ICS65．020．01B16a亘中华人民共和国国家标准GB／T28073--2011南芥菜花叶病毒检疫鉴定方法DetectionandidentificatiOnofarabismosaicvirus2011—12—30发布2012-06-01实施宰瞀鳃鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会“”。刖置GB／T28073--2011本标准按照GB／Tl_1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。本标准主要起草人：廖富荣、于翠、张永江、陈红运、林石明、陈青、黄蓬英、沈建国、吴嫒。1范围南芥菜花叶病毒检疫鉴定方法GB／T28073--2011本标准规定了南芥菜花叶病毒血清学和分子生物学的检测鉴定方法。本标准适用于植物种子、鳞球茎、苗木和组培苗等植物及其产品中南芥菜花叶病毒的检测与鉴定。2南芥菜花叶病毒基本信息中文名：南芥菜花叶病毒。英文名：arabismosaicvirus。异名：arabismosaicnepovirus；hopnettleheadvirus(啤酒花荨麻病病毒)；rhubarbmosaicvirus(大黄花叶病毒)；raspberryyellowdwarfvirus(悬钩子黄矮病毒)；ashringandlinepatternviurs(白腊树环线状病毒)；rhabarber-mosaik-virus(大黄花叶病毒)；forsythiayellownetvirus(连翘黄网状病毒)；jasmineyellowblotchvirus(茉莉黄斑病毒)。英文缩写：ArMV。属豇豆花叶病毒科Comoviridae，线虫传多面体病毒属Nepovirus。南芥菜花叶病毒的其他信息参见附录A。3方法原理利用基于抗原抗体反应的双抗夹心酶联免疫吸附测定(DAS_ELIsA)、反转录和体外DNA扩增技术的反转录聚合酶链式反应(RT-PcR)进行检测鉴定。4主要仪器设备本标准的检测鉴定方法主要使用以下仪器设备：微量榨汁机、酶标仪、洗板机、微量天平(感量：0．001g)、PCR仪、荧光PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像仪、高速冷冻台式离心机、水浴槽、pH计等和各种量程的可调移液器(1000pL、200pL、100pL、20pL、lOlL、2pL)。5检测与鉴定5．1DAs_ELISA检测把0．5g～1．0g样品充分研磨或在液氮中研磨，按1：10比例加入样品提取缓冲液，转移到5mL离心管中，8000r／min离心5min，上清液作为DAS_ELISA的检测提取液。设置阴性对照、阳性对照和空白对照，阴性对照的种类和材料(如：种子或叶片)应该尽量与所检测样品类型相一致。具体操作过程见附录B。注：提取液在3h内使用，否则保存在4℃中。】GB／T28073--20115．2RT...
