DB63T 730-2008 无角陶赛特肉羊细管冷冻精液制作技术规程.pdf

ICS备案号：23197-2008青海省地方标准DB63DB63DB63DB63DB63/T 7302008无角陶赛特肉羊细管冷冻精液制作技术规程2008-07-08 发布2008-08-08 实施青海省质量技术监督局青海省质量技术监督局发布发布发布发布DB63/T 7302008I前言细管冻精冷配技术是解决养羊业中因购买和饲养种公羊费用高、优良公羊利用率低的有效措施之一，可减少疾病传播和公羊选择率低造成的品种退化。高品质细管冻精的制作是推广细管冷配这一先进繁殖技术、更好的使用优良种公羊、保证种公羊的质量，最大限度地发挥种公羊优良性状，全面快速提高养羊生产水平和经济效益的前提保证。制定该技术规程，使无角陶赛特肉羊细管冻精制作标准化、规范化，可有效保证无角陶赛特肉羊细管冻精的精液品质，提高冷配受胎率。特制定本规程。本规程的附录A、附录B均为规范性附录。本规程由青海省农牧厅提出并归口。本规程由青海省质量技术监督局批准。本规程起草单位：青海省家畜改良中心。本规程主要起草人：吴祥、胡宁玺、马元梅、赵小娟、常永梅、许山得、赵莉渲、谭建宁、薛晓蓉、莫延新、刘宁、潘顺利、董香菊。DB63/T 73020081无角陶赛特肉羊细管冷冻精液制作技术规程1范围本规程规定了无角陶赛特肉羊细管冻精制作过程中冷冻精液（以下简称“冻精”）的规格与质量、制作程序、冻精质量检查方法、冻精的包装、标记、贮存、运输。本规程适用于无角陶赛特肉羊的冻精制作和贮存。2术语与定义下列术语和定义适用于本规程。2.1采精用人工模拟且有自然交配感的工具，以获得公羊精液的方法。2.2射精公羊经性反射最终从阴茎射出混合液的过程。2.3射精量公羊一次采精时排出的精液量。2.4精液由精子和精清两部分组成的雄性生殖器外分泌物。精子悬浮在液状的精清中。2.5精液品质检查检查精液量、色、气味、密度、活力、存活时间，畸形率等。2.6精子密度每毫升精液中的精子数。2.7精子活力37环境下直线前进运动精子占精子总数的百分比。2.8精液稀释液保护精子延长其存活时间及增加精液容量的液体。2.9细管精液将精液用稀释液等温稀释、平衡后，分装入细管并封口，然后在液氮中快速冷冻。2.10精液贮存精液处理后至用于配种前需要保存的方法。2.11DB63/T 73020082精液解冻冷冻精液使用（输精）前的处理方法。3规格与质量3.1型式式式式剂量为0.25毫升细管剂型。3.2质量指标3.2.1解冻后精子活力不低于 0.35。3.2.2每剂量解冻后呈直线前进运动的精子数不低于 3000 万个。3.2.3解冻后的精子畸形率不超过 20%。3.2.4解冻后的精液无病原性微生物，每剂量中细菌落数不超过 800 个。4制作程序4.1冻精制作室的要求室内清洁卫生，做到无菌操作。不准存放损害精液的物品。器械的清洗和消毒按附录A进行操作。4.2采精4.2.1无角陶赛特种公羊用于生产冻精的种公羊应体质健壮，无农业部规定的动物疫病。4.2.2采精月龄和采精次数初次采精月龄为12月龄。成年陶赛特种公羊每周可采精4天5天；日采精两次(2次间隔30分钟)。4.2.3采精过程按附录B的方法进行。4.2.4合格新鲜精液质量精液呈乳白色稍带黄色、精子活力不低于0.6、每毫升精子密度不低于6亿、精子畸形率不高于15%。4.3稀释液的配制4.3.1药品试剂的标准配制冻精用的稀释保护剂，必须用经玻璃蒸馏器烧制的新鲜的双蒸馏水，卵黄应取自于无疫病鸡场的新鲜完整的鸡蛋（洗净蛋壳表面，用75%酒精棉球对蛋壳表面进行消毒，待酒精挥发后用蛋清分离器取出完整卵黄）。4.3.2推荐下列配方，作为细管冻精用稀释保护剂配方1：双蒸馏水100 毫升，柠檬酸钠3克，果糖3克，甘油12毫升，卵黄25毫升。配方2：双蒸馏水100 毫升，柠檬酸钠3克，葡萄糖3克，甘油12毫升，卵黄25毫升。4.3.3稀释液配制方法基础液的配制：先准确称取柠檬酸钠3克，果糖3克，放入容器为100毫升的量筒内，加双蒸馏水50毫升，用消毒过的玻璃棒搅拌，待溶解后再加双蒸馏水定容至100毫升，混匀后用滤纸过滤于三角烧杯中，扎好瓶口，置水浴锅中隔水煮沸消毒30分钟。第一液的配制：取冷却后（室温）基础液的75毫升于三角烧瓶中，加入卵黄 25毫升，用磁力搅拌器充分搅拌均匀。第二液的配制：取第一液88毫升，加入隔水煮沸消毒好的甘油12 毫升充分搅拌均匀。以上各稀释保护剂要现配现用，每100毫升加青、链霉素各10万单位。4.4精液处理4.4.1准备DB63/T 73020083凡接触精液的器皿均应放置于34恒温箱中，稀释液置34恒温水浴箱中备用。