农业部781号公告-10-2006 蜂蜜中氯霉素残留量的测定 气相色谱－质谱法（负化学源）.pdf

农业部781号公告一10一2006蜂蜜中氯霉素残留量的测定气相色谱一质谱法（负化学源）1范围本标准规定了蜂蜜中氯霉素残留量检测的制样和气质联用测定方法。本标准适用于蜂蜜中的氯霉素残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1.1一20001.4标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则(ISO/IEC Directives,Part 3,1997,Rules for the structure and drafting of International Standards,NEQ)GB/T6682一1992分析实验室用水规则和试验方法农业部农牧发20031号兽药残留试验技术规范（试行）3制样3.1样品的制备取适量无结晶的空白或供试样品，搅拌均匀。对于结晶的样品，在密闭的情况下，放置于不超过60的水浴中溶解，称样前冷却至室温，搅拌均匀。3.2样品的保存常温状态保存。4测定方法4.1方法提要或原理用水溶解蜂蜜试样，蜂蜜中的氯霉素残留用乙酸乙酯提取，提取液浓缩后再用水溶解，样液用PRS(丙磺酸阳离子交换柱)和C18柱净化，乙酸乙酯洗脱后，氮气吹干，硅烷化后用气质联用仪测定，外标法定量。4.2试剂和材料以下所用试剂，除特别注明者外，均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的二级水。4.2.1氯霉素对照品含氯霉素(C11H2O5N2C2)不得少于99.0%。4.2.2硅烷化试剂BFT=N,0-二三甲基硅三氟双乙酰胺(BSTFA)三甲基氯硅烷(TMCS)(99+1)。4.2.3甲醇色谱纯。4.2.4乙酸乙酯色谱纯。4.2.5正己烷色谱纯。4.2.6甲醇+水(1+9)取10mL甲醇与90mL水混合。4.2.7氯霉素标准储备溶液准确称取适量氯霉素标准品，用甲醇溶解开稀释成浓度为0.1mgmL的贮备液，置48冰箱1农业部781号公告一10一2006洗脱液在50水浴中氮气吹干，加入100L硅烷化试剂(4.2.2)，密封后涡旋混合1min,在70水浴中衍生反应1h,冷却到室温后氮气吹干，加正己烷溶解并定容至1.0mL,作为试样溶液，供气质联用仪分析。4.4.5标准曲线的制备准确量取适量氯霉素标准工作液，用甲醇稀释成浓度分别为5.0、10.0、50.0、100.0、200.0、400.0gL的标准溶液，分别取100L后按衍生化反应步骤衍生，得到系列浓度的衍生化产物，供气质联用仪分析。4.4.6测定4.4.6.1色谱条件载气：氨气，纯度99.999%。Rtx-5MS(30m0.25mm0.25m)石英毛细管柱或相当者；柱温：初始温度80，保持1min。然后以25min程序升温到260，保持5min。载气流速：1.0 mL/min;进样量：1L,进样方式：不分流进样，1min后开阀。进样口温度：280；接口温度：260；离子源温度：160。负化学源：150kV;反应气：甲烷，纯度99.99%；反应气压力：0.4MPa。检测离子：466,468,470,376。检测离子(m/)离子比(%)允许相对偏差(%)4661004688515%4703520%3762530%4.4.6.2气相色谱/质谱定性进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准样品衍生物的离子比相一致，则可判断样品中存在氯霉素。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够的灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式来确证。4.4.6.3气相色谱/质谱定量取适量试样溶液和相应的标准工作溶液，根据试样溶液中氯霉素残留量情况，作单点校准，以目标离子峰面积积分值定量。标准工作液及试样液中的氯霉素衍生物响应值均应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下，氯霉素衍生物保留时间约为10.2mi。氯霉素标准物质衍生物总离子流图参见附录A中的图A1。4.4.7空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4.5结果计算和表述按下式计算试料中氯霉素的残留量(g/kg)X=cxAIxLA2 m式中：X一试料中氯霉素的残留量，单位为微克每千克(gkg);C-氯霉素标准工作溶液的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；A一试样测定液中氯霉素的峰面积；3