RHB 602-2005 牛初乳粉.pdf

阿 中国乳制品行业规范 RHBRHB 6022005 牛初乳粉 Bovine colostrum powder 20051212 发布 20051212 实施 中国乳制品工业协会 发布 发布 RHB 6022005 I 前 言 牛初乳是母牛分娩后最初几天所分泌的乳汁。20 世纪 50 年代以来，由于生理学、生物化学、医学及分子生物学的发展，发现牛初乳中不仅含有丰富的营养物质，而且含有大量的免疫因子和生长因子，如免疫球蛋白、乳铁蛋白、溶菌酶、类胰岛素生长因子、表皮生长因子等，具有免疫调节、改善胃肠道、促进生长发育、改善衰老症状、抑制多种病原微生物等一系列生理活性功能，因而被誉为“21 世纪的保健食品”。最近几年，牛初乳已成为食品及功能性乳制品开发的热点，牛初乳生产加工企业、牛初乳制品种类和品种越来越多。为更好地规范牛初乳产品市场，保护消费者合法权益，促使生产企业合法、公平竞争，引导牛初乳产业健康、持续发展，特制定本行业规范。本规范由中国乳制品工业协会提出并归口。本规范起草单位：新疆天润乳业生物制品股份有限公司、华南理工大学、上海科星生物技术有限公司、黑龙江福康生物技术有限公司、深圳海王科技有限公司、全国乳品标准化中心。本规范主要起草人：陆东林、曹劲松、王芸、张瑞梅、翟江伟、刘浩强、宁超美。本标准的附录 A 为规范性附录。RHB 6022005 1 牛初乳粉 1 范围 本规范规定了牛初乳粉的要求、检验方法、试验规则、标签、包装、运输和贮存。本规范适用于以牛初乳为原料，经杀菌、离心脱脂、低温干燥等工艺制成的粉末状或细结晶状产品。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。GB/T 4789.2 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 GB/T 4789.3 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定 GB/T 4789.4 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验 GB/T 4789.5 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验 GB/T 4789.10 食品卫生微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 GB/T 4789.11 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验。GB/T 4789.15 食品卫生微生物学检验 酵母和霉菌计数 GB/T 4789.18 食品卫生微生物学检验 乳与乳制品检验 GB/T 5009.12 食品中总铅的测定方法 GB/T 5009.13 食品中铜的测定方法 GB/T 5009.24 食品中黄霉素 M1和 B1的测定方法 GB/T 5009.194 保健食品中免疫球蛋白 IgG 的测定。GB/T 5413.1 婴幼儿配方食品和乳粉 蛋白质的测定 GB/T 5413.3 婴幼儿配方食品和乳粉 脂肪的测定 GB/T 5413.8 婴幼儿配方食品和乳粉 水分的测定 GB/T 5413.28 婴幼儿配方食品和乳粉 复原乳酸度的测定 GB/T 5413.32 乳粉 硝酸盐、亚硝酸盐的测定 GB 7718 预包装食品标签通用标准 国家质量监督检验检疫总局令第 75（2005）号定量包装商品计量监督管理办法 RHB 601 生鲜牛初乳 3 定义 下列定义适用于本规范。31 牛初乳（bovine colostrum）：是指从正常饲养的、无传染病和乳房炎的健康母牛分娩后 72 小时内所挤出的乳汁。4要求 41 原料要求 牛初乳：应符合 RHB 601 的规定。42 感官要求 感官要求应符合表 1 的规定。RHB 6022005 2 表 1 感官要求 项 目 要 求 色 泽 呈均匀一致的浅黄色或乳黄色 滋味、气味 具有牛初乳特有的腥味和奶香味 组织状态 均匀一致的粉末状或细结晶状，无结块，无肉眼可见杂质 4 3 理化要求 理化要求应符合表 2 的规定。