DB51T 1211-2011 桔实雷瘿蚊监测与鉴定技术规程.doc

65.020.01 B 16 DB51 四川省地方标准 DB 51/T 1211—2011 桔实雷瘿蚊监测与鉴定技术规程 2011 - 01-25发布 2011 - 03-01实施 四川省质量技术监督局发布 DB51/T 1211—2011 目次 前言 II 1　范围 1 2　规范性引用文件 1 3　术语及定义 1 4　原理 1 5　仪器及用具 1 6　试剂及溶液配制 2 7　虫情监测 2 8　室内检验鉴定 2 9　结果判定 3 10　样品保存及处理 3 附录A（资料性附录）　桔实雷瘿蚊的形态特征 5 附录B（资料性附录）　桔实雷瘿蚊形态特征图 6 附录C（资料性附录）　桔实雷瘿蚊为害症状描述 7 前言 本标准分为范围、规范性引用文件、术语及定义、原理、仪器及用具、试剂及溶液配制、虫情监测、室内检验鉴定、结果判定、样品保存及处理等部分。 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：四川省农业厅植物检疫站，成都市植保植检站，蒲江县植保植检站，丹棱县植保植检站。 本标准主要起草人：蒋辉、郭迪金、刘可、谭家兴、余坚志、汪世元、王黎明、唐建中。 II DB51/T 1211—2011 桔实雷瘿蚊监测与鉴定技术规程 1　 范围 本标准规定了桔实雷瘿蚊的虫情监测、室内检验鉴定、结果判定、样品处理及标本保存的技术要求。 本标准适用于桔实雷瘿蚊的监测与鉴定。 2　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB15569-2009 农业植物调运检疫规程 3　 术语及定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1　 监测 Monitoring 证实植物检疫状况的官方持续过程。是一种早期发现某种有害生物入侵定居的有效方法。 3.2　 桔实雷瘿蚊 Resseliella citrifrugis Jiang 属双翅目（Diptera）、瘿蚊科(Cecidomyiidae) 、瘿蚊亚科(Cecidomyiinae)、瘿蚊超族(Cecidomyidi)、雷瘿蚊属(Resseliella)昆虫。主要危害柑橘果实，以幼虫随被害果作远距离传播，其卵也可随果实传播，蛹则可随带土苗木进行远距离传播。 4　 原理 桔实雷瘿蚊的形态特征、传播途径、生物学特性及受害果实症状，为制定监测鉴定技术规程提供了依据。 5　 仪器及用具 5.1　 仪器 体视显微镜、干燥器。 5.2　 用具 0号画笔、试管、载玻片、盖玻片、解剖针、表面皿、养虫杯、养虫箱、小型喷雾器。 6　 试剂及溶液配制 除非另有说明，在检验中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水。 6.1　 试剂 试剂包括： ——无水乙醇 ——无水乙酸（冰醋酸） ——丁香油 ——加拿大胶 6.2　 溶液配制 溶液配制包括： ——二甲苯酚混合液 苯酚晶体＋二甲苯，（1＋3）。 ——10 %氢氧化钾溶液 称取10 g无水氢氧化钾溶于100 mL水中。 ——75 %乙醇溶液 量取无水乙醇75 mL加入25 mL水。 ——90 %乙醇溶液 量取无水乙醇90 mL加入10 mL水。 ——保存液 量取无水乙醇75 mL加入25 mL水，再加入1 mL丙三醇混匀备用。 7　 虫情监测 7.1　 监测范围 监测范围包括各柑桔生产地、水果市场，重点是柚类和橙类。 7.2　 监测方法 7.2.1　 田间监测 7.2.1.1　 成虫的监测 6月上旬到10月上旬，在果园的荫蔽、潮湿处，于果实的背阴面仔细查找桔实雷瘿蚊成虫，发现疑似成虫，收集在75 %乙醇溶液中，带回室内鉴定。 7.2.1.2　 幼虫和蛹的监测 分别于7月上、中旬的第一次落果高峰、9月中、下旬的第二、三次落果高峰和10月中、下旬第四次落果高峰，在柑桔果园中采集未熟先黄果和落地果，发现符合附录C描述症状的果实，带回室内培养、鉴定。并取落地果周围2 cm～5 cm深的表土，带回室内检查。 7.2.2　 水果市场监测 按GB15569-2009《农业植物调运检疫规程》6.2进行抽样，用肉眼或手持放大镜对样品果实逐个进行检查，发现符合附录C描述症状的果实，带回室内检验鉴定。 8　 室内检验鉴定 8.1　 幼虫和蛹的检查 将取回的土样用清水漂浮法检查，发现疑似幼虫和蛹，收集在75 %乙醇溶液中，待鉴定。 8.2　 成虫培养 取一养虫杯，加入经用水煮沸5 min处理过的砂土，将采集到的疑似虫果置于砂土表面，然后置于养虫箱中室温下饲养，并用小型喷雾器喷水,进行沙土保湿处理。待成虫羽化后，用0号画笔蘸取75 %乙醇溶液将活成虫浸入75 %乙醇溶液中，待鉴定。 8.3　 玻片标本制作 8.3.1　 翅脉标本制作 从75 %乙醇溶液中的成虫标本上取下一翅，在体视显微镜下放于载玻片上，盖上盖玻片即成翅脉标本。 