农业部783号公告-5-2006 饲料中二硝托胺的测定 高效液相色谱法.pdf

农业部783号公告一5一20065.6高温炉，可控温在55015。6试样制备取有代表性的试样200g500g,用四分法缩至100g,粉碎，使全部通过0.45mm孔径的筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。7分析步骤7.1提取称取配合饲料试样20g(预混合饲料和浓缩饲料称样量为5g),准确至0.01g,置于250mL具塞磨口锥形瓶中，加入甲醇100.0mL,加塞，充分摇动1min,再置501恒温水浴(5.3)中不时振摇提取40min,加热开始时排除里面的空气。取出后冷却至室温，过滤。7.2净化取玻璃层析柱(5.4)，其下端用脱脂棉(4.3)塞住，用玻璃棒塞紧，高度大约为1cm,称取经活化的中性层析用氧化铝(4.4)5.0g于50mL烧杯中，用甲醇湿法填充，并用甲醇洗柱，备用。取滤液(7.1)20.0mL转入层析柱(5.4)，将流出液收集于50mL容量瓶中，以甲醇洗柱，并用甲醇定容至刻度，待测。7.3测定7.3.1HPLC测定参数的设定色谱柱：C1s柱，柱长150mm,柱内径4.6mm,粒度5m或性能类似的分析柱。柱温：室温。检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器，检测波长245nm。流动相组成：乙腈+水=30+70(V1+V2)流动相流速：l.0mL/min进样量：10L。7.3.2定量测定取适量由7.2获得的试样制备液和相应浓度的二硝托胺标准工作液(4.6.2)进行测定，以色谱峰峰面积做单点校准定量。8结果计算与表述8.1分析结果表示为试样中二硝托胺的含量，以质量分数X表示，以毫克每千克(g/kg)表示，可用公式(1)计算：X=P2yCV2nP:XmV3(1)式中：V1一一加入提取液的体积，单位为毫升(mL):V2一一二硝托胺标准溶液的进样体积，单位为微升(L):V3一试样溶液的进样体积，单位为微升(L)；P1一二硝托胺标准溶液对应的色谱峰面积响应值；P2一一试样溶液对应的色谱峰面积响应值；C一一二硝托胺标准溶液的浓度，单位为gL;m一试样质量，单位为克(g):n稀释倍数。