表 2 理化要求 项 目 要 求 蛋白质，%40.0 免疫球蛋白（IgG）,%10.0 脂肪，%5.0 水分，%5.0 复原乳酸度，0T 50 4 4 卫生要求 卫生要求应符合表 3 的规定 表 3 卫生要求 项 目 要 求 铅（以 Pb 计），mg/kg 0.5 铜（以Cu计），mg/kg 10.0 硝酸盐（以 NaNO3计），mg/kg 100 亚硝酸盐（以 NaNO2计），mg/kg 2 黄曲霉毒素 M1，g/kg 5.0 酵母和霉菌，cfu/g 50 菌落总数，cfu/g 30000 大肠菌群，MPN/100g 90 致病菌（指肠道致病菌和致病性球菌）不得检出 45 浄含量 浄含量的负偏差应符合定量包娤商品计量监督管理办法的规定。5 试验方法 51 感官检验 511 色泽和组织形态：取两个销售包装单位的样品，散放于白色平盘中，在自然光下观察色泽和组织状态。512 滋味、气味：先闻气味，然后用温开水漱口，品尝样品的口味。52 理化检验 5.2.1 蛋白质：按 GB/T 5413.1 检验。5.2.2 免疫球蛋白（IgG）：按附录 A 检验。5.2.3 蛋白质：按 GB/T 5413.1 检验。5.2.4 脂肪：按 GB/T 5413.3 检验。5.2.5 水分：按 GB/T 5413.8 检验。RHB 6022005 3 5.2.6 复原乳酸度：按 GB/T 5413.28 检验。5.3 卫生检验 5.3.1 铅：按 GB/T 5009.12 检验。5.3.2 铜：按 GB/T 5009.13 检验。5.3.3 硝酸盐、亚硝酸盐：按 GB/T 5413.32 检验 5.3.4 黄曲霉毒素 M1：按 GB/T 5009.24 检验。5.3.5 酵母和霉菌：按 GB/T 4789.15 检验。5.3.6 菌落总数：按 GB 4789.2 和 GB 4789.18 检验。5.3.7 大肠菌群：按 GB 4789.3 和 GB 4789.18 检验。5.3.8 致病菌：按 GB 4789.4、GB 4789.5、GB 4789.10、GB 4789.11、GB 4789.18 检验。5.4 浄含量：用感量为 1.0g 的天平称量单件定量包装产品的质量，再称量包装容器的质量，计算称量差。6试验规则 61 产品应有批号，同一批原料为一个批次，采样量不得低于 1000g。62 检验分为出厂检验和型式检验。出厂检验只对蛋白质、脂肪、免疫球蛋白、水分、复原乳酸度、菌落总数和大肠菌群指标进行检验。型式检验为本规范规定的全部技术要求。下列情况之一应进行型式检验：新产品鉴定时；原料、工艺发生变化时；国家质检行政部门或用户提出要求时；停工停产达六个月以上恢复生产时。63 在其全部检验项目均符合规范要求时，判该批产品为合格品；有一项（或多项）不符合规范要求时，可自同批产品再次随机取样进行该项目（或多项目）的复检，在复检项目均符合规范要求时，判该批产品为合格品；如仍有一项不符合规范要求时，则判该批产品为不合格品。微生物指标检验不符合规范要求时，不得复检，直接判该批产品为不合格品。7.标签、包装、运输和贮存 71 标签 711 产品标签按 GB 7718 的规定标示，同时还应标示蛋白质和免疫球蛋白（IgG）的含量。712 使用附录A中方法二测得的免疫球蛋白（IgG）的含量可以标示为“活性免疫球蛋白的含量”。72 包装 包装应采用符合食品卫生要求的包装材料。73 运输 运输产品时应避免日晒、雨淋。不得与有毒、有害、有异味或影响产品质量的物品混装运输。74 贮存 产品应贮存在干燥、通风良好的场所。不得与有毒、有害、有异味、易挥发、易腐蚀的物品同处贮存。RHB 6022005 4 附 录 A（规范性附录）牛初乳中 IgG 的测定 方法一 高压液相色谱法 按 GB/T 5009.194 的规定进行。方法二 单向免疫扩散法 A.1 方法原理 本方法为琼脂扩散法，单向琼脂扩散试验又称作单向免疫扩散试验，是指可溶性抗原在含相应抗体的琼脂介质中的扩散，当两者以等价浓度相遇时，即形成明显的沉淀环。