GBT 28086-2011 长针线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法.pdf

I C S6 5 0 2 0 0 1B1 6a 亘中华人民共和国国家标准G B T2 8 0 8 6-2 01 1长针线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法D e t e c t i o na n di d e n t i f i c a t i o no fL o n g i d o r u ss p p a sv i r u sv e c t o r s2 0 11-1 2-3 0 发布2 0 1 2-0 6-0 1 实施宰瞀徽鬻瓣警攒瞥星发布中国国家标准化管理委员会厘1 1 1前言G B T2 8 0 8 6-2 0 1 1本标准按照G B T1 1 2 0 0 9 给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(S A C T C2 7 1)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局和珠海市质量计量监督检测所。本标准主要起草人：陈其文、张卫东、廖力、蒋立琴、顾建锋、杜宇、徐淼锋、迟远丽、乐海洋、张慧娟、彭仁。1 范围长针线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法本标准规定了长针线虫属传毒种类的检疫鉴定方法。本标准适用于植物根系、土壤及栽培介质中长针线虫属传毒种类的检疫鉴定。2 规范性引用文件G B T2 8 0 8 6-2 0 1 1下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B T2 4 8 3 0 拟毛刺线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法S N T1 1 5 7 进出境植物苗木检疫规程S N T1 1 5 8 进出境植物盆景检疫规程3 长针线虫属(传毒种类)基本信息中文名：长针线虫属传毒种类。学名：L o n g i d o r u ss p p。英文名：v i r u sv e c t o r ss p e c i e so fN e e d l en e m a t o d e s。剑线虫属传毒种类隶属于线虫门N e m a t o d a(R u d o l p h i，1 8 0 8)L a n k e s t e r，1 8 7 7、无侧尾腺纲A d e n o p h o r e aL i n s t o w，1 9 0 5、矛线目D o r y l a i m i d aP e a r s e，1 9 4 2、长针线虫科L o n g i d o r i d a e(T h o r n e，1 9 3 5)F i l i p j e v，1 9 3 4、长针线虫属L o n g i d o r u s(M i e o l e t z k y，1 9 2 2)F i l i p j e v，1 9 3 4。长针线虫属传毒种类是植物根系的迁移性外寄生线虫，主要依靠土壤、介质土和带根苗木、球茎等寄主植物材料的调运传播。长针线虫属传毒种类的其他信息参见附录A。4 方法原理将现场检疫中发现的介质土、土壤以及植株，经漏斗法或浅盘法分离获得线虫，制成临时或永久玻片，显微镜下对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并测量数据，依据本标准描述的长针线虫属传毒种类形态鉴定特征与其基本生物学信息，按系统分类学方法，鉴定其生物学种类。5 仪器和用具仪器和用具按G B T2 4 8 3 0 执行。6 试剂试剂按G B T2 4 8 3 0 执行，分样筛选用3 0 0 目。C B r2 8 0 8 6-2 0117 现场检疫对苗木、球茎等寄主材料进行检查，注意观察苗木的生长状况、根部为害状，以及是否带介质、土壤等。