GBZT 240.23-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第23部分：迟发性神经毒性试验.pdf

ICs 13.100C52中华 人 民共 和 国 国家 职 业 卫生 标 准GBz/T240.23-z 011学品毒理学评价程序和试验方法第23部分:迟发性神经毒性试验Pr o c e d u r e s a n d t e s t s Fo r t o x i c o Io g i c a I e v a l u a t i o n s o F c h e m i c a Is Pa r t 23:De Ia y e d n e u r o t o x i c i t y t e s t11-OB-19发布z O12-03-01实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部发布GBz/T240.23-2011曰根据 中华人民共和国职业病防治法 制定本部分。GBZ/T240KK化学品毒理学评价程序和试验方法 现分为以下四十四部分:第1部分:总则;第2部分:急性经 口毒性试验;第3部分:急性经皮毒性试验;第4部分:急性吸人毒性试验;第5部分:急性眼刺激性/腐蚀性试验;第6部分:急性皮肤刺激性/腐蚀性试验;第7部分:皮肤致敏试验;第8部分:鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验;第9部分:体外哺乳动物细胞染色体畸变试验;第10部分:体外哺乳动物细胞基因突变试验;第11部分:体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验;第12部分:体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验;第13部分:哺乳动物精原细胞/初级精母细胞染色体畸变试验;第14部分:啮齿类动物显性致死试验;第15部分:亚急性经口毒性试验;第16部分:亚急性经皮毒性试验;第17部分:亚急性吸人毒性试验;第18部分:亚慢性经口毒性试验;第19部分:亚慢性经皮毒性试验;第20部分:亚慢性吸人毒性试验;第21部分:致畸试验;第22部分:两代繁殖毒性试验;第23部分:迟发性神经毒性试验;第24部分:慢性经 口毒性试验;第25部分:慢性经皮毒性试验;T一第26部分:慢性吸人毒性试验;第27部分:致癌试验;第28部分:慢性毒性/致癌性联合试验;第29部分:毒物代谢动力学试验;一第30部分:皮肤变态反应试验-局部淋巴结法;第31部分:大肠杆菌回复突变试验;丁第32部分:酵母菌基因突变试验;第33部分:果蝇伴性隐性致死试验;第34部分:枯草杆菌基因重组试验;第35部分:体外哺乳动物细胞程序外DNA合成(UD9试验;第36部分:体内哺乳动物外周血细胞微核试验;亠刖GBz/T240.23-2011第37部分:体外哺乳动物细胞姊妹染色单体交换试验;第38部分:体内哺乳动物骨徒细胞姊妹染色体交换试验;第39部分:精子畸形试验;第d O部分:繁殖/生长发育毒性筛选试验;第狃部分:亚急性毒性合并繁殖/发育毒性筛选试验;第42部分:一代繁殖试验;第43部分:神经毒性筛选组合试验;第d d 部分:免疫毒性试验。本部分为GBz/T扭0的第23部分。本部分由卫生部职业卫生标准专业委员会提出。本部分由中华人民共和国卫生部批准。本部分起草单位:山东省职业卫生与职业病防治研究院、中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所。本部分主要起草人:陶玉珍、李斌、孙金秀、林铮。GBz/T240.23-2011化学品毒理学评价程序和试验方法第23部分:迟发性神经毒性试验1 范围GBZ/T240的本部分规定了动物迟发性神经毒性试验的 目的、试验概述、试验方法、数据处理与结果评价、评价报告和结果解释。