bz001000017.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准水质六种特定多环芳烃的测定 高效液相色谱法G B 1 3 1 9 8 一 9 1Wa t e r q u a l i t y-D e t e r mi n a t i o na o f sa r o mp e c i f i e d s i x p oa t i c h y d r o c a r bl y n u c l e a ro n s-Hi g hp e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y1 适用范围 本标准规定了测定水中多环芳烃(P A H)的高效液相色谱(H P L C)法。本标准参照采用国际标准I S O/D I S 7 9 8 1/2 高效液相色谱法分析的六种特定多环芳烃 本标准适用于饮用水、地下水、湖库水、河水及焦化厂和油毡厂的工业污水中荧蕙、苯并(b)荧葱、苯并(k)荧f;、苯并(a)此、苯并(g h i)花、荀并(1,2,3-c d)此六种多环芳烃的测定。本法用环己烷提取水中多环芳烃，提取液通过弗罗里硅土柱,P A H吸附在柱上，用丙酮加二氯甲烷混合溶液脱附P A H后，用配备荧光和(或)紫外检测器的高效液相色谱仪测定。本方法对六种 P A H通常可检测到n g/L水平。水样中若存在可被共萃取的能产生荧光信号或熄灭荧光的物质对本法也有干扰。本法用弗罗里硅十柱层析净化分离，可降低荧光背景2 试剂和材料2.，高效液相色谱流动相为水和甲醇的混合溶液。2.1 门甲醇:分析纯，用全玻璃仪器重蒸馏，要求有足够低的空白。2.1.2 水:电渗析水或蒸馏水，加高锰酸钾在碱性条件下重蒸。在测定的化合物检测限内未观察到于扰。2.2 配制标准样品和水样预处理使用的试剂和材料2.2 门 二氯甲 烷(C H E C K)用全玻璃蒸馏器重蒸馏，在测定化合物检测限内不出现色谱干扰为合格2.2.2 丙酮(CH,O):同2.2.1 02.2.3 环己烷:分析纯，同2.2.1 注:若环己烷的纯度不够，可采用附录中两种办法中的任一种进行净化2.2.4 无水硫酸钠(N a 2 S O,)分析纯，在4 0 0 C加热2 h2.2.5 硫代硫酸钠(N a,S()，5 H 2():分析纯。2.2.6 弗w里硅土(F l o r i s i t),6 0 -1 0 0目，色层分析用。在4 0 0 C加热2 h。冷却后，用水(2.1-2)调至含水鼓为1 1%(./r n)2.2.了 碱性氧化铝:层析用，5 0 2 0 0 K m，活度为 B r o c k m a n n工 级。达到 I 级的制法如下 将氧化铝加热至5 5 0 士2 0 C至少2 h，冷却至2 0 0 2 5 0，移入放有高氯酸镁的干燥器内，继续冷却 即得活度为B r o c k m a n n I 级的氧化铝在干燥器内可存放五天。2.2.8 柱层析用硅胶 1 0 0目，在3 0 0 C活化4h国家环境保护局 1 9 9 1 一 0 8 一 3 1 批准1 9 9 2 一 0 6 一 0 1 实施G B 1 3 1 9 8 一 9 12.2-9 浓硫酸(H,S O):分析纯。2.2-1 0 标准溶液:注:有些多环芳烃是强烈致癌的，因此操作时必须极其小心。不允许人体与多环芳烃固体物质、溶剂萃取物、多环芳 烃标准品接触。多环芳烃可随溶剂一起挥发而沾附十具塞瓶子的外部，因此处理含多环芳烃的容器及实验操作 过程必须使用抗溶剂的手套。被多环芳烃污染的容器可用紫外灯在3 6 0 n m紫外线下检查，并针于重铬酸钾 浓 硫酸洗液中浸泡4 h。标准溶液应在有适当设备(如合适的毒气橱、防 护衣服，防尘面罩等)的实验室中配制。用 固 体化合物配多环芳烃标准品，在没有合适的安全设备及尚未正确掌握使用技术之前，不能进行2.2-1 0.1 色谱标准物:固体多环芳烃标准物为荧蕙、苯并(k)荧葱、苯并(b)荧葱、苯并(a)r L,苟并(1,2,3-c d)t L 及苯并(g h t)-it 等六种，纯度在9 6%以 上。