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G s/T 1 6 8 7 3 一 1 9 9 7前言为保护散鳞镜鲤的种质资源，保存散鳞镜鲤的种质性状，防止变异和退化，特制定本标准。本标准是“七五”、“八五”科技攻关成果和前人生产实践的总结。本标准的附录 A至附录C是标准的附录。本标准自1 9 9 8 年1 月1日 起实施。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位:中国水产科学研究院黑龙江水产研究所。本标准主要起草人:刘明华、沈俊宝、范兆廷。中华 人 民共 和 国 国 家标 准散鳞镜鲤G s/r 1 6 8 7 3 一 1 9 9 7S c a t t e r e d mi r r o r c a r p1 范围本标准 规定了 散 鳞镜鲤(C y p r i n u s c a r p io h a e m a t o p t e r u s T e m m.e t S c h.指标、遗传学特性，以及检测方法。适用于散鳞镜鲤良 种鉴定。)良种主要生物学性状、生化2 名称与分类2.1 学名 鲤(C y p r i n u s c a r p i o h a e m a t o p t e r u s T e m m.e t S c h)2.2 分类位置 属鲤形目(C y p r i n if o r m e s)，鲤科(C y p r i n i d a e),鲤亚科(C y p r i n i n a e)I(C y p r i n u s),鲤种(C y p r i n u s c a r p i o h a e m a t o p t e r u s),鲤属(C y p r i n u s)，鲤亚属3.1主要生物学性状 外部特征3.1.1 形态性状体纺锤形，背部稍隆起，头较小，吻钝，口亚下位，略呈马蹄形，上下颗可伸缩。背鳞，沿侧线连续或不连续排列大小不规则的鳞片，在鳃盖后缘和尾部覆盖稍大鳞片，而胸、腹、臀鳍基部有转小鳞 片，其他部位裸A t 侧线转平言。休青灰色或棕揭色,尾鳍下叶旱浅格红色，见图 i v图 1 散鳞镜鲤外形国家技术监督局1 9 9 7 一 0 6 一 1 6 批准1 9 9 8 一 0 1 一 0 1 实施G B/T 1 6 8 7 3 一 1 9 9 73.1.2 可数性状3.12.1 背鳍硬棘皿 Iv)，分枝鳍条数1621，多数为1920。3.1.2.2 左侧第一鳃弓鳃耙数2024，多数为22。3 门.2.3 须2 对，口须较长，一般为领须长的2 倍左右，3.1.3 可量性状 不同体长组个体，可量性状变动值见表1。表 1 _*。一.一 一少刀“_ _ 亚旦_ 一 二 二二 二 飞、全长，mrn 体长.mm 一18 4.0 一1 盯.。丽.。二 ll J 萦-一红_ 几 一es 2 吧理沙_ _ _1 9 3.。一 2 2 3.。一一3L-一 一_ _ _ 3 9 2.0 4 6 9.0 3 0 6 0 3 6 0.012 8 2-一 而 麻 一 摹一一 es 沐长r 头长2 2 5 一汗一飞 丽一 州3 0 83.2 13 4 9体长/尾柄长7.4 17.0 8 8.0 6 6.5 7体长/尾柄高7.3 76 9 0头长/吻长2.8 8 一 一头长/眼径3.8 86.0 06.8 6头长/眼间距2 492.5 82.4 33.2 内部特征3.2 门缥 鳃分两室，前室较后室大，长度约为后室的1.5 倍。3.2.2 肋骨 肋骨有16对。3.2.3 下咽齿 下咽齿3 行。齿式为1 1 3/3 1 1。3.24 脊椎骨 脊椎骨总数为颅后椎骨、腹推骨、尾椎骨数之和 脊椎骨总数、颅后椎骨、腹椎骨、尾椎骨数分别为36一37、4、161 7、1 6 块。3.2.5 腹膜 腹膜为银白色3.3 生氏与繁殖3.3，1 生长 不同年龄组的鱼体长和体重的实测值见表2 表 2年龄七，龄1234体长，mm6 5 1 1 62 2 2 2 7 62 6 5 3 5 33 3 2 4 1 0体重.只1 3 5 54 08 81 07 5 0 13 5 013 2 5 27 0 51)年龄.主 要依据脊椎骨七 的年轮标志年龄.3.3.2 繁殖332.1 成熟年龄:雌鱼2 4 龄，雄鱼1 3 龄3.3.22 性腺一年成熟一次，分批产卵G B/T 1 6 8 7 3 一 1 9 9 73.3.2.3 繁殖水温:1625。3.3.2.4 怀卵量:不同年龄个体怀卵量见表 3。表 3年龄，龄4567体重，912 0 0 22 0 015 5 0 27 0 022 7 5 38 5 035 0 0 49 0 0绝对怀卵量，粒1 1 2 火1 0 3 一3 0 1.4 又1 0 31 8 0 X1 0 3 3 2 0 X1 0 33 0 0 只1 0 3 5 2 0 义1 0 33 4 2 X1 0 日 6 8 2 只I O a相对怀卵量，粒/99 3 1 3 79 7 1 2 71 1 8 1 3 59 7 1 3 64 生化指标同 工酶谱与基因位点。肝脏醋酶(ES T)有谱带6 8 条，基因位点有6 个，其中E s T 一 1 有三种表现型，E S T 一 6 有二种表现型(见图2)朴EST-ZEST4EsT-ESTrsEST-6 图2 散鳞镜鲤肝醋酶电 泳图 谱5 遗传学特性5.