本部分适用于有机磷化合物的迟发性神经毒性测定。若某些受试样品的化学结构式与迟发性神经毒性阳性物质相似,也需进行此项试验。试验分为急性和亚急性迟发性神经毒性试验。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注 日期 的引用文件,仅所注 日期的版本适用于本文件。凡是不注 日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GBZ/T224 职业卫生名词术语GBZ/T240.1 化学品毒理学评价程序和试验方法 第1部分:总则3 术语和定义GBZ/T240.1界定的术语和定义适用于本文件。3.1有机磷引起的迟发性神经毒性 o r g a n o p h o s p h o m s i n d u c e d d e Ia y e d n e u m t o Xi c i t y,o PIDN一种神经综合征,主要的临床症状为四肢无力、上位运动神经元损伤性痉挛,其相关 的病理学症状是周围神经和脊髓远端轴突病,生化作用是神经组织 中的神经病靶酯酶(n e u r o p a t h y t a r g e t e s t e r a s e,NTE)抑制和老化。暴露引起 的NTE抑制和随后 的老化,其临床体征和病理改变首先见 于第1周2周间。3.2神经病靶酯酶 n e u r o p a t h y t a r g e t e s t e r a s e,NTE又称神经毒性酯酶(n e u r o t o x i c e s t e r a s 是膜结合蛋 白,催化戊酸苯酯水解。该酶与有机磷共价结合发生磷酰化后,即被抑制或老化,与0PIDN之间有着密切关系。并不是所有抑制NTE的有机磷都能引起OPIDN,但是所有引起OPIDN的有机磷都能抑制NTE。4 试验 目的检测和评价受试样品是否具有迟发性神经毒性作用。迟发性神经毒性作用主要表现为运动性共济失调和瘫痪,在组织病理学上神经组织呈脱髓鞘变化。5 试验概述在急性迟发性神经毒性试验中,高剂量采用最大耐受剂量,一次给药后观察21d。在亚急性神经毒1GBz/T240.23-2011性试验中,连续给药28d 后,继续观察14d。试验期间需对动物全面观察,内容包括:行为异常、运动失调、瘫痪等,试验中定期进行生化检验,特别是NTE测定,并于试验结束时进行神经组织的病理学检查等。6 试验方法6.1 急性迟发性神经毒性试验6.1.1 实验动物选用8个月 12个月健康g 2000g。受试样品组和介质对照组每组至少12只,察适应3d。6.1.2 饲养条件单笼饲养,饲养人工照明,应12h照明,12h 黑暗,适6.1.3 试验分组6.1.3.1 一般设标检验,6只动物用于病理解剖6.1.3.2 先求出6.1.3.3 剂量100倍剂量。则不予考虑,但6.1.3.4 当受试当人的实际接触6.1.3.5 介质对6.1.3.6 阳性对给予迟发性神经重。也可采用近毒性阳性物,如三邻期的阳性对照数据。6.1.4 试验步骤6.1.4.1 动物准备试验前动物隔夜禁食,但不限6.1.4.2 受试样品的配制受试样品采用水溶液、混悬液或油溶液。灌 胃量可根据各组不同剂量按5m L/k g 体重给予。如采用注射给药,一般按1m L/k g 体重给予。6.1.4.3 染毒通常采用一次经口灌 胃给药,也可采用胶囊或母鸡翅膀下注射给药。给予受试样品前10m h 15m i n 应大腿肌肉注射硫酸阿托品作保护处理,用量为l O m g/k g 体重,以对抗急性副交感神经中毒症状,同时肌 肉注射解磷定25m g/k g 体重,以防止对胆碱酯酶 的不可逆抑制。2锣口刁x、u/丌,q 日1t少6只。试验前置于品对母鸡半数致死量达每 日效应,更高给受试证至少剂量。GBz/T240.2-20116.5 观察指标6.1.5.1 临床观察6.1.5.1.1 给予受试样品后直到21d 每天至少观察一次,记录有无行为异常,运动性共济失调,瘫痪等症状。