DB 44T 360-2006 香蕉穿孔线虫检疫规程.pdf

ICSB国家质量技术监督检验检疫总局备案号：广东省地方标准DBDB44/T3602006香蕉穿孔线虫检疫规程Plant Quarantine Rules for Radopholus similis(Cobb)Thorne2006-10-12 发布2006-11-12 实施广东省质量技术监督局广东省质量技术监督局发布发布DB44/T 3602006I前言本标准的附录A、附录C、附录D和附录F为规范性附录，附录B和附录E为资料性附录。本标准由广东省农业厅提出并归口。本标准起草单位：广东省植物检疫站、华南农业大学。本标准主要起草人：陈忠南、谢辉、邵庆华、李小妮、吴仕豪、曹俐、周春娜、文艳华、李梅辉、任小平、王琳、陈淳。DB44/T 36020061香蕉穿孔线虫检疫规程1范围本标准规定了香蕉穿孔线虫检疫的术语、定义、原理、仪器、用具、药品、现场检验和抽样、实验室检测鉴定、标本的保存和疫情处理方法。本标准适用于香蕉穿孔线虫的检疫。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB15569 农业植物调运检疫规程中华人民共和国进出境动植物检疫法（1991年10月30日中华人民共和国主席令第五十三号公布，1992年4月1日起施行）中华人民共和国进出境动植物检疫法实施条例（1996年12月2日中华人民共和国国务院令第206号发布，1997年1月1日起施行）植物检疫条例（1992年5月13日中华人民共和国国务院令第98号发布施行）3术语和定义下列术语和定义（FAO/IPPC，2002）适用于本标准。3.1生长介质生长介质growing medium植物的根系在其中生长或用于此目的任何物质。3.2检验检验inspection由官方对植物、植物产品或其它限定物进行直观检查，以确定是否存在有害生物和（或）是否符合植物检疫法规。3.3检测检测test为确定是否存在有害生物或为鉴定有害生物而进行的除肉眼检查以外的官方检查。3.4监测监测surveillance通过调查、检验或其它方法收集和记录有害生物发生或不存在的数据的官方行动。3.5侵染侵染infestation在植物或植物产品上存在活的有害生物。侵染包括感染。3.6污染污染contamination在商品、储存场所、运输工具或容器中存在有害生物或其它限定物，但不会对其构成侵染。3.7DB44/T 36020062处理处理treatment官方认可的用于杀死、灭除有害生物或使其丧失繁殖能力的措施。3.8铲除铲除eradication应用植物检疫措施将一种有害生物从一个地区彻底消除。3.9封锁封锁containment在受污染的地区及其周围，实施植物检疫措施以防止有害生物的扩散。4原理香蕉穿孔线虫的形态学特征（附录A）及其寄主范围、地理分布、生物学特性、为害症状和传播途径（附录B）是香蕉穿孔线虫检疫方法的依据。5仪器、用具及药品5.1仪器、用具5.1.1采样用具铲、枝剪、砍刀、聚乙烯塑料袋、油性笔、标签、记录本等。5.1.2线虫分离用具漏斗（直径10cm14cm）、乳胶管、止水夹、浅筛盘、网筛（60目、400目）、试管、培养皿、线虫分离纸或面巾纸、漏斗架、小型搅拌机等。5.1.3标本制作、鉴定仪器和用具解剖镜、光学显微镜、凹玻片、平玻片、盖玻片、玻璃丝、酒精灯、恒温水浴锅、恒温培养箱、电热板、吸管、挑虫针、镊子、干燥器、打孔器等。5.2药品福尔马林（40%甲醛）、甘油、无水乙醇、蒸馏水、苯酚、乳酚、中性树胶、石蜡、硅胶、CaCl2等。6现场检验和抽样6.1现场检验内容在种植、销售场地，对香蕉穿孔线虫的寄主植物进行调查，观察其生长状况，对地上部分表现附录B所述症状的植株，采集其根部和根际生长介质；若地上部无明显症状表现的，则随机抽取部分植株，观察其根部生长状况并采集根和根际生长介质。