GHT 1314-2020 蜂蜜中甘露糖含量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.180.10 CCS X31 中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准 GH/T 13142020 GH 蜂蜜中甘露糖含量的测定 高效液相色谱法 Determination of Mannose in Honey High performance liquid chromatography method 2020-12-07 发布 2021-03-01 实施 中华全国供销合作总社 发 布 GH/T 13142020 1 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由中华全国供销合作总社提出。本文件由全国蜂产品标准化工作组（SAC/SWG2）归口。本文件起草单位：秦皇岛海关技术中心。本文件主要起草人：贾光群、崔宗岩、葛娜、纪欣欣、魏红跃、徐立英、曹彦忠、李学民、张进杰。GH/T 13142020 2 蜂蜜中甘露糖含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了蜂蜜中甘露糖含量测定的高效液相色谱法。本文件适用于洋槐蜜、油菜蜜、荆条蜜、椴树蜜、百花蜜中甘露糖含量的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理 试样用水溶解，乙腈定容后，过滤，液相色谱-蒸发光散射法测定，外标法定量。5 试剂和材料 5.1 乙腈：色谱纯。5.2 水：GB/T6682 规定的一级水。5.3 三乙胺：优级纯。5.4 乙腈+水溶液（40：60，v/v）：准确量取 40 mL 乙腈（5.1）置于 100mL 容量瓶中，用水（5.2）定容，摇匀。5.5 甘露糖标准物质：CAS：3458-28-4，纯度99%。5.6 甘露糖标准储备溶液：称取 0.2 g 甘露糖标准物质（5.5）（精确至 0.1mg），置于 10mL 容量瓶中，加入 6 mL 水溶解，用乙腈定容，摇匀。甘露糖标准储备液浓度为 2 g/100mL。该储备液储存在 4 条件下，有效期 3 个月。5.7 甘露糖标准工作溶液：分别吸取甘露糖标准储备溶液（5.6）25 L、50 L、100 L、250 L 至 10mL容量瓶中，用乙腈+水（40：60，v/v）（5.4）定容，分别配制成 0.005 g/100mL、0.01 g/100mL、0.02 g/100mL、0.05 g/100mL 浓度的甘露糖标准工作溶液，用于绘制标准工作曲线。该工作溶液现用现配。6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪：配有蒸发光散射检测器。GH/T 13142020 3 6.2 分析天平：感量 0.1mg 和 0.001g。6.3 微量可调移液器：量程 100L 和 1mL。6.4 有机相过滤膜：0.22m。6.5 样品瓶：2mL。6.6 容量瓶：10mL，100mL。7 试样制备与保存 7.1 试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过 60 的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出 0.5 kg 作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。7.2 试样的保存 将试样于常温下保存。8 测定步骤 8.1 样品前处理 用天平（6.2）称取 10 g 试样（精确至 0.001g）置于 100 mL 烧杯中，加入 30 mL 水，用玻璃棒搅拌使试样完全溶解，转移至 100mL 容量瓶（6.6）中，再用 10 mL 水洗烧杯并转移至上述 100mL 容量瓶中，重复 3 次，然后用乙腈定容，混匀。用 0.22m 滤膜（6.4）将样液过滤入样品瓶（6.5）中，供高效液相色谱仪（6.1）测定。8.2 测定 8.2.1 液相色谱参考条件 色谱条件应当满足甘露糖与果糖、葡萄糖的分离度大于 1.5，液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：Amide 1.7 m 150 mm2.1 mm i.d（或相似规格）；b)流动相：A，0.1%三乙胺（5.3）-乙腈溶液；B，水。梯度洗脱条件见表 1；c)流速：0.25 mL/min；d)柱温：60；e)漂移管温度：75；f)气体压力：40 psi g)喷雾器模式：加热，动力水平为 60%；h)进样量：3 L。表 1 梯度洗脱条件（A，0.1%三乙胺-乙腈溶液；B，水）时间（min）流速（mL/min）A(%)B(%)初始 0.25 92 8 15 0.25 92 8 16 0.25 65 35 20 0.25 65 35 21 0.25 92 8 25 0.25 92 8 GH/T 13142020 4 8.2.2 液相色谱测定 将甘露糖标准工作液（5.7）按照上述色谱条件上机测定，记录色谱峰峰高或峰面积，以峰面积或峰高为纵坐标，以标准工作溶液浓度为横坐标，采用幂函数方程绘制标准曲线，或根据色谱工作站自动化计算。在上述色谱条件下，甘露糖的参考保留时间为 9.2 min，色谱图参见附录 A.1 和 A.2。8.3 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。8.4 空白试验 除不称取样品外，均按上述步骤进行。9 结果计算 结果按照色谱工作站自动计算或按式（1）计算：X=C V 10000 （1）m 式中：X试样中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为克每百毫升（g/100mL）；V样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m所称试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值 10 定量限 本文件中甘露糖的定量限为500 mg/kg。11 精密度 平行试验两次测定的绝对差值不超过其算数平均值的 15%。GH/T 13142020 5 附 录 A （资料性）甘露糖标准工作溶液和代表性添加甘露糖样品的液相色谱-蒸发光检测色谱图 甘露糖标准工作溶液的液相色谱-蒸发光检测色谱图参见图A.1。图 A.1 甘露糖标准工作溶液（0.05 g/100mL）的液相色谱-蒸发光检测色谱图 代表性添加甘露糖样品的液相色谱-蒸发光检测色谱图参见图 A.2。图A.2 代表性添加甘露糖（5000 mg/kg）样品的液相色谱-蒸发光检测色谱图 甘露糖甘露糖LSU0.006.0012.0018.0024.0030.0036.00分钟0.004.008.0012.0016.0020.00甘露糖甘露糖LSU0.008.0016.0024.0032.0040.00分钟0.004.008.0012.0016.0020.00