DB51T 725-2007 蜜柑大实蝇监测与鉴定技术规程.doc

DB/T ××××—×××× 四川省质量技术监督局 发布 2007-12-1实施 2007-11-1发布 蜜柑大实蝇监测与鉴定技术规程 Rule of Monitoring and Identification of Bactrocera (Tetradacus) tsuneonis (Miyake) DB/T 725—2007 DB51 四川省地方标准 ICS 65.080.20 B 16 1 DB/T 725—2007 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语 1 4 原理 1 5 仪器及用具 1 6 试剂及溶液配制 2 7 虫情监测 2 8 室内检验鉴定 2 9 结果判定 3 10 样品保存及处理 3 附录A 4 附录B 6 附录C 7 附录D 8 II 前 言 本标准附录A和附录B为规范性附录，附录C和附录D为资料性附录。 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：四川省农业厅植物检疫站。 本标准主要起草人：蒋辉、郭迪金、李刚、曾亮华、余坚志、黄玲、曾大兵。 蜜柑大实蝇监测与鉴定技术规程 Rule of Monitoring and Identification of Bactrocera (Tetradacus) tsuneonis (Miyake) 1　 范围 本标准规定了蜜柑大实蝇的虫情监测、室内检验鉴定、结果判定、样品处理及标本保存的技术要求。 本标准适用于蜜柑大实蝇的监测与鉴定。 2　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB15569- 《农业植物调运检疫规程》 3　 术语 下列术语和定义适用于本标准。 3.1　 围蛹 coarctate pupa 附肢和翅不贴附在身上，可以自由活动，同时腹部节间也能自由活动，且蛹体被幼虫所脱的皮构成的蛹壳所包围。 3.2　 McPhail诱捕器 McPhail trap 为玻璃或塑料的扁平型诱捕器，有口容器，其中可以放置引诱剂。诱捕器约140 mm高，瓶底最宽处为160 mm，底部孔口约45 mm，实蝇从瓶底部进入后难于逃逸。 4　 原理 蜜柑大实蝇Bactrocera (Tetradacus) tsuneonis (Miyake)，属双翅目（Diptera），实蝇科（Tephritidiae）、寡毛实蝇亚科（Dacinae）、离腹寡毛实蝇属（Bantrocera）、大实蝇亚属（Tetradacus），主要以幼虫随被害果实作远距离传播，其卵也可随果实传播，蛹则可随果实的包装物或寄主植物所附土壤传播。蜜柑大实蝇的形态特征、传播途径及生物学特性及受害寄主果实症状，为制定监测鉴定技术规程提供了依据。 5　 仪器及用具 5.1　 仪器 体视显微镜、干燥箱、冰箱、温湿度计。 5.2　 用具 McPhail诱捕器、手持放大镜、测微尺、量筒、烧杯、培养皿、小型干燥器、解剖刀、解剖针、载玻片、盖玻片、标签纸、玻璃棉、养虫箱、40目防虫网罩、白瓷盘。 6　 试剂及溶液配制 除非另有说明，在检验中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 6.1　 苯酚（C6H6O） 6.2　 10 %氢氧化钠（NaOH）或10 %氢氧化钾（KOH）溶液 取10 g无水氢氧化钠或无水氢氧化钾溶于100 mL水中。 6.3　 封片胶 取阿拉伯树胶粉30 g于烧杯中，加入50 mL温水溶解后，再加入200 mL水合三氯乙醛（C2H3Cl3O2）及20 mL丙三醇（C3H8O3），置于55 ℃～60 ℃的干燥箱内。