重点选取植株矮化、萎缩，根畸形、粗短、侧根消失等症状的苗木及根际介质或土壤，如无可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送实验室检测。具体抽样比例按S N T1 1 5 7 和S N T1 1 5 8 执行。8 实验室检验8 1 线虫分离线虫分离按G B T2 4 8 3 0 执行。8 2 体视显微镜镜检分离获得的水样在1 0 倍以上体视显微镜检查，观察线虫的形态结构。8 3 标本制作标本制作按G B T2 4 8 3 0 执行。8 4 生物显微镜观察、摄影和测量应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影，重点包括整体形态、齿尖针、前唇区形态、侧器囊形态、雌虫阴道骨化结构及雄虫交合刺等，并在每张图片上加相应标尺。需观察、测量获得多岐检索表中各鉴定特征数字代码(参见附录B)，并计算a、6、C 和y 等值。9 形态鉴定特征9 1长针线虫属鉴定特征9 1 1 雌虫虫体细长，热杀死后虫体直到弯成C 形，有1 排2 排侧体孔。头部圆，连续或缢缩；侧器口小孔状、不明显，侧器囊袋状。齿尖针长、针状，不高度硬化，齿尖针基部平滑、不分叉，齿托长约为齿尖针长的三分之二、中等硬化，基部略厚但不呈凸缘状；齿针导环为单环，距头端的距离通常小于2 倍头宽，偶尔位置较后(距头端距离达齿尖针长的4 0)；有1 个背食道腺和2 个腹亚侧腺，背食道腺细胞核位于背食道腺开口后一段距离、小于腹亚侧腺细胞核；阴门横裂、位于虫体中部，双卵巢对伸、转折。尾短，呈弓圆锥形，端细圆或宽圆，有几对尾孔。9 1 2 雄虫长针线虫属部分种类雄虫未发现，雄虫双生殖腺、对伸，后精巢转折，交合刺粗大、向腹面弯，交合刺顶端部有短的附导片，斜纹交配肌显著、延伸至泄殖腔前几倍体宽处，泄殖腔区有1 对交配乳突(有的种有2 对3 对)，在其前有1 列腹中交配乳突，最多有2 0 个，有些种的部分腹中交配乳突交错排列成双排。长针线虫属与近似属的区别见表1。2表1长针线虫科各属的主要鉴别特征G B T2 8 0 8 6-2 01 1线虫种类鉴定特征长针线虫属类长针线虫属拟长针线虫属剑针线虫属拟剑针线虫属剑线虫属L o n g i d o r u sL o n g i d o r o i d e sP a r a l o n g i d o r u sX i p h i d o r u sP a r a x i p h i d o r u sX i p h i n e m a单环，位于单环，位于单环，位于单环，位于单环，位于双环，位诱导环于齿尖针齿尖针前部齿尖针前部齿尖针前部齿尖针后部齿尖针后部后部齿尖针基部平滑平滑平滑或叉状叉状叉状叉状齿托基部不呈凸缘状不呈凸缘状不呈凸缘状凸缘状凸缘状凸缘状小裂缝状或宽横裂侧器口孔状横裂缝状横裂缝状宽横裂缝状孔状缝状漏斗状至倒漏斗状至侧器囊袋状袋状袋状倒马镫状马镫状倒马镫状背食道腺小，位于背小，位于背小，位于背小，位于背小，位于背大，紧接核大小及其食道腺开口后食道腺开口后食道腺开口后食道腺开口后食道腺开口后背食道腺位置一段距离一段距离一段距离一段距离一段距离开口9 2长针线虫属传毒种类形态鉴定特征(参见附录B 和附录c)9 2 1 阿普尔长针线虫(L o n g i d o r u sa p u l u sL a m b e r t i，1 9 7 7)雌虫虫体细长(5 1m m 9 1m m)，热杀死后呈“c”字形；唇区扁平，有轻微缢缩，唇区宽度1 4,u m 1 7p m，虫体前端至诱导环的长度2 7p m 3 4,u m；侧器囊大多对称二裂；齿尖针弱，长度为9 1p m 1 1 2p m，齿托较长6 0p m 8 8,u m；尾部呈圆锥形。雄虫稀少。9 2 2L o n g i d o r u sa r t h e n s i sB r o w n，1 9 9 4雌虫虫体细长(5 1m m 7 6r a m)，热杀死后虫体弯曲呈“c”形；唇区钝圆，有轻微缢缩，唇区的宽度大约为1 6p“；侧器囊大而明显，存在二裂，延伸到口腔到导环距离的三分之二处；尾部钝圆锥形，尾长约为肛门处体宽。