6.2抽样根据附录C的方法进行抽样，将现场检验抽样结果填入香蕉穿孔线虫疫情调查监测和抽样记录表（表1）。6.3样品保存采集的植物材料和生长介质样品放入聚乙烯塑料袋中，带回实验室分离，样品若不能及时分离，可将样品放在2025的室内，将袋口打开透气，并注意保湿和避免阳光照射，样品保存时间不要超过1个月。7实验室检测鉴定7.1样品中线虫的分离按附录D的方法分离样品中的线虫。7.2线虫标本的制作DB44/T 36020063根据附录E的方法，将分离得到的线虫杀死、固定、制成标本，进行鉴定和保存。7.3线虫的形态鉴定在显微镜下对线虫标本的形态结构特征进行观察、测量和记述，并与附录A记述的香蕉穿孔线虫形态特征进行比较。7.4结果判定以雌、雄虫的形态特征为依据，符合附录A记述的形态特征的线虫可鉴定为香蕉穿孔线虫。将实验室检测鉴定结果填入样品实验室检测鉴定报告（表2）。8标本的保存经鉴定为香蕉穿孔线虫的标本，制作成永久玻片保存，或热杀死后置于固定液中长期保存，并注明标本的来源（寄主、采集时间和地点、采集人）以及制作时间、制作人等。9疫情处理9.1报告和通知通过现场检验抽样和实验室检测鉴定，发现香蕉穿孔线虫后，根据中华人民共和国进出境动植物检疫法（1992年4月1日起施行）第六条和中华人民共和国进出境动植物检疫法实施条例（1997年1月1日起施行）第四条，当地人民政府应立即组织有关部门制定并实施紧急措施，同时向上级人民政府和国家植物检疫机关报告。另外，当地政府植物检疫机关签发香蕉穿孔线虫疫情处理通知单送达生产经营者。9.2发生点封锁范围的确定由当地植物检疫机关，根据植物检疫条例第五条，依据疫情发生的具体情况，划定疫情发生点封锁范围。9.3封锁生产经营者在接到疫情封锁处理通知后，应配合当地植物检疫机关，根据 植物检疫条例 第五条，对疫情发生点立即采取封锁措施。严格控制非疫情处理人员进出封锁区，禁止封锁区内的植物、土壤（或其它生长介质）、流水、工具、花盆等外传，并将疫情封锁区外围5m20m设为无植物隔离带，防止疫情扩散蔓延。9.4铲除按附录F的方法铲除封锁区内的疫情。9.5监测9.5.1对封锁区采取疫情铲除处理措施后，至少经 6 个月的监测，并不少于 2 次抽样检验和检测（每隔 3 个月抽样一次）。9.5.2监测抽样分为土壤样本和植株根、根际生长介质样本，封锁区内地面已被水泥覆盖硬化的，可不进行相对应的抽样。经其它处理已无植物的，仅监测土壤。土壤抽样方法是，1 hm2的地块，每次随机抽取不少于 30 个样本。根据 GB15569农业植物调运检疫规程，确定植株抽样的方法和数量，即在封锁区解封前、后，每次抽样数均按植株数10 000 株的抽 5%、植株数为 100 株10 000 株的抽 10%，抽样最低数为 100 株，不足最低数的全部抽样。隔离带每次随机抽取不少于 30 个土壤样本。9.5.3监测过程中如发现疫情，须重新实施疫情封锁、控制、铲除处理和疫情监测措施。9.6解封在封锁期满未有疫情发生，生产或经营者可向当地政府植物检疫机关申请解除封锁。经政府植物检疫机关组织专家组检查、论证疫情处理合格者，植物检疫机关发给香蕉穿孔线虫疫情处理合格和解封通知单，予以解封。封锁区解封后，还须对封锁区内及其周边隔离带的土壤及植物进行2年的监测，每隔6个月进行一次抽样检验和检测，确保彻底铲除疫情。监测期间需调出疫情点的植物须经当地政府植物检疫机关检疫合格并签发植物检疫证书才能调出，并登记去向。DB44/T 36020064表 1香蕉穿孔线虫疫情调查监测抽样记录表编号：生产/经营者（受检单位）地址及邮编联系/负责人联系电话调查日期抽样地点样品编号样品名称（根、土壤等）样品来源采集株数或点数调查数量或面积备注（植物中文名、学名、品种名称等）症状描述：发病率及分布情况：抽样方法和抽样比例：备注：抽样单位（盖章）：填表人（签名）：年月日生产/经营者现场负责人年月日注：本表一式两联，第一联抽样单位存档，第二联交受检单位。