采用固 体标准物配制标准储备液，亦可采用经证实为合格的市售多环芳烃标准溶液配置标准储备液2.2-1 0.2 用固 体多环芳烃配制标准储备液:分别称量各种多环芳烃(2.2.1 0.1)2。士。.1 m g，分别溶解于5 0 -7 0 m L环己 烷(2.2.1)中，再以环己 烷稀释至1 0 0 1 0.1 M I，配成浓度为2 0 0 p g/m l单个化合物的标准储备液。若用市售溶液配制标准储备液，可在容量瓶中用环已烷稀释，使标准储备液的浓度各为2 0 0 p g/m L的单化合物溶液。储备液保存在4 C冰箱中。2.2.1 0.3 混合P A H标准溶液的配制:在1 0 m l容量瓶中加入各种P A H储备液(2.2.1 0.2)1 士 0.0 1m l，用甲醇稀释至标线，使标准溶液中含各种多环芳烃的浓度各为2 0 p g/m l的混合P A H标准溶液。标准液保存在4冰箱中。2.2-1 0.4 标准工作溶液:根据仪器灵敏度及线性范围的要求，取不同量的混合 P A H标准溶液(2.2-1 0-3)，用甲醇(2.1.1)稀释，配制成几种不同浓度的标准工作溶液。仪器 高效液相色谱仪:带荧光和紫外检测器的高效液相色谱仪。-1 恒流梯度泵系统反相柱:填料为Z o r b a x 5 p O D S，柱长2 5 0 m m，内 径4.6 m m,荧光检测器:荧光分光光度计检测器，激发波长2 8 0 n m,发射光波长大于3 8 9 n m截止点;荧光2沼3川川31洲光度计检测器应有激发用的色散光系统和可用滤光片或色散光学系统的荧光发射部分。3.1.4 紫外一 可见 光检测器:可调波长紫外检测器或固定波长为2 5 4 n m的紫外检测器，可单独使用，也可以与荧光检测器联用。3.1.5 记录仪:与检测器匹配。3.1.6 微量注射器:规格为5,1 0,5 0,1 0 0 及5 0 0 p t。I1.了 恒温水浴(或恒温柱箱)。3.2 采样瓶:1 l具磨口玻璃塞的棕色玻璃细口瓶13 振荡器:调速，配备自 动间歇延时控制仪。I4 玻璃器皿:3.4.1 分液漏斗:1 0 0 0 m L，玻璃活塞不涂润滑油。3.4.2 碘量瓶2 0 0 m L o3.4.3 层析柱:3.4.3.1 净化环己烷层析柱:长5 0 0 m m，内径2 5 m m,玻璃活塞不涂润滑油的玻璃柱。3.4.3.2 样品预处理层析柱:长2 5 0 m m，内径 1 0 m m，玻璃活塞不涂润油油的玻璃柱。3.4.4 K-D浓缩瓶:2 5 m l，带刻度，容积必须进行标定，带磨口 玻璃塞。14.5 K-D蒸发瓶;5 0 0 m L o3.4.6 K-D S n y d e r 柱:三球，常量3.4.7 K-D S n y d e r 柱:二球，微量。G B 1 3 1 9 8 一 9 13.48 址筒:5。n il35 玻璃毛或玻璃纤维滤纸:在3.6 沸石:在。(、加热 1 h4 0 0 C加热 1 h 冷却后，保存在具塞磨口的玻璃瓶中。冷却后，保存在具塞磨1-I 的玻璃瓶中4 样品41 样品的性质4.1.1 样品名称:水样4.1.2 样品状态:液体。4.1.3 样品稳定性:水样中的P A H对光敏感。4.2 水样采集和储存方法4.2-1 水样采集:样品必须采集在玻璃容器中，采样前不能用样品预洗瓶子，以防止样品的沾染或吸附 防正 采集表层水，保证所采样品具有代表性。在采样点采样及盖好瓶塞时，样品瓶要完全注满，不留空气 若水中有残余氯存在，要在每升水中加入8 0 m g 硫代硫酸钠(2-2-5)除氯。4.2.2 水样保存:水样应放在暗处，4 C冰箱中保存;采样后应尽快在2 4 h内 进行萃取。苯取后的样品在4。