在开始给予受试样品的两天应每天至少观察3次 5次。6.1.5.1.2 详细记录包括出现中毒症状的时间、程度及持续时间。6.1.5.1.3 每周至少两次将母鸡拿 出笼子强迫活动,以观察有无迟发性神经毒性的最小反应。6.1.5.1.4 每周测体温一次、称体6.1.5.1.5 出现濒死状态的6.1.5.1.6 共济失调按以o 无反应;A 腿软、B 步态C能D 不6.1.5.2 生化给予受死,阳性对照组随缓慢,可适 当延迟机选择3只母测定时间处死脑和脊髓 的形动物应仔细观察6.1.5.3病6.1.5.3.1剖取材,或用原位灌注固定法处死6.1.5.3.2 主脑:包括脊髓:包括周围神经:坐6.1.5.3.3 神经组织切行髓鞘或轴索等特殊染色。6.2 亚急性迟发性神经毒性6.2.1 动物同急性迟发性神经毒性试验(见6.1。D。6.2.2 饲养条件同急性迟发性神经毒性试验(见6.1.2)。6.2.3 试验分组设3个剂量组和1个介质对照组。每组应有足够的母鸡数,保证至少有6只用做生化检验,6只于末次给药后继续观察并于试验结束时进行病理形态学观察。剂量选择应参考急性毒性测试结果和有关资料:3V、冫u 冂、卜娈即处死,解剖检查。h、48h 后必要时可变情况。及腰骶结合骨神经及其侧支。常规苏木精伊红(HE)染态稍异常;GBz/T240.23-2011高剂量应引起明显的毒性效应,但不能引起死亡或严重伤害。中剂量应出现极轻微中毒变化。低剂量不应出现任何毒作用。如果1000m g/k g 体重未产生可观察到的毒性作用,则不必进行更高剂量的测试。但当预期的八接触量高于此剂量时则应加大剂量进行测试。6.2.4 试验步骤6.2.4.1 受试样品配制首选灌 胃或胶褒给药。受试样品采用水溶液、混悬液或油溶液。灌 胃量可根据各组不 同剂量按5m L/k g 体重给予。6.2.4.2 染毒每 日一次经口给药,每周7d,连续28d,末次给药后继续观察14d。6.2.5 观察指标6.2.5.1 临床指标给药期间和观察期间每天至少观察一次,记录有无行为异常,运动性共济失调,瘫痪等症状。具体观察和记录见6.1.5.1。6.2.5.2 生化检验观察期间进行生化检验,分别于末次给药后24h 和 48h 各从每个受试样品组和介质对照组随机选择3只母鸡进行NTE和ACh E测定。6.2.5.3 病理组织学检查观察期满处死剩余母鸡,每组6只解剖取脑、脊髓及远端周围神经组织进行病理组织学检查。见急性迟发性神经毒性试验(见6.1.5.3)。7 数据处理与结果评价7.1 数据处理将受试样品组与阳性对照组、介质对照组做比较,进行统计分析,以确认是否有迟发性神经毒作用。7.2 结果评价7.2.1 评价内容包括临床神经毒性症状、生化检验和病理检查结果及可观察到的其他毒性效应。对发生率、严重程度及相关性作出评价。7.2.2 阳性对照组应出现共济失调障碍,病理组织学证实有脱髓鞘改变,介质对照组无上述改变。7.2.3 出现阳性时,需求得无作用剂量,进一步评价受试样品与神经毒性的反应关系、发生率和严重程度。7.2.4 评价要列出以下简表,包括:D 一般症状变化,出现神经毒性症状 的类型、严重程度,计算 出百分率、死亡率、体重变化、摄食量;4GBz/T240.23-2011 食物利用率g(每周平均增加体重/每周平均进食量)100%;生化检验结果;病理组织学检查结果及照片:8 评价报告除GBz/T z d O。1规定的一般项 目外,评价报告还应包括以下内容:a,体重的数据;b,各剂量的毒性效应,效据包括死亡倌况;临床症状 的性质,严重程度和持续时间(无论是否可逆);o 生化检验方法和结果:详细描途;o 尸裣结果;o 所有病理组织学检查的详细结果;f)结论。9 结果解释迟发性神经毒性试验能够提供受试样品急性或亚急性染毒的迟发性神经毒性作用资料。虽然其试验结果仅能有限地外推到人,但它可为确定人群接触的无作用水平和允许接触水平提供有价值的信息。