GHT 1280-2019 蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松 素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素 和高良姜素含量的测定 反相高效液相色谱法.pdf

ICS 65.140 B 47 中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准 GH/T 12802019 蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素含量的测定 反相高效液相色谱法 Determination of cafferic acid,p-coumaric acid,ferulic acid,pinobanksin,pinocembrin,3-O-acetylpinobanksin,chrysin and galangin in propolis-Reversed-phase high performance liquid chromatography method 2019-11-28 发布 2020-03-01 实施 中华全国供销合作总社 发 布 GH/T 1280-2019 1 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写的编写规则。本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准由全国蜂产品标准化工作组归口。本标准起草单位：浙江大学、杭州蜂之语蜂业股份有限公司、杭州天厨蜜源保健品有限公司、缙云县绿纯养蜂专业合作社。本标准主要起草人：胡福良、张翠平、周萍、王磊、胡元强。GH/T 1280-2019 2 蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素含量的测定 反相高效液相色谱法 1 1 范围 本标准规定了蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素的反相高效液相色谱检测方法。本标准适用于蜂胶及蜂胶乙醇提取物中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素-3-O-乙酸酯、白杨素和高良姜素的测定。本标准液相色谱的检出限：咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素分别为 0.41、0.39、1.20、0.29、1.11、1.49、0.86、0.91g/mL。本标准液相色谱的定量限：咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素分别为 1.35、2.16、4.00、0.98、3.69、4.97、2.88、3.03g/mL。2 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。3.1 蜂胶 propolis 工蜂采集树脂等植物分泌物与其上颚腺、蜡腺分泌物等混合形成的胶粘性物质。4 4 原理 GH/T 1280-2019 3 试样经乙醇提取，浓缩，再溶解于甲醇，用反相高效液相色谱仪紫外检测器在 280 nm 处检测，外标法定量。5 5 试剂与材料 实验室用水应符合 GB/T6682 规定的一级水。除非另有规定，所有试剂均为分析纯。5.1 甲醇：色谱纯。5.2 乙醇。5.3 乙酸，色谱纯。5.4 流动相：甲醇（5.1）和 1%乙酸（5.3）梯度洗脱。5.5 咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素标准品：纯度98%5.6 咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素标准储备液：准确称取适量的每种标准物质（5.5），用甲醇溶液（5.1）配成 1.0 mg/mL 的标准储备溶液，于 4冰箱保存，可保存 6 个月。5.7 咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素标准工作液：吸取适量 1.0 mg/mL 的标准贮备液（5.6），用甲醇溶液（5.1）分别稀释成适当浓度的标准工作溶液，现用现配。5.8 滤膜：0.45 m，有机系。6 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。6.2 粉碎机。6.3 旋转蒸发仪。6.4 超声波清洗器。7 7 试样准备与保存 7.1 试样的准备 取代表性试样适量，冷冻，粉碎，混匀，作为备检试样。7.2 试样保存 将试样于 04保存。GH/T 1280-2019 4 8 8 操作步骤 8.1 蜂胶样品预处理 准确称取 10.0 g（精确到 0.1 g）蜂胶试样，用 30 mL 95%乙醇超声提取，每次用时 15 min，共提取 3 次，合并滤液，定容至 100 mL（V1）。取 10 mL（V2）减压蒸干，用 25 mL （V3）甲醇超声溶解并定容，0.45 m 滤膜过滤，供测定。8.2 色谱条件 色谱柱：Sepax HP-C18，柱长 150 mm，内径 4.6 mm，粒度 5 m；或性能相当的色谱柱。流动相流速：1.0 mL/min。梯度洗脱：洗脱程序参见附录 A 表 A.1。检测波长：280 nm。柱温：33。进样量：5 L。8.3 测定 取5 L样品溶液（8.1）、标准工作溶液（5.7）分别进样分析，绘制标准曲线，外标法定量。色谱图参见附录 A 图 A.1。9 9 结果计算与表示 9.1 结果计算 试样中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素含量（X）以毫克每克（mg/g）表示，按式（1）计算：C V 3V 2 mV 1 (1)式中：CS标准工作曲线上计算得到的样液中化合物的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V1试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；V2从试样溶液中取出的待测体积（mL）；V3待测试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；m样品质量，单位为克（g）。9.2 结果表示 将符合重复性要求的两个独立测定值的算术平均值作为测定结果（mg/g），保留两位有效数字。平行试验相对偏差不得超过2.0%。X GH/T 1280-2019 5 附 录 A（资料性附录）高效液相色谱法梯度洗脱程序和色谱图 表A.1 高效液相色谱法梯度洗脱程序 时间 min 流速 mL/min 甲醇%1%乙酸%0 1 15 85 30 1 40 60 65 1 55 45 70 1 62 38 80 1 100 0 90 1 15 85 GH/T 1280-2019 6 图A.1 咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素混合标准品和蜂胶的色谱图 图1混合标准品和蜂胶的的HPLC图谱 A：混合标准品；B：蜂胶 1.咖啡酸、2.p-香豆酸、3.阿魏酸、4.短叶松素、5.松属素、6.短叶松素3-乙酸酯、7.白杨素、8.高良姜素