DB37T 4299-2020 海水中金刚烷胺的测定 液相色谱串联质谱法.docx

Q/LB.□XXXXX-XXXX ICS 13.060 CCS Z 17 山东省地方标准 DB37/T 4299—2020 37 海水中金刚烷胺的测定　液相色谱串联质谱法 Determination of amantadine in seawater—Liquid chromatography tandem mass spectrometry, LC-MS/MS 2020 - 12 - 30发布 2021 - 01 - 30实施 山东省市场监督管理局  发布 DB37/T 4299—2020 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省海洋局提出并组织实施。 本文件由山东省海洋标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：山东省海洋资源与环境研究院、山东省水产品质量检验中心、山东省标准化研究院。 本文件主要起草人：徐英江、田秀慧、韩典峰、任传博、宫向红、刘小静、薛敬林、张华威、于宁、相吉利。 5 海水中金刚烷胺的测定　液相色谱串联质谱法 1　 范围 本文件规定了海水中金刚烷胺检测的原理、试剂和材料、仪器和设备、样品的制备、测定步骤、结果计算和表述、检测方法的灵敏度、准确度和精密度等技术内容。 本文件适用于海水中金刚烷胺的测定。 2　 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 3　 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4　 原理 海水样品过滤后加入盐酸酸化，经固相萃取柱富集净化后，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。 5　 试剂和材料 除另有指定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682中一级水标准。 5.1　 甲醇：色谱纯。 5.2　 甲酸：色谱纯。 5.3　 乙腈：色谱纯。 5.4　 氨水：优级纯。 5.5　 盐酸：优级纯。 5.6　 0.45 μm醋酸纤维滤膜。 5.7　 0.2 mol/L盐酸：16.8 mL盐酸用水稀释并定容至1 000 mL。 5.8　 5 %氨水甲醇：取5 mL氨水，定容至100 mL。 5.9　 0.1 %甲酸溶液：取0.10 mL甲酸，定容至100 mL。 5.10　 定容液：将1 mL甲酸与300 mL乙腈，加入到700 mL水中。 5.11　 标准品：金刚烷胺（CAS：768-94-5），纯度≥99.0 %；金刚烷胺内标溶液（D15-金刚烷胺）：1 mg/mL。 5.12　 标准贮备液：准确称取金刚烷胺0.010 0 g，用乙腈溶解，定容至10 mL，配制成1.0 mg/mL标准贮备液，4 ℃下避光保存，有效期为6个月。 5.13　 标准使用液：分别移取适量金刚烷胺和金刚烷胺内标贮备液，用乙腈分别稀释成标准使用液，金刚烷胺的浓度为1.0 μg/mL，金刚烷胺内标的浓度为100 μg/L，4 ℃下避光保存，有效期为1个月。 6　 仪器和设备 6.1　 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源（ESI源）。 6.2　 分析天平：感量0.000 1 g。 6.3　 天平：感量0.01 g。 6.4　 超声波清洗器。 6.5　 玻璃砂芯过滤装置。 6.6　 醋酸纤维滤膜0.45 μm。 6.7　 固相萃取装置。 6.8　 氮吹仪。 6.9　 旋涡混合器。 6.10　 固相萃取柱：MCX，60 mg/3 mL，或相当者。 7　 样品的制备 海水用玻璃砂芯过滤装置，经0.45 μm醋酸纤维滤膜过滤后备用。 8　 测定步骤 8.1　 提取与净化 精确量取500 mL海水，加入100 μL内标使用液（5.13）和10 mL 0.2 mol/L盐酸（5.7），过活化后MCX柱（6.10）（5 mL甲醇、5 mL水活化），5 mL水淋洗，10 mL 5 %氨水甲醇洗脱（5.8），收集洗脱液，用氮吹仪于40 ℃下吹至近干，用定容液定容至1 mL（5.10），供液相色谱串联质谱仪分析。 8.2　 标准曲线的绘制 准确移取适量金刚烷胺的标准使用液（5.13），分别加入100 μL内标使用液，用定容液释成一系列的标准工作液，使金刚烷胺浓度分别为10.0 μg/L、20.0 μg/L、40.0 μg/L、50.0 μg/L、100 μg/L，以各标准峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，以各标准工作液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。 8.3　 测定 8.3.1　 液相色谱参考条件： a) 色谱柱：(100 mm×2.1 mm，1.8 μm)，或相当者； b) 色谱柱温度：40 ℃； c) 流动相A：乙腈； d) 流动相B：0.1 %甲酸溶液； e) 流速：0.25 mL/min； f) 进样量：10 μL； g) 梯度洗脱程序：见表1。 表1　 液相梯度洗脱程序表 时间 min 流速 mL/min B % D % 0.00 0.25 5 95 0.50 0.25 5 95 0.60 0.25 95 5 5.00 0.25 95 5 5.10 0.25 5 95 7.00 0.25 5 95 8.3.2　 质谱参考条件： a) 离子模式：ESI+； b) 电离电压：2.50 kV ； c) 锥孔电压：30 V； d) 离子源温度：140 ℃； e) 锥孔反吹气流速：50 L/h； f) 脱溶剂气温度：400 ℃； g) 脱溶剂气流速：700 L/h； h) 氩气流速：0.12 mL/min； i) 测定方式：选择离子（SRM）多反应监测模式，定量离子和定性离子见表2。 表2　 待测物定量离子和定性离子 化合物 母离子 子离子 锥孔电压 碰撞能量 金刚烷胺 152 93 25 30 135* 25 17 金刚烷胺内标 167 141* 25 17 注： *表示为定量离子 8.3.3　 测定方法 8.3.3.1　 定性方法 在同样测试条件下，试样液中待测物的保留时间与标准工作液中待测物的保留时间偏差在±0.10 min以内，在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的特征离子均应出现，且检测到的离子的相对丰度，应与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3要求。 表3　 定性确证时相对离子丰度的允许偏差 相对离子丰度 % 允许偏差 % ＞50 ±10 ＞20～50 ±15 ＞10～20 ±20 ≤10 ±50 8.3.3.2　 定量方法 按8.3.1和8.3.2设定仪器条件，待仪器稳定后，根据表2中的定量离子分别对金刚烷胺和内标进行测定，记录保留时间和峰面积，以峰面积比按内标法进行单点或多点校准定量，标准工作液和试样液中待测物的响应值均应在仪器检测线性范围内。金刚烷胺标准溶液（10 μg/L）的选择离子流图参见附录A。 8.3.3.3　 空白试验 除不加试料外，均按上述测定条件和步骤进行平行操作。 9　 结果计算和表述 按式（1）计算试样中金刚烷胺的残留量（ng/L），计算结果需扣除空白值，测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 X=Ci×V1V2 () 式中： X ——试样中被测组分金刚烷胺的残留量，单位为ng/L； Ci ——试样溶液中对应的被测组分浓度，单位为ng/mL； V1 ——试样溶液定容体积，单位为mL； V2 ——供试试样的体积，单位为L。 10　 检测方法的检出限、定量限、准确度和精密度 10.1　 检出限和定量限 金刚烷胺检出限为5.0 ng/L；定量限为10 ng/L。 10.2　 准确度 金刚烷胺在添加浓度10 ng/L～100 ng/L时，回收率为70 %～120 %。 10.3　 精密度 本文件批内相对标准偏差小于15 %，批间相对标准偏差小于15 %。 A A 附录A （资料性） 色谱图 图A.1 金刚烷胺标准溶液选择离子流图（10 µg/L）