，体细胞染色体2 倍数 Z n=1 0 0。5.2 核型 中部着丝粒染色体和亚中部着丝粒染色体(m组和s m组)23对，和t 组)2 7 对，染色体臂数(N F)1 4 6(见图3)。亚端部和端部着丝粒染色体(s t 组六 几.人 执 人t 协月 几 砚 目一 八.心今二 减 卜.，二卜-.奋.内.人 份 协 礴 肠八砂、闷 扮 毛.月 几.民.三.舀.自恤.户.卜幽公卜娜 卜.凡.八 几今 二月犯.户朴.氏八介户.争二娜介产 墓口.叨卜散鳞镜鲤的染色体组型5.3 脱氧核糖核酸(D N A)含量G B/T 1 6 8 7 3 一 1 9 9 7每个红血球细胞核的D N A含量为4.5 7 p g(与鸡血对照)。6 检测方法61 生化遗传分析6.1.1 样品制备 取活 体健康鱼的肝脏。.3 g，用蒸馏水稀释(1:3)匀浆，在4 条件下离心(1 5 0 0 0 r/m i n)2 0 m i n,取上清液放冰箱(4 0C)保存备用。6.1.2 电泳方法及染色 使用水平平板恒温电泳仪。聚丙烯酞胺凝胶浓度为5.5 9%。三经甲 基氨基甲 烷一 柠檬酸缓冲液p H值为7.0。从冰箱取出上清液与指示剂(0.4%澳酚蓝)混合后点样，每个加样孔加1 0 p L，每一样品重复一次。电泳经过:预电泳(点样前，恒流5 0 m A,3 0 m i n)，前电泳(点样后，恒流2 0 m A,1 0 m i n)，前电 泳后正式电泳(恒压9 0 0 V,3 0-1 0 0 m i n)，电泳恒温4 0C,染色，染色液配方见附录A(标准的附录)。6.1.3 结果判定 将测定结果对照图2 谱带确定该种同工酶的编码座位数和多态座位的同位基因数。6.2 染色体检测6.2.1 标本制备 采用肾组织细胞加植物血凝聚素(P H A)，在2 5 条件下培养2-4 h,经吹风或者自 然干燥制片，吉姆萨(G i e m s a)染色。G i e m s a 染色液的配制见附 录B(标准的附 录)。6.2.2 计数 在光镜下，选取染色体铺散良 好，完整的中 期分裂相计算染色体数目，确定2 n 数。6.2.3 形态分类 选择1 0 个以上的分裂相，进行显微拍照，按放大照片对染色体组型分析。染色体的形态类别，按以下要求划 分:即 臂比1.0-1.7 为中部着丝粒染色体(m组);1.7 1 -3.。为亚中部着丝粒染色体(s m组);3.1-7.。为亚端部着丝粒染色体(s t 组);7.1 二的为端部着丝粒染色体(t 组)。m组和s m组染色体臂数为2;s t 组和t 组染色体臂数为1,6.3 脱氧核糖核酸(D N A)含量测定6.3.1 血徐片制备 从尾动脉采血。5 m L，生理盐水稀释制成血徐片;同时采小公鸡血，用同法制片作对照。6.3.2 固定 血涂片空气干燥后，用卡诺氏液(甲醉:冰乙酸，为3:1)固定1 h,然后将血涂片移出存放于4 七冰箱中或者直接染色。6.3.3 染色 血涂片经3.5 m o l H C l 水解3 0 m i n(2 8 C).蒸馏水冲洗，放入希夫(S c h i f f)试剂 其配 制方法见附录C(标准的附录)，于2 8 暗处染色1 h，立即用二氧化硫水洗3 -5 次，每次2 1 0 m i n，再经梯度酒精7 0 0 0,8 0%,9 0 0 x,9 5%,1 0 0%脱水，二甲 苯透明 后用胶封片。6.3.4 D N A含量测定 用显微分光光度计测量，波长5 6 0 n m，扫描步距。.5 -1 tA m.G B/T 1 6 8 7 3 一 1 9 9 7 附录A (标准的附录)醋酶染色液配方a 一 乙酸蔡酷4 0 m g坚牢蓝B 盐1 0 0 m g三羚甲 基氨基甲烷一 柠檬酸缓冲液(1 m o l,p H 7.0)蒸馏水1 3 5 m I1 5 mL附录B (标准的附录)吉姆萨(G i e m s a)染色液配制I l l G i e m s a 染色母液配制 称量0.5 g G i e m s a 粉.量取甘油3 3 m L，在研钵中 先用少量甘油与G i e m s a 粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余甘油加入，在 5 6 条件下保温2 h 后，加入 3 3 mL甲醇，保存于棕色瓶内。B 2 p H 7.2 磷酸缓冲液配制 0.2 m o l 磷酸氢二钠(N a i H P O,)溶液 7 2.0 m L加上 0.2 m o l 磷酸二氢钠(N a H E P O,)溶液2 8.0 m L即成。B 3 G i e m s a 工作染色液配制 取1 0 0 m l,p H 7.2 磷酸缓冲 液，加入3 m L G i e m s a 染色母液即成。附录C (标准的附录)希夫(S c h i f f)试剂的配制 将。.5 g 碱性品红溶于1 0 0 m L热蒸馏水中，使之充分溶解，待溶液冷却至5 0 时过滤，再冷却到2 5 C 时加入1 m o l 盐酸(H C l)1 0 m L 和1 g 亚硫酸氢钠(N a H S O,)或1.5 g 偏重亚硫酸钠(N a 2 S,0 5)，放置暗处，静置2 4 h 后，加0.2 5 0.5 g 活性炭摇荡1 m i n，过滤，溶液呈无色，装入棕色瓶中塞紧瓶塞，保存存次箱内(0-4,C).用前预牛助出.伸夕恢复罕室涓后再用加溶浦皇粉红伍不能用.须重配