DB52T 954-2014 辣椒品种抗疫病温室接种鉴定技术规程.pdf

ICS 67.080.01 B 31 DB52 贵州省地方标准 DB52/T 9542014 辣椒品种抗疫病温室接种鉴定技术规程 Rule for identification of pepper for resistance to pepper phytophthora blight 2014-10-30 发布 2014-11-30 实施贵州省质量技术监督局 发 布 贵 州 省 农 业 委 员 会 发 布 发 布 DB52/T 9542014 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 用具和试剂.2 5 育苗及接种.2 附录 A（资料性附录）辣椒品种抗疫病性鉴定结果记载表.5 附录 B（资料性附录）辣椒品种抗疫病鉴定结果汇总表.6 DB52/T 9542014 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009标准化指导原则 第1部分：标准的结果和编写给出的规则起草。请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由贵州省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：贵州省植物保护研究所。本标准主要起草人：杨学辉、袁洁、陈小均、吴石平、何海永、王莉爽、谭清群。DB52/T 9542014 1 辣椒品种抗疫病温室接种鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了辣椒抗疫病温室人工接种鉴定的术语和定义、用具和试剂、育苗及接种要求。本标准适用于贵州省辣椒品种及资源材料对辣椒疫病的温室人工接种抗性鉴定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5084 农业灌溉水质标准 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 辣椒疫病 Pepper phytophthora blight 由辣椒疫霉（Phytophthora capsici Leonian）侵染引起的植株根系、茎基部、茎枝分叉处变黑腐烂、枯死，果实变褐软腐、表面常有白色霉层等症状的辣椒病害。3.2 抗病性鉴定 Screening for disease resistance 通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。3.3 分离物 Isolate 采用人工方法从植物发病部位分离获得，并经过回接确认的在特定环境条件下培养的病原物。3.4 生理小种 Physiological race 病原物种内在形态、生化性状上无明显差异，但在一组鉴别品种上具有显著致病力差异的类群。3.5 人工接种 Artificial inoculation 在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物适当部位并使之发病的过程。3.6 DB52/T 9542014 2 接种体 Inoculum 用于人工接种鉴定的病原物或病原物的一部分，本文件特指辣椒疫霉孢子囊悬浮液，其浓度为1.2104个/ml。3.7 灌根接种 Irrigation root inoculation 用直径5 mm的玻璃棒在距植株2 cm处戳一小孔，将接种体注如孔内，每株灌入量3 ml。3.8 对照品种 Control variety 为检验试验结果的可靠性，在品种鉴定时附加的抗病品种和感病品种。3.9 病情指数 disease index 通过对植物个体病情级别的计算所获得的群体发病程度的数值化描述。4 用具和试剂 4.1 用具 冰箱、消毒锅、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、载玻片、试管、酒精灯、接种铲、光学显微镜、超净工作台、恒温生物培养箱、孔径规格为25 mm25 mm50 mm的塑料泡沫漂浮育苗盘、直径7 cm营养钵。