农业部1063号公告-1-2008 动物尿液中9种糖皮质激素的检测 液相色谱-串联质谱法.pdf

农业部1063号公告一1一2008液，于一18以下保存，有效期为6个月。4.15混合标准储备液(100g/mL):分别准确吸取泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、氢化可的松，倍氯米松，地塞米松、倍他米松、醋酸氟氢可的松和醋酸可的松标准储备液(4.14)5.00L,置于50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，于一18以下保存，有效期为3个月。4.16混合标准工作液：准确吸取混合标准储备液(4.15)1.00mL,置于100mL容量瓶中，用30%乙腈溶液(4.11)稀释至刻度，摇匀。取该溶液分别配制成2g/L、5g/L、10g/L、20g/L、50g/L、100g/L工作液。于28保存，有效期为1周。5仪器和设备5.1液相色谱一串联质谱仪（配电喷雾离子源）。5.2涡旋振荡器。5.3高速离心机。5.4电热恒温振荡器。5.5旋转蒸发仪。5.6电子天平：精度0.0001g。5.7pH计：精度0.1。5.8氨气吹干浓缩仪。6试样的制备供试样品置于一18以下冷冻保存，使用前放至室温，如有混浊，离心后取上清液备用。7测定步骤7.1酶解准确吸取尿液试样5.0mL,置于50mL离心管内，用乙酸调pH为5.2（士0.2），加入0.02mol/L乙酸铵缓冲液(4.9)5.0mL,再加人3-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶(4.13)50L,涡旋混匀，于37（1）避光振荡16h.7.2提取酶解后放置室温。加乙酸乙酯10mL,旋涡混合1min,振荡提取15min,移取有机相。冉用10mL乙酸乙酯提取一次，合并有机相。于40下旋转蒸至近干。加入2mL甲醇溶解残渣，再加入8L水，混匀，备用。7.3净化取(HLB)固相萃取柱(4.7)依次用甲醇、水各6mL活化，取提取液全部过柱。依次用5mL水、5mL20%甲醇溶液(4.12)淋洗，抽干。将预先用6L洗脱液(4.10)活化好的氨基固相萃取柱(4.8)串接在HLB固相萃取柱下方。6mL洗脱液(4.10)洗脱，收集洗脱液，50下氮气吹干。残余物用30%乙腈溶液(4.11)0.5mL溶解，涡旋混匀，6000r/min高速离心10min,取上清液适量，过0.2m滤膜后，供液相色谱一串联质谱仪测定。7.4测定7.4.1液相色谱参考条件a)色谱柱：BEH C18(100mmX2.1mm,l.7am),或相当；b)流动相：A相：乙睛：B相：0.1%甲酸水溶液：c)流速：0.3mL/min:2