DB44/T 36020065表 2样品实验室检测鉴定报告编号：抽样编号样品号样品名称抽样日期采样地点样品备注（植物中文名、学名、品种名称等）送检日期送检人联系电话送检单位地址及邮编检测鉴定方法：检测鉴定结果：备注：鉴定人（签名）：审核人（签名）：鉴定单位盖章：年月日DB44/T 36020066附录A（规范性附录）香蕉穿孔线虫分类命名和形态特征A.1分类和命名A.1.1香蕉穿孔线虫的学名、异名、英文名和中文别名分别是：学名:Radopholus similis(Cobb,1893)Thorne,1949异名：Tylenchus similis Cobb,1893Anguillulina similis(Cobb)Goodey,1932Rotylenchus similis(Cobb)Filipjev,1936Tylenchus granulosus Cobb,1893Anguillulina granulosa(Cobb)Goodey,1932Tetylenchus granulosus(Cobb)Filipjev,1936Radopholus granulosus(Cobb)Siddiqi,1986Tylenchus acutocaudatus Zimmermann,1898Anguillulina acutocaudata(Zimmermann)Goodey,1932Tylenchorhynchus acutocaudatus(Zimmermann)Filipjev,1934Radopholus acutocaudatus(Zimmermann)Siddiqi,1986Tylenchus biformis Cobb,1909Radopholus citrophilus Huettel,Dickson&Kaplan,1984英文名:burrowing nematodebanana toppling disease nematode中文别名：相似穿孔线虫A.1.2香蕉穿孔线虫隶属于线虫门(Nematoda)、侧尾腺纲(Secernentea)、垫刃目(Tylenchida)、短体科(Pratylenchidae)、穿孔属(Radopholus Thorne,1949)。A.2形态特征（图A1）A.2.1测量值（Sher,1968）雌虫（n12）：L690（520880）m；a27（2230）；b6.5（4.77.4）；b4.5(3.55.2)；c10.6(813)；c3.4(2.94.0)；V56(5561)；口针长19(1720)m。雄虫(n5)：L630(590670)m；a35(3144)；b6.4(6.16.6)；b4.8(4.14.9);c9(810);c5.7(5.16.7)；口针长14(1217)m；交合刺长20(1922)m；引带长9(812)m。A.2.2形态描述雌虫：虫体呈线形，从虫体中部向两端略渐变细；热杀死后，虫体直或稍向腹面弯。体环纹清楚；侧区有4条深浅、粗细均匀的侧线，部分有网格，侧区中带与外带基本等宽；头部低，前端平圆，不缢缩或略缢缩，头环3个4个，头架骨化强；口针和基部球发达，食道发育正常，中食道球卵圆形、有显著的中食道球瓣，后食道腺长叶状从背面或背侧面覆盖肠；阴门显著，双生殖腺、对伸，受精囊球形、有杆状的精子；尾通常呈长圆锥形，偶尔呈近圆柱形，尾的平均长度通常超过52m，尾后部透明区平DB44/T 36020067均长度通常超过9m，透明区的环纹不规则，尾端部形态变化多样，多数呈规则或不规则锥圆形，末端钝，少数有一指状突或略分叉，尾端光滑或有不规则环纹。雄虫：虫体呈线形，热杀死后虫体直或略向腹面弯。头部高圆、呈球形，显著缢缩，具3个5个头环，头架骨化弱或不明显；侧线4条；口针和食道显著退化，口针基部球不明显或无；中食道球不清楚；单精巢，前伸，交合刺柄强壮，引带伸出泄殖腔、末端有小爪状