在一定的抗体浓度下，沉淀环的直径与抗原浓度的对数在一定扩散温度和时间范围内成直线关系，因此采用该方法可用于抗原的定量测定。以沉淀环直径为横坐标，相应孔中抗原量的对数值为纵坐标，绘制标准曲线，待测标本中的抗原量即可从标准曲线中查出。A.2 设备和材料 A.2.1 恒温箱：3610C。A.2.2 无菌塑料平皿（直径d=9cm）。A.2.3 无菌吸管：10mL，带橡胶乳头的滴管数只。A.2.4 量筒：100 mL。A.2.5 容量瓶：100 mL。A.2.6 湿盒：带盖白瓷盘，盘底铺34层纱布。A.2.7 小烧杯数个。A.2.8 纱布。A.2.9 打孔器：0.3cm A.2.10 天平：0.0001g A.2.11 微量进样器：10.0L、200L、1000L A.2.12 离心机：5000rpm。A.3 培养基和试剂 A.3.1 0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液；A.3.2 0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液；A.3.3 0.01mol/L pH6.8磷酸盐缓冲溶液；取 0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液 49.0mL 和 0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液 51.0mL 混合后，添加 0.02%的叠氮钠,再用蒸馏水稀释至 1000mL 即可。A.3.4 1.0%1.5%琼脂糖；取 1.01.5g 琼脂溶于 100mL 0.01mol/L pH6.8 磷酸盐缓冲溶液，加热溶解后，1210C 高压灭菌RHB 6022005 5 15min，冷却后置 4oC 冰箱中冷藏备用。A.3.5 标准牛IgG：纯度99.99%以上，Sigma公司。标准牛IgG抗血清（即二抗）：兔抗牛IgG，Sigma公司。A.4 操作步骤 A.4.1 样品处理 称取生鲜牛初乳大约 10.0g（牛初乳粉称取大约 1.0g），用少量 0.01mol/L pH6.8 磷酸盐缓冲溶液溶解后，移至 100ml 容量瓶定容，然后将稀释后的样品溶液于 500010000rpm 离心 510min，脱除脂肪、酪蛋白，取上清液用 0.01mol/L pH6.8 磷酸盐缓冲溶液进行一定倍数的稀释（参考范围 230倍），配制成 IgG 含量大约为 200g/mL 的溶液，再进行测定。A.4.2 琼脂平板的制备 将琼脂培养基加热溶化，冷却至 52oC-55oC，在保温状态下加入抗血清（抗血清效价为 1:32），每 15mL 琼脂中加入 0.150.2mL 抗血清。轻轻摇动混匀（防止产生气泡），铺板，冷凝后用打孔器打孔，每两孔间的间距控制在 1.52.0cm 左右，每孔与平皿壁相距 1.0cm左右，每个平皿可以打 13个孔，打完后用酒精灯微加热封底（使培养基与玻璃板牢固结合）后待用。A.4.3 点样与培养 准确称取 1.0mg 标准 IgG，加入 0.01mol/L pH6.8 磷酸盐缓冲溶液 1.0mL，充分溶解、摇匀后配成浓度为 1.0 mg/mL IgG 标准液，然后再用磷酸盐缓冲溶液梯度稀释，分别配成 100、50、25、12.5、6.25 mg/100mL 浓度的系列标准液（各 0.5mL），用于标准曲线的绘制。取不同浓度的（100、50、25、12.5、6.25 mg/100mL）IgG 标准溶液 10.0L 和不同稀释倍数的样品稀释液各 10.0L 分别加入平皿中的各孔内，同样做三个平行试验，置于湿盒中 37oC 扩散 24小时后，用游标卡尺准确测量沉淀环的直径。样品沉淀环以较大稀释倍数且直径落在标准曲线内为准。A.4.4 结果计算 以标准样品IgG浓度（mg/100mL）的lg对数为纵坐标（对数坐标），对扩散环直径d2（mm，横坐标）作图，绘制半对数标准曲线（拟合成直线）。根据样品沉淀环直径，从标准曲线上读取样品浓度值C（mg/100mL），再用下式计算：样品中IgG的百分含量（%）=（C样品稀释倍数）/样品重量（g）0.1