 4 h 培养后观察生长情况，在无盐和1 0 肠以上盐的陈水中不生长，在7%盐的陈水中生长良 好者进行下列有关试验。6.5 生化试验:分别接种各类生化培养基，放 3 7 C,除V-P,靛基质、甲基红试验培养4 8 h后加试剂观察外，其他均可在 2 4 h观察。G B 4 7 8 9.7 一 9 4表 1 副溶血性弧菌的生化学性状V-P靛基质赖氨酸鸟氮酸精氨酸溶血+十+/一+/牛一+酸气糖塘醉氢红产产糖糖露化基萄萄葡葡蔗乳甘硫甲注:+阳性;一阴 性;+/一多数阳 性，少数阴性 表 2 副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别 无盐陈水 泳动 硝酸盐，半乳搪昔 鼠李糖 甘露糖阿拉伯胶糖 肌醉 甘露醉 蔗糖 乳掩 VP 明胶 靛基质 鸟奴酸 精氨酸 赖氮酸葡萄糖产气 氧化酶名称盐陈水，%6 8 1 0 副榕血性弧菌V.p a r a h a e m o l y t i c u s 溶燕性弧菌V.a l g i n o l y t i c u s O,霍乱弧菌V.c h o l e r a e O,非O,霍乱弧菌V.c h o l e r a e n o n O,拟态弧菌V.mi mi c u s 河弧菌V.f l u i a l i s 创伤弧菌V.u u l u i f b u s 梅氏弧菌V.m e t s c h n i k a a i i 霍利斯弧菌V h o l l i s a eV.d a ms e l.+d十干d+十+d(d)+十+ld+d(d)+d十+(d)一+d+dd+十+dd+d+d d+d+d+d+dd一d+十+一d+注:十9 0%以上阳性，一9 0%以上阴性;d 1 1%-8 9%阳性认十)迟缓阳性;(d)1 1%-8 9 编迟缓阳性.7 动物试验 将上述各类反应的副溶血性弧菌接种3.5 氯化钠陈水，经3 7 0C 1 6-1 8 h 培养后，小鼠腹腔注射。，3 m L，观察2-3 d，将死亡小鼠 进行解剖并做分离培养。1 R 0G B 4 7 8 9.7 一 9 4附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人周桂莲。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。