4.2 试剂 10%Na3PO4、NaClO、(NH4)2SO4、K2SO4、普通过磷酸钙、青霉素、利福平、尿素、50%多菌灵可湿性粉剂。5 育苗及接种 5.1 育苗方法 参鉴品种（材料）育苗采用漂浮育苗盘育苗。辣椒种子用10%磷酸三钠溶液浸种20 min，用清水洗净，置于28恒温培养箱中催芽。选取发芽良好的种子单粒播于装有育苗基质的漂浮育苗盘内。育苗盘用5%次氯酸钠溶液消毒，其规格为76 cm35 cm5.5 cm、160孔/盘，育苗基质为泥炭、蛭石和膨化珍珠岩混合，各成分所占比例分别为6070、1520和1520（V/V/V），基质经高温蒸汽灭菌（121，30 min），播种后在辣椒种子上盖3 mm左右的育苗基质，压实，然后将播种的漂浮盘放入营养液中。营养液配方为：每100 kg清水加入50 g硫酸铵、15 g尿素、100 g普通过磷酸钙、50 g硫酸钾；配制营养液使用的清水应符合GB 5084的蔬菜类灌溉水质要求。在18 25 的自然条件下育苗。5.2 移栽及处理 辣椒苗4叶展平时单苗移栽到营养钵中，移栽后7天施一次1%尿素水溶液以保持辣椒苗长势旺盛。试验设3次重复，各材料顺序排列，每个重复每份材料10株苗，设感病和抗病品种对照。DB52/T 9542014 3 5.3 接种体准备 选取已分离鉴定属于不同生理小种的菌株回接到甜椒上复壮，待发病后从病果上直接挑取菌丝或切取一小块病组织置于选择性胡萝卜培养基（胡萝卜200 g榨汁，琼脂18 g，青霉素50 mg/L，利福平 100 mg/L，50%多菌灵可湿性粉剂50 mg/L，蒸馏水1 L）上，25 恒温培养3 d5 d，转接到胡萝卜培养基上扩繁，待10 d15 d产生孢子囊后，用消毒的毛笔和无菌水洗下孢子囊，过滤收集，将属于不同生理小种的菌株的孢子囊悬浮液混合，调整浓度为1.2104 个/ml。5.4 接种 5.4.1 接种期 辣椒苗6叶展平。5.4.2 接种及管理 接种前1 d灌透水，接种时用玻璃棒在距幼苗茎基部约2 cm处扎一深3 cm左右的孔，用移液器吸取 3 mL含量为1.2104/mL的孢子囊混合悬浮液注入孔中，置于温室中光暗交替培育。温室内白天为 26 28，夜间为20 24，每天光照12 h14 h，强度为15000 Lux左右，空气相对湿度75%左右。接种及发病期间保持营养钵基质湿度至饱和。5.5 病情调查 5.5.1 调查时间 接种后7 d10 d调查各级病株数，调查1次。5.5.2 分级方法 逐一调查每份材料的接种株，按照病情分级的症状描述记载病级，分级指标为：0级 无病；1级 幼苗茎基部轻微变黑，或个别叶片轻微萎蔫；3级 幼苗茎基部变黑达l cm2 cm，或半数以下叶片萎蔫，下部少数叶片脱落；5级 幼苗茎基部变黑超过2 cm，或半数以上叶片萎蔫、落叶明显；7级 幼苗茎基部变黑缢缩，除生长点外其余叶片全部萎蔫或脱落；9级 叶片全部萎蔫或植株枯死。5.5.3 病情指数 病情指数（DI）按以下公式计算：100DI总株数表数值调查标准的最高病级代该病级株数）（各级病级代表数值）病情指数（.(1)5.6 抗性评价 5.6.1 有效鉴定判定 同批次鉴定中，感病对照品种的病情指数50，抗病对照品种病情指数10时视为该批次鉴定有效。5.6.2 抗性评价标准 根据参鉴材料的病情指数确定其对辣椒疫病的抗性水平并作出评价：DB52/T 9542014 4 高抗（HR）：0DI5；抗病（R）：5DI10；中抗（MR）：10DI20；中感（MS）：20DI30；感病（S）：30DI50；高感（HS）：DI50。5.7 鉴定记载表格 辣椒品种抗疫病鉴定原始记录及结果记载表格见附录A、B，分析后作出品种抗性评价。DB52/T 9542014 5 A A 附 录 A（资料性附录）辣椒品种抗疫病性鉴定结果记载表 播种时间：接种时间：调查时间：调查人：记录人：病 级 编号 0级 1级 3级 5级 7级 9级 注：调查时根据调查标准逐株进行，用“正”字法进行记载。DB52/T 9542014 6 B B 附 录 B（资料性附录）辣椒品种抗疫病鉴定结果汇总表 编 号 品种名称 来 源 病情指数 抗病性评价 _ DB52/T 954-2014