DB51T 1367-2011 桑蚕中肠型脓病诊断技术规程.doc

ICS65.020.20 B47 备案号：32711-2012 DB51 四川省地方标准 DB 51/ T1367—2011 桑蚕中肠型脓病诊断技术规程 2011 - 12 - 28发布 2012 - 03 - 01实施 四川省质量技术监督局发布 DB51/ T1367—2011 目次 前言 II 1　范围 1 2　规范性引用文件 1 3　术语和定义 1 4　试剂 1 5　仪器、设备 1 6　诊断 1 前言 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局发布。 本标准起草单位：四川省蚕业管理总站、乐山市蚕种质量检疫检验站、内江市蚕种质量监督检验站。 本标准主要起草人：吴钢、张学清、马露芸、颜建平、何东。 3 桑蚕中肠型脓病诊断技术规程 1　 范围 本标准规定了桑蚕中肠型脓病诊断的技术要求。 本标准适用于四川省桑蚕中肠型脓病诊断。 2　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 DB/T 1207 桑蚕血液型脓病诊断技术规程 3　 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1　 桑蚕中肠型脓病(质型多角体病) midgut polyhedrosis 桑蚕中肠型脓病是质型多角体病毒寄生桑蚕中肠圆筒状细胞，并在细胞质内形成多角体的蚕病，又称质型多角体病。 4　 试剂 4.1　 盐酸溶液[c(HCl)=1mol/L]。 4.2　 分析用水按GB/T 6682规定执行。 5　 仪器、设备 普通光学显微镜；相差显微镜；冰箱；载玻片；盖玻片；乳钵；乳棒；解剖剪；镊子；吸管；量筒；烧杯；样品袋；冻存管（1.8 mL、5 mL）。 6　 诊断 6.1　 肉眼诊断 6.1.1　 外观观察 肉眼观察蚕在幼虫阶段是否具有下列症状。 a) 群体症状：群体发育显著不齐。 b) 个体症状：病蚕体躯瘦小，食桑与行动不活泼，常呆伏于蚕座周边或蚕沙中；大蚕病蚕体色灰白，胸部半透明；缩小、吐液及下痢；严重时排便伴乳白色粘液。 6.1.2　 解剖观察 用手挤压具有上述病症的病蚕尾部，观察是否有乳白色粘液排出；用解剖剪从背中线剪开，观察中肠后部是否有乳白色皱褶。 6.1.3　 初步诊断 幼虫阶段的蚕出现6.1.1表述的症状，挤压病蚕尾部有乳白色粘液排出，解剖观察中肠后部有乳白色皱褶，初步诊断为中肠型脓病。 6.2　 显微镜诊断 6.2.1　 样品采集 采集6.1.1表述的个体症状病蚕，置于样品袋或冻存管中。 6.2.2　 样品处置 6.2.2.1　 样品保存 样品随机分成2份，一份作检样，另一份作备样。样品置于0 ℃～4 ℃冰箱中，保存期30 d～60 d。 6.2.2.2　 样品制备 挤压病蚕胸部与尾部，挤出排泄液和肠液，涂抹于载玻片上，制成肠液玻片样本。 剪取病蚕中肠后部小块组织，置于载玻片上，滴入1滴～3滴蒸馏水，轻压，制成中肠组织玻片样本。 6.2.3　 显微镜检查 6.2.3.1　 直接检查法 将6.2.2.2镜检标本置于显微镜（15×40倍或16×40倍）下观察有无多角体，每个样本观察不少于20个视野。 6.2.3.2　 多角体与类似颗粒鉴别 用盐酸溶解法。取病蚕中肠组织，用蒸馏水清洗后置于乳钵中磨碎，将磨碎液涂抹于载玻片上，阴干，用吸管滴1滴～3滴盐酸溶液[c(HCl)=1 mol/L]；室温下放置3 min～5 min，用蒸馏水清洗去酸液，镜检（15×40倍或16×40倍）。类似颗粒溶解消失，多角体存在。 6.2.3.3　 核型多角体和质型多角体鉴别 用焦宁—甲基绿染色法。参见DB/T 1207 桑蚕血液型脓病诊断技术规程6.2.3.3。 6.2.4　 判定 镜检发现有多角体存在，呈六角形、不规则四角形及三角形，大小不整齐，样品可诊断为桑蚕中肠型脓病。 磨碎液样本用盐酸溶解，类似颗粒消失、多角体存在，且用焦宁—甲基绿染色，多角体呈红色，样品确诊为桑蚕中肠型脓病。 _________________________________