24小时后，在55 ℃～60 ℃的干燥箱内用玻璃棉过滤，贮存备用。 6.4　 保存液 取无水乙醇（C2H6O）75 mL加入25 mL水，再加入1 mL丙三醇（C3H8O3）混匀备用。 6.5　 饵剂 水解蛋白＋90 %敌百虫（C4H8Cl3O4P）500倍液，（2＋100）。 7　 虫情监测 7.1　 监测范围及重点 监测范围包括各柑桔生产基地、果园、水果市场及其周围种植有蜜柑大实蝇寄主植物的农田。重点是桔类和橙类，尤其是红桔和蜜柑生产基地或果园。 7.2　 监测方法 7.2.1　 田间监测 7.2.1.1　 成虫的监测 5月上旬～9月下旬在柑桔果园中,每667 m2随机悬挂3个McPhail诱捕器，诱捕器距地面1.5 m，将饵剂注入诱捕器的底部，每7 d加注一次，并收集诱集的成虫，带回室内检验鉴定。 7.2.1.2　 幼虫和蛹的监测 9月上旬～11月中旬，在柑桔果园中采集未熟先黄果和落地果，查看果皮上有无产卵孔、脱果孔，并检查落地果周围5 cm深的表土中有无幼虫和蛹。将符合附录C描述症状的果实和收集到的虫体带回室内检验鉴定。 7.2.2　 水果市场监测 7.2.2.1　 成虫的监测 5月上旬～9月下旬在水果市场及其周围农田和垃圾堆积场悬挂McPhail诱捕器，诱捕成虫，诱捕方法同7.2.1.2。 7.2.2.2　 幼虫和蛹的监测 按GB15569-《农业植物调运检疫规程》5.2进行抽样，用肉眼或手持放大镜对样品果实逐个进行检查，查看果皮上有无产卵孔、脱果孔，发现符合附录C描述症状的果实，带回室内检验鉴定。 8　 室内检验鉴定 8.1　 虫源培养 8.1.1　 卵或幼虫的培养 8.1.1.1　 培养至老熟幼虫 将采集到的带有卵或幼虫的寄主果实放在小号白瓷盘里，然后将小号白瓷盘放在装有自来水的大号白瓷盘内，再用防虫网罩盖住小号白瓷盘，罩的下方边缘浸没于大号白瓷盘内的水中，置于温度为22 ℃～28 ℃，湿度为50 %～90 %的环境中培养5 d～10 d，卵或幼虫发育至老熟幼虫（三龄幼虫）时弹跳入大号白瓷盘的水中。收集水中的老熟幼虫浸于75 %乙醇溶液中，待鉴定。 8.1.1.2　 培养至成虫 在烧杯中加入半干湿洁净细砂，将采集到的带有卵或幼虫的寄主果实置于细砂表面，再置于养虫箱中，在温度为22 ℃～28 ℃，湿度为50 %～90 %条件下培养，待成虫羽化后，悬挂相应寄主果实切片于养虫箱内供其取食，待成虫斑纹的色泽和大小稳定后（约需5 d），收集成虫并置于冰箱冷冻层0.5 h～1 h，待鉴定。 8.1.2　 围蛹的培养 将收集的围蛹埋入距细砂表面3 cm～5 cm处，置于养虫箱中培养，培养方法同8.1.1.2。 8.2　 鉴定 8.2.1　 成虫的鉴定 8.2.1.1　 干燥成虫软化处理 取一小型干燥器，加入干净细砂约2 cm，加水至漫过细砂表面约1 cm，并滴加数滴苯酚，上层放待还软的成虫标本，密闭1 d，待鉴定。 8.2.1.2　 外生殖器标本制作 用解剖刀取成虫标本腹节，置于预先配制好的10 %氢氧化钠或10 %氢氧化钾溶液的小烧杯中，浸泡12 h或煮沸3 min后取出，用蒸馏水洗净，在体视显微镜下，用解剖针挑取阳茎或产卵器置于载玻片上展开，盖上盖玻片，待鉴定。需做保存的标本，在盖盖玻片前应滴上封片胶。 8.2.1.3　 鉴定 将还软的成虫及制备的标本置于体视显微镜下，观察其形态特征，按附录A.1、附录B.1和附录D进行鉴定。 8.2.2　 幼虫的鉴定 将获得的老熟幼虫置于体视显微镜下，观察其形态特征，按附录A.2、附录B.2和附录D进行鉴定。 9　 结果判定 ——成虫符合附录A.1形态特征，可判定为蜜柑大实蝇。 ——老熟幼虫符合附录A.2形态特征，可判定为蜜柑大实蝇。 