雄虫有发现，交合刺典型矛形。9 2 3 浙狭长针线虫(L o n g i d o r u sa t t e n u a t e sH o o p e r，1 9 6 1)雌虫虫体细长(5 2m m 7 5r a m)，热杀死后，虫体后半部形成稍大的弯曲，成“c”形。头部扁平，稍阔，有明显缢缩，缢缩处体宽为导环处体宽四分之三。侧器囊大，基部对称二裂，延伸到口腔到导环距离的二分之一，侧器囊几乎围绕着头部，侧器孔很小；齿尖针细长，是齿托的2 倍长，并与齿托有简单的交叉；尾部背面凸起，呈锥形，尾长是肛门处体宽的1 5 倍1 7 5 倍。雄虫稀有，交合刺长4 5p m。侧附导片末端二裂。9 2 4 短环长针线虫(L o n g i d o r u sb r e v l a n n u l a t u sN o r t o n，1 9 7 5)雌虫虫体细长(4 0m m 5 9r a m)，热杀死后常弯曲成C 形，有时不规则；体细，平均体宽5 0p m(除尾端部分)；阴门处有轻微突起，阴门孔倾斜；唇区扁平，有缢缩；侧器囊二裂，延伸到几乎接近导环，侧气孔模糊，位于唇区后部；尾部圆锥形，但在有些成虫尾端有短而宽的突起。雄虫未发现。3G B T2 8 0 8 6-2 01 19 2 5 草皮长针线虫(L o n g i d o r u sc a e s p i t i c o l aH o o p e r，1 9 6 1)雌虫虫体细长(5 2m m 8 2m m)，热杀死后虫体成“C”形；唇区圆球状，表面光滑，有缢缩，缢缩处体宽少于导环处体宽的二分之一；侧器囊大，不二裂，呈长瓶状或袋状，延伸到口腔到导环距离的三分之二处；齿尖针细长，与齿托有简单的交叉，齿托略微超过齿尖针长度的二分之一；尾部背面凸起，呈圆至钝圆锥形，尾长接近与肛门处的体宽。发现雄虫，交合剌长9 0 J m，有附导片，雄虫与雌虫的比例通常为1：2。9 2 6 折环长针线虫(L o n g i d o r u sd i a d e c t u r u sE v e l e i 曲，1 9 8 2)雌虫虫体细长(3 3m m 4 0m m)，热杀死后虫体直到弯成C 形。虫体前端至诱导环的长度5 0p m 6 4p m；齿尖针和齿托的长度分别为1 0 9p m 1 2 1 弘m 和5 5p m 6 6p m，尾部钝圆形。雄虫未发现。9 2 7 移去长针线虫 L o n g i d o r u se l o n g a t u s(d eM a n，1 8 7 6)T b o r n e，1 9 3 6 雌虫虫体细长(4 5m m 6 4r a m)，热杀死后虫体直到弯成“c”形。唇区扁平，微缢缩，缢缩处体宽占导环处体宽的二分之一到三分之二，口孔有1 6 个乳突；侧器囊大，袋状，延伸到口腔到导环位置的距离的二分之一处，侧器口孔状，难辨认，位于唇区基部；齿尖针细长，与齿托有细微交叉，齿托为齿尖针的二分之一长度；尾部背面凸起，腹面平或稍凹陷，呈圆锥形，尾长是肛门处体宽的1 倍1 3 倍。雄虫在大多数种群中通常稀有或没有。9 2 8 卫矛长针线虫(L o n g i d o r u se u o n y m u sM a l i，1 9 7 4)雌虫虫体狭长(6 0m m 7 6r a m)，热杀死后虫体向腹部弯区；唇区圆滑，前端扁平，唇宽约1 4p m，深度缢缩，口孔周围有1 6 个乳突；侧器囊大，延伸到口腔到导环位置的二分之一距离，侧器囊基部不明显，有轻微的二裂。齿尖针长而细，齿托约为齿尖针的三分之二。尾长是肛门处体宽的1 3 倍，尾部呈钝圆形。雄虫未发现。9 2 9 横带长针线虫(L o n g i d o r u sf a s c i a t u sR o c a，1 9 8 1)雌虫虫体细长(6 6m m 8 5r a m)，热杀死后稍呈“C”形。唇区5p m 6 z m 高，宽度1 2p m 1 4p m，口孔处呈圆形，不缢缩；侧器囊不对称二裂，两裂片间有一定深度；齿尖针细长，长度为1 0 2p m 1 1 9b L m，有齿托；尾部钝圆形。雄虫未发现。9 2 1 0 瘦头长针线虫(L o n g i d o r u sl