对盛装稀释精液的稀释管做明显标记。4.4.2镜检与密度测定采集的精液通过专用窗口传递入精液处理室后，取精液一小滴于载玻片上，加盖盖玻片后在38恒温装置的显微镜上评定活力。显微镜放大倍数为400倍。按精液密度测定仪测定的操作规程准确进行精液的密度测定。4.5精液的稀释、降温与平衡4.5.1稀释比例与稀释方法根据鲜精液的密度和活力确定相应的稀释比例。采用二次稀释法。将所加稀释液分为两次添加。首先加入不含甘油的第一液，加至稀释总量的一半，降温、平很衡后再加足含甘油的第二液。添加与精液等温的稀释液时应缓缓加入。4.5.2降温和平衡稀释后的精液，采用逐渐降温法。在 1 小时 1.5 小时内，使稀释精液的温度降到 45后，在同温的恒温容器内平衡 2 小时 3 小时。4.5.3细管精液的分装与冷冻4.5.3.1细管为无毒、耐低温的专用塑料管。分装时应采用与细管配套的器具。并按冷冻精液人工授技术操作规程的要求进行，保证清洁、无菌。4.5.3.2在低温柜中进行分装，细管分装后，须将口封严。分装后的细管即可冷冻。冻精的初冻温度为-110-130。冷冻时间为 5 分钟。精液分装前，应充分混匀，并检查精子活力。细管上所印字迹应清晰，信息（冻精生产单位、品种及羊号、冻精生产日期）齐全。5冻精质量检查方法5.1冻精解冻方式：40水浴8秒解冻。5.2冻精质量检查方法按GB/T 20557-2006中附录A部分进行。6包装、标记、贮存和运输6.1包装用无菌纱布袋包装，每袋包装量不超过50支。6.2标记包装袋外面，均应有明显的标记。注明无角陶赛特公羊号、生产日期或批号、数量、精子活力。盛装细管冻精的容器外面，均应有明显的标记。注明生产单位、无角陶赛特公羊号、精液制冻日期以及该批冻精的精子活力和份数。6.3贮存6.3.1 用液氮生物容器贮存，容器内液氮必须浸没冻精。6.3.2 应经常检查液氮生物容器的状况，如发现容器异常，立即将冻精转移到其他完好的容器内。6.3.3 取放冻精之后，应及时盖好容器塞，防止液氮蒸发或异物浸入。6.3.4 大型液氮生物容器，应有冻精分类存放位置的详细图表，分别注册，登记清楚，并应备有足够的液氮生物容器，严防不同品种和不同个体的冻精混淆。无继续贮存价值的冻精，妥善销毁。6.4运输冻精运输过程中要有专人负责，贮存器不得横倒、碰撞和强烈振动，保证冻精始终浸在液氮中。DB63/T 73020084附 录 A（规范性附录）器械的清洗和消毒A.1玻璃器皿使用后或新购置的，用自来水浸泡。洗涤时，先在加有洗涤剂的温热溶液中刷拭干净，再用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗，直至器皿光亮、无水滴附着为止。将洗净的玻璃器皿放入电热干燥箱，加热至 160后再衡温 60 分钟，自然冷却后待用。A.2假阴道使用后，用水冲洗去表面污物，在加有洗涤剂的温热溶液中用毛刷刷洗，并用水冲洗干净，再用蒸馏水逐个冲洗。将洗净的假阴道放在架子上，其上覆盖两层清洁纱布，凉干备用。A.3竹夹、瓷漏斗、金属镊子、止血钳、胶塞和吸管滴头等用 75%酒精棉球擦拭消毒，待酒精挥发后方能使用，冷冻架使用前用紫外线消毒 30 分钟。A.4盖玻片、载玻片，用后立即浸泡于水中，洗净后用柔软的布擦拭干净备用。A.5纱布应定期清洗、消毒。包装用的塑料细管、塑料管及纱布袋用紫外线消毒 30 分钟后方可使用。DB63/T 73020085附录B（规范性附录）无角陶赛特种公羊采精过程B.1台羊选择选择发情好的健康母羊作台羊，后躯应擦干净，头部固定在采精架上。训练好的公羊还可用作台羊、假台羊等都能采出精液来。B.2假阴道的准备将消毒过的内胎，用生理盐水棉球或稀释液棉球从里到外的擦拭，在假阴道一端扣上集精瓶（当室温低于 25时，集精瓶夹层内要注入 3035的温水）。在外壳中部生水孔注入假阴道容积约 2/3的 5055温水，拧上气卡塞，套上双联打气球打气，使假阴道的采精口形成三角形。最后把温度计插入假阴道内测温，温度在 3840为宜。在假阴道内胎的前 1/3 处，涂抹适量凡士林作润滑剂。B.3 采精操作采精前，将包皮周围擦干净。采精员蹲在台羊右侧后方，右手握假阴道，气卡塞向下，靠在台羊臀部，假阴道和地面呈 35 度角。当陶赛特公羊爬跨伸出阴茎时，左手轻托阴茎包皮，迅速地将阴茎导入假阴道内，当陶赛特公羊完成抬头、挺腰、前冲动作时，表示射精完毕。随着陶赛特公羊从台羊身上滑下时，将假阴道取下，立即使集精瓶的一端向下坚立，打开气卡塞放气，取下集精瓶，送操作室检查。DB63/T 73020086DB63/T 73020087DB63/T 73020088