10　 样品保存及处理 10.1　 标本保存 10.1.1　 成虫标本及外生殖器玻片标本的保存 将制好的成虫标本或相应的外生殖器玻片标本，置于干燥箱中干燥数日，移入标本柜中保存。 10.1.2　 幼虫、蛹标本的保存 将采集到的幼虫或蛹用水清洗后，投入60 ℃（±5 ℃）热水中浸泡杀死，在室温下冷却后，置于保存液中保存。 10.1.3　 样品处理 样品检验完成后，除用作标本保存的样品外，其它样品连同寄主果实及其培养介质进行灭活处理。 附　录　A （规范性附录） 蜜柑大实蝇的形态特征 A.1 成虫 A.1.1 体型 体大型，黄褐色。雌虫体长（不包括产卵器）10.0 mm～12.0 mm，翅长8.8 mm～10.1 mm。雄虫体长9.9 mm～11.0 mm，翅长8.2 mm～10.1 mm。 A.1.2 体色 主要为橙色至褐色。 A.1.3 头部 头部黄色或黄褐色，单眼三角区黑色，颜面斑棱形或长椭圆形，黑色；触角黄褐色，触角芒暗褐色，其基部近黄色。具1对上额眶鬃和2对下额眶鬃，内、外顶鬃各1对。 A.1.4 胸部 A.1.4.1 中胸背板 中胸背板红褐色，中央有“人”字形的褐色纵纹，肩胛和背侧板胛以及中胸侧板条均为黄色，中胸侧板条宽，几乎伸抵肩胛的后缘，缝后侧黄色条始于中胸背板缝并终于翅内鬃之后，呈内弧形弯曲，具缝后中黄色条。 A.1.4.2 小盾片 小盾片黄色。 A.1.5 翅 翅膜质透明，前缘带宽，与R4+5脉汇合，并在翅端R4+5脉的下方和M1+2脉之间略扩展；在R2+3脉与R4+5脉之间的暗褐色前缘带上有一空白透明长形条，无臀条。 A.1.6 足 足近红褐色，胫节色较深。 A.1.7胸部的鬃序 小盾鬃1对，无小盾前鬃。后翅上鬃及翅内鬃各1对，前翅上鬃两对（有时1对，或有时一侧2根而另一侧仅具1根），中侧板鬃缺，背侧鬃2对，肩板鬃2对（内对常较外对弱小）。 A.1.8 腹部 腹部椭圆形，黄褐色至红褐色，背面具一暗褐色到黑色中横带，自腹基部延伸到腹部末端或在末端之前终止；第三腹节背板前缘有一暗褐色到黑色横带，与上述中纵带相交呈“十”字形；第一节呈长方形，第四和第五节背板两侧各有1对暗褐色到黑色短带，第二至四节背板侧缘均有黑色短条斑纹。 雌虫第六节背板陷于第五节的下方。第七至九节形成产卵器，第七节为基节，形如瓶状，暗褐色；第八节为中节，具锉区；第九节为产卵管节，端呈三叶状，长度在2.5 mm以下，具端前刚毛4对。产卵器基节长度约等于腹部第二至五节长度之和，其后端狭小部分短于腹部第五背板长。 雄虫第三腹节背板具栉毛，第五腹板后缘向内凹陷的深度达此腹板长度的1/5。阳茎端暗褐色，其上透明的蘑菇状物端半部密生透明小刺。 A.2 幼虫 A.2.1 体型 三龄幼虫体长5.0 mm～15.5 mm；二龄幼虫体长3.4 mm～8.0 mm；一龄幼虫体长1.25 mm～3.50 mm。 A.2.2 口钩 三龄幼虫口钩发达，黑色，长0.21 mm～0.38 mm。二龄幼虫口钩长0.16 mm～0.17 mm。一龄幼虫口钩小形，长0.04 mm～0.07 mm。 A.2.3 气门 三龄幼虫前气门丁字形，外缘呈较平直，略弯曲，有指突33个～35个。后气门具气门裂3个，气门毛5丛。二龄幼虫前气门外缘中央深凹，有指突28个～30个。后气门具气门裂3个，气门毛5丛。一龄幼虫前气门尚未发现，后气门甚小，由2片气门裂组成，裂孔呈马蹄形，气门毛4丛。 附　录　B （规范性附录） 蜜柑大实蝇与柑桔大实蝇形态特征比较 B.1 成虫 表B.1 成虫形态特征比较 蜜柑大实蝇 Bactrocera (Tetradacus) tsuneonis 柑桔大实蝇 Bactrocera (Tetradacus) minax 具前翅上鬃1对～2对。 无前翅上鬃。 肩鬃通常2对，中对较粗、发达、黑色。 肩鬃通常仅具侧对，中对缺或极细微。 产卵器基节长度约等于腹部第四与第五节长度之和；产卵管端呈三