农业部1163号公告-5-2009 动物性食品中氨苄西林残留检测 高效液相色谱法.pdf

农业部1163号公告一5一2009前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准由华中农业大学负责起草。本标准主要起草人：袁宗辉、陈冬梅、陶燕飞、王玉莲、刘振利、黄玲利、彭大鹏、戴梦红。本标准系首次发布的国家标准。I农业部1163号公告52009取均质后的供试样品，作为供试试料；取均质后的空白样品，作为空白试料。4.4.2提取称取肌肉试料5.0g,置于50mL玻璃离心管中，加磷酸缓冲液15mL,振荡5mi混匀，加正己烷5mL,振荡混匀，3000r/min离心15min,弃掉正己烷层（上层），转移水层（中间层）至另一洁净玻璃离心管中；然后，用磷酸盐缓冲液10mL和正己烷5mL重复提取2次，除去正已烷层，合并3次的提取液(水层)供SPE净化。称取肝脏或肾脏试料5.0g,置于50mL离心管中，加入乙腈20mL,混匀，再加入正己烷5mL,混匀，静置5min,3000r/min离心l5min,除去正已烷层，转移乙腈层至另一离心管中。残渣中加入磷酸盐缓冲液10mL和正己烷5mL,混匀，静置，3000r/min离心l5min,除去正己烷层，水层与乙腈层合并，供SPE净化。量取牛奶样品5.0mL置于离心管中，加四丁基溴化铵溶液10mL轻摇混匀，3000r/min离心10min,取上清液，再按上述操作重复2次。合并3次上清液，加正已烷10mL。振荡混匀，静置10min,除去正已烷层，在45一50水浴旋转蒸发至3mL4mL,供SPE净化。4.4.3净化固相萃取柱依次用甲醇、水、氯化钠溶液和磷酸缓冲液各3L活化，将提取液过C18固相萃取柱，用水1mL淋洗、乙腈3mL洗脱，用10mL的玻璃离心管收集洗脱液，4550水浴氯气吹干。4.4.4衍生化反应洗脱液45氮气吹干，加标准稀释液0.5mL旋涡振荡溶解，转入1.5mL聚丙烯离心管中，加苯甲酸酐溶液25L,旋涡混匀，50水浴反应5mi,冰浴、快速冷却，加衍生化试剂250L,旋涡混匀，65水浴反应10min,快速冰浴冷却，410000r/min离心l0min,取上清液供高效液相色谱分析。4.4.5标准曲线的制备用标准稀释液稀释得到氨苄西林浓度分别为104g/L、25g/L、50g/L、100g/L、250g/L500g/L、1000ug/L、1500g/L标准溶液。取标准液0.5mL,按照4.4.4步骤进行衍生，高效液相色谱分析，每个浓度重复3次，将每测得的峰面积与对应浓度拟合，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。4.4.6测定4.4.6.1色谱条件色谱柱：C8柱，柱长150mm,内径3.9mm,粒径5m;或相当者；流动相：A相十B相=65+35；流速：lml/min;紫外检测波长：325nm;柱温：30；进样量：50L。4.4.6.2色谱测定取衍生后的溶液和相应的标准溶液，做单点或多点校准，按外标法，以峰面积定量。4.5空白试验取空白试料，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4.6结果计算和表述4.6.1试料中氨卡西林的残留量(ug/kg)按式(1)计算：X=AXGXVAs xW*,(1)式中：3