天内 分析完毕4.3 水样预处理4.3.1 水样的萃取:摇匀水样，用5 0 0 m l量筒(3.4.8)U取5 0 0 m l,水样(萃取所用水样体积视具体情况而定，可增减)，加 人5 0 m l环己 烷(2-2-3)，手摇分液漏斗，放气几次后，安装分液漏斗于振荡器架上(3.3),振摇 5 m i n进行萃取 取下分液漏斗，静置约1 5 3 0 m i n(静置时间视两相分开情况而定)，分出下 层水相留待进行第二次萃取，上层环已 烷相放入2 0 0 m L碘量瓶(3-4-2)中，再用5 0 m l环己 烷对水祥进行第二次萃取，水相弃去，环己烷萃取液并人同一碘量瓶中，加无水硫酸钠(2-2-4)至环己烷萃取液清沏，至少放置 3 0 m i n，脱水干燥4-3.2 苯取液的净化4.3.2 门饮用水的环己 烷萃取液，可以不经柱层析净化，浓缩后直接进行 H P L C分析4.3.2-2 地表水及工业污水用柱层析净化4.3.2.2.1 层析柱的装填:在玻璃层析柱(3-4.3-2)的下端，放入少量玻璃毛或玻璃纤维滤纸(3-5)以支 托填料，加入3 m L环己烷(2.2.1)润湿柱子。称4 -6 g弗罗里硅土(2-2-6)于小烧杯(3.4.9)，用环己烷制成匀浆，以湿式装柱法填入上述柱中 净化地表水的柱，填充4 g 弗罗里硅土，净化污水的柱，填充 9弗罗里硅土 放出柱中过量的环己 烷至填料的界面。4.3 2.2.2 萃取液的净化:从层析柱(4.3.2.1)的上端加人已 干燥的环己 烷萃取液，全部溶液以1-2n i l./m i n流速通过层析柱，用环己烷洗碘量瓶中的无水硫酸钠三次，每次5 1 0 m 1，环己烷洗涤液亦加入层析柱，回收通过柱的环己 烷。被吸附在柱上的P A H用丙酮(2-2-2)和二氯甲 烷(2.2.1)的混合溶液解脱地表水用1 0 0-L(8 8 m L丙酮+1 2 m L-氯甲烷)脱附;污水用7 5 m L(1 5 m L丙酮+6 0 m l.诫甲 烷)脱附解脱液收集于已联接 K-D蒸发瓶(3.4.5)的K-D浓缩瓶(3.4.4)中，加入两粒沸石(3.6)，安装好三球 S n y d e r 柱(3-4-6)、待浓缩4.12.3 试样的浓缩:将 K-D浓缩装置的下端浸入通风橱中的水浴锅(3-7)中，在6 5 7 0 C的水温卜 浓缩至约。.5 m1，从水浴锅上移下 K-D浓缩装置，冷却至室温，取下三球 S n y d e r 柱，用少量丙酮洗住及其玻璃接口，洗涤液流人浓缩瓶中。加人一粒新沸石，装上二球S n y d e r 柱(3.4.7)，在水浴锅中如仁 述浓缩，定容至。.3 0.5 m L，留待 H P L C分析。1 甲醇、环己烷,7x甲烷及丙酮等是易燃的有机溶剂，应在通用橱中操作5 操作步骤5.1 调整仪器G B 1 3 1 9 8-9 1 安装高效液相色谱仪，使其达到顶期的分离效果 预热运转至获得稳定的基线5.1.1 柱温:3 5C。5，1.2 流动相组成:A泵:8 5%水(2.1.2)+1 5%甲醇(2.1.1)(V/V)B泵:1 0 0%甲醇(2.1.1)e5.13 洗脱:视柱的性能可采用下列方式的一种进行洗脱，或按柱的 性能选择条件5-1-3.1 恒溶剂洗脱:以9 2 0 a B泵和8 0 a A泵流动相组成，等浓度洗脱。5-1,3-2 梯度洗脱:以G。%B泵+4 0%A泵的组成洗脱，保持2 0 m i n;以3 0 o B/rn i n增量至成为9 6%B+4 写A泵的组成，保持至出峰完。以8%B/m i n 减量至成为6 0%B泵十4 0%A泵的组成，保持1 5 m i n，使流动相组成恒定，为犷-次进样准备好条件。5.1.4 流动相流量:3 0 m L/h r 恒流;或按柱的性能选定流量。515 检测器;5.1.5.1 荧光检测器 3.1.3)波长的选择:a荧光分光光度计检测器:六种 P A H在荧光分光光度计特定的条件下最佳的激发和发射波长如表 1.表 1 六种多环芳烃最佳的荧光激发和发射波长激发波长L.,n m发射波长瓜，。沁一粗一302苯并(b)荧葱苯并(k)荧葱笨并(a)E苯并(g h