8.3.2　 虫体标本制作 8.3.2.1　 标本软化 将标本（成虫、幼虫或蛹）从75 %乙醇溶液中取出，用10 %氢氧化钾溶液浸渍，或短时加热（100℃下处理2 min～5 min），或长时冷处理（在酒精里保持6个月以上的标本要12 h以上）。在处理过程中观察到标本软化而且部分透明时即停止。将标本转入表面皿中，用解剖针轻轻挤压腹腔内容物，若觉仍然坚硬，应继续浸渍直至软化。 8.3.2.2　 脱水透明 将标本转入蒸馏水中5 min～10 min洗去氢氧化钾，加数滴冰醋酸中和多余的氢氧化钾。把标本依次转入75 %乙醇溶液和90 %乙醇溶液各10 min，并轻轻挤压除去残存的蒸馏水后，再转入无水乙醇中浸2 min～5 min，最后将标本转入二甲苯酚混合液中1min～2 min，虫体即可完全脱水透明。 8.3.2.3　 解剖封片 将标本转入无水乙醇中清洗后，移入滴有丁香油的载玻片上，在体视显微镜下把成虫解剖成头、胸（具胸足）和腹三部分，再进行整姿。整姿时，使头正面朝上，触角披向两边；使腹部背面朝上，雄性外生殖器和雌虫产卵管对称地展示出来；使胸部侧面向上，足和剩下的另一翅展示出来。整姿完成后，用三块小圆盖片（7 mm～10 mm）分别盖住三部分，滴上加拿大胶封片。贴上标签，置于35℃的烘干器上干燥数日。 制作幼虫玻片时，使腹面朝上而且应放置对称。 8.4　 鉴定 将制作的带有翅脉、头、胸和腹的成虫玻片标本或幼虫玻片标本置于显微镜下，观察其形态特征，按附录A和附录B进行鉴定。 9　 结果判定 ——成虫符合附录A.1形态特征，可判定为桔实雷瘿蚊。 ——老熟幼虫和蛹的鉴别作为辅助鉴定手段。 10　 样品保存及处理 10.1　 标本保存 10.1.1　 玻片标本的保存 将制好的玻片标本移入标本柜中保存。 10.1.2　 幼虫、蛹标本的保存 将采集到的幼虫或蛹用水清洗后，投入60 ℃（±5 ℃）热水中浸泡杀死，在室温下冷却后，置于保存液中保存。 10.1.3　 样品处理 样品检验完成后，除用作标本保存的样品外，其它样品连同寄主果实及其培养介质进行灭活处理。 A A 附　录　A （资料性附录） 桔实雷瘿蚊的形态特征 A.1　 成虫的形态特征 成虫 雄虫体长1.6 mm～2.3 mm，淡红色至褐红色，下颚须4节，稀被刚毛，基节长稍大于宽，4节长度比为0.7：1.7：2：2。触角14节，鞭节二结型；第1、2节愈合；基肿节色较深，环丝1轮，长达中茎中部，基部具1轮刚毛；端肿节具2轮环丝和1轮刚毛，环丝较短，端轮环丝伸达下节基部。翅展1.8 mm～1.9 mm，翅面有不规则毛斑，仅具纵脉3条，R5脉端微向后弯曲，在翅顶与C脉相接，Cu脉分叉。足长，密被针形鳞片，前中足跗爪分齿，后足跗爪简单无齿，爪间突短于爪。腹部被针形鳞片，第2至6腹板尾毛1排，中部两侧各具1组刚毛，第1至6背板尾毛1排。雄外生殖器基抱节较短，均匀被毛，端抱节较长，基1/3光滑，其余被毛，端齿强；上板V形深裂，被微毛，下板较长，端缘微凹，端1/4被微毛；阳茎略长于下板。雌虫体形比雄虫大，体长2.1 mm～2.5 mm，触角鞭节圆柱形，端颈短；环丝紧贴。翅长1.8 mm～2.3 mm。产卵管极长，可翻缩，尾叶分离，长椭圆形，稀被刚毛，其余同雄虫。 A.2　 幼虫的形态特征 初孵时白色透明，肉眼难以察觉。成熟幼虫体长3 mm～4 mm，红色，13节，纺锤形或圆锥形。头壳较短。胸部有三角形红色斑点，末端有4个突起，中胸腹板有“Y”形剑骨片。腹部有浅黄斑，第8腹节尾瘤4对，其中1对无毛，大型，圆锥形。 A.3　 卵的形态特征 卵长椭圆形，微小，初呈白色透明，孵化前卵内出现红色点状。 A.4　 蛹的形态特征 被蛹，长2.7 mm～3.2 mm，外被褐黄色丝茧，体红褐色，近羽化时呈黑褐色，头顶具分叉的额刺1对；雌蛹足达腹部第5节。雄蛹足较长，达腹部第6节。 B B 附　录　B （资料性附录） 桔实雷瘿蚊形态特征图 桔实雷瘿蚊各虫态形态特征图 1、雌成虫 2、雄成虫 3、蛹 4、雌翅 5、雌平衡棒 6、卵 7、幼虫 8、雌触角 9、雄触角 （选自倪朝选等《桔实雷瘿蚊发生及防治研究初报》） C C 附　录　C （资料性附录） 桔实雷瘿蚊为害症状描述 桔实雷瘿蚊成虫多产卵于果实背阴处的蒂部、脐部缝隙处、果间交接处的幼果皮层，卵散产或聚生，产卵处常为极细小的愈合硬结点，用手持放大镜很难观察到，体视显微镜下观察受害果实，在产卵部位可见到类似擦伤的疤痕，幼虫一经孵化，即开始取食果实白皮层，沿果心柱潜食，将白皮层蛀成隧道，横剖可见明显幼虫蛀食隧道，初期水浸状，后期蛀道变褐有红色粉末状物，不取食果肉和瓤瓣。幼果期受害的果实的蒂部周围表现出针眼状的浅黄症状， 随着虫龄增大， 被害果的被害部果皮皱缩呈黑褐色，常出现龟裂，外部呈现不均匀的未熟先黄，然后脱落、腐烂。 _________________________________ VIII