DBS13 009-2017 食品安全地方标准 小麦粉中偶氮甲酰胺的测定高效液相色谱法.pdf

2017-11-08 发布2018-02-01 实施DBS13河北省地方标准DBS13/0092017食品安全地方标准小麦粉中偶氮甲酰胺的测定高效液相色谱法河北省卫生和计划生育委员会河北省卫生和计划生育委员会发布发布DBS13/00920171前言本标准按照GB/T 1.1-2009规定的格式编写。本标准由河北省卫生和计划生育委员会归口。本标准于2017年11月8日首次发布。DBS13/00920171食品安全地方标准小麦粉中偶氮甲酰胺的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了小麦粉中偶氮甲酰胺的高效液相色谱测定方法。本标准适用于小麦粉中偶氮甲酰胺含量的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 5009.1 食品卫生检验方法 理化部分 总则GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3原理样品中的偶氮甲酰胺用丙酮进行提取，经浓缩、脱脂、过滤后，高效液相色谱法测定，外标法定量。4试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682一级水要求。4.1乙腈：色谱纯。4.2丙酮：色谱纯。4.3正己烷：色谱纯。4.4磷酸。4.5磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）。4.6辛烷磺酸钠。4.7标准品：偶氮甲酰胺（C2H6N6O2，CAS 号：123-77-3）纯度大于或等于 99%。4.8色谱柱 1：C18柱，柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 m，或相当者。4.9色谱柱 2：氰基（CN）柱，柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 m，或相当者。4.1010 mmol/L 辛烷磺酸钠-5 mmol/L 磷酸氢二钾溶液：称取 1.08 g 辛烷磺酸钠（4.6），0.57 g 磷酸氢二钾（4.5）加水溶解并定容至 500 mL，用磷酸（4.4）溶液调节 pH 至 3.5。4.115 mmol/L 磷酸氢二钾溶液：称取 0.57 g 磷酸氢二钾（4.5）加水溶解并定容至 500 mL。DBS13/009201724.12 标准储备液：准确称取适量偶氮甲酰胺标准品（4.7），用 5 mmol/L 磷酸氢二钾溶液（4.11）或水溶解并配制成含偶氮甲酰胺 100 mg/L 的标准储备液，现用现配。注：使用色谱柱1用5 mmol/L磷酸氢二钾溶液（4.11）溶解，使用色谱柱2用水溶解。以下标准工作液和样品液的定容溶剂与本条相同。4.13 基质标准工作液：准确移取一定体积的标准储备溶液（4.12），用空白样品处理液稀释成浓度适当的标准工作液，现用现配。4.14 微孔滤膜：0.45 m，水系。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2高速离心机。5.3超声波振荡器。5.4旋转蒸发仪。%.1涡旋混合器。5.5离心管。5.6分析天平：感量分别为 0.01 g 和 0.1 mg。6分析步骤6.1样品制备试验前应将获取的样品充分混匀，样品制备方法按 GB/T 5009.1 执行。6.2样品处理称取小麦粉样品 2 g（精确至 0.01 g）于 50 mL 具塞离心管中，加入 15 mL 丙酮（4.2）超声振荡提取 15 min，在 7000 r/min 下离心 5 min，将上清液转移至 50 mL 浓缩瓶中，再用 10 mL 丙酮重复提取一次，合并提取液于浓缩瓶中，于常温下减压浓缩至干。残渣用 2 mL5 mmol/L 磷酸氢二钾溶液（4.11）或水超声涡旋 5 min 复溶。再加入 3 mL 正己烷（4.3）脱脂，静置分层后，取下层溶液过 0.45 m 水系微孔滤膜（4.14），滤液供高效液相色谱仪分析。6.3高效液相色谱参考条件色谱条件可以参照以下用于任何一种色谱柱的测定。6.2.1 用于色谱柱 1 测定的条件a)色谱柱：C18柱，柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 m，或相当者；b)流动相：10 mmol/L 辛烷磺酸钠-5 mmol/L 磷酸氢二钾溶液（A）（4.10）-乙腈（B）：80+20，v+v；c)流速：0.5 mL/min；DBS13/00920173d)检测波长：245 nm；e)进样量：20 L；f)柱温：30。6.2.2 用于色谱柱 2 测定的条件a)色谱柱：CN 柱，柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 m，或相当者；b)流动相：水（A）-乙腈（B）：80+20，v+v；c)流速：0.8 mL/min；d)检测波长：245 nm；e)进样量：20 L；f)柱温：30。6.4空白试验除不加样品外，均按上述测定步骤进行。6.5测定在仪器最佳状态下测定基质标准工作液和样品溶液，保证所测样品中待测物的响应值均在线性范围内，如果超出标准曲线范围，应用 5 mmol/L 磷酸氢二钾溶液（4.11）或水对样品溶液进行适当稀释。以待测物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。以保留时间定性，外标法定量。基质标准工作液和样品溶液的测定应在 4 h 内完成。7结果计算样品中偶氮甲酰胺的含量按式（1）计算，计算结果需扣除空白值：10001000CVXm.(1)式中：X样品中被测物含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C由标准曲线得出的样品溶液中被测物的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m样品质量，单位为克（g）。计算结果保留三位有效数字。8检出限和定量限小麦粉中偶氮甲酰胺的检出限为 1.5 mg/kg，定量限为 5 mg/kg。DBS13/00920174附录 A（资料性附录）标准色谱图图A.130 mg/L偶氮甲酰胺标准溶液色谱图（用于色谱柱1测定）图A.230 mg/L偶氮甲酰胺标准溶液色谱图（用于色谱柱2测定）