SZDBZ 349-2019 食品中总黄酮的测定 分光光度法.pdf

ICS 67.050 X 04 SZDB/Z 深 圳 市 标 准 化 指 导 性 技 术 文 件 SZDB/Z 3492019 食品中总黄酮的测定 分光光度法 Determination of Total flavonoids in Foods Spectrophotometry 2019-01-28 发布 2019-03-01 实施深圳市市场和质量监督管理委员会 发 布 SZDB/Z 3492019 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 原理.1 4 试剂和材料.1 5 仪器和设备.1 6 分析步骤.2 6.1 标准溶液的制备.2 6.2 样品溶液的制备.2 6.3 标准曲线的制备.2 6.4 试样的测定.3 7 结果计算.3 8 允许差.3 SZDB/Z 3492019 II 前 言 本文件按照GB/T 1.1给出的规则起草。本文件由深圳市食品药品监督管理局归口管理。本文件主要起草单位：深圳市计量质量检测研究院。本文件主要起草人：彭建飞、李锦才、郑育民、钟彬、张俊宇、吴燕蕙。本文件为首次发布。SZDB/Z 3492019 1 食品中总黄酮的测定 分光光度法 1 范围 本文件规定了分光光度法测定龟苓膏、凉粉、饮料中总黄酮（以芦丁计）。本文件适用于龟苓膏、凉粉、饮料及凉粉浓缩液中总黄酮的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测 NY/T 2010-2011 柑桔类水果及制品中总黄酮含量的测定 DB13/T 385-1998 食品中总黄酮（芦丁）的测定 3 原理 在弱碱性条件下，溶于乙醇或甲醇的黄酮类化合物与三价铝离子结合生成红色络合物，可在510 nm波长附近产生最大吸收。在一定浓度范围内，其浓度与吸光度符合朗伯比尔定律。4 试剂和材料 除非另有说明，在分析中至少使用分析纯试剂或去离子水。4.1 芦丁（C27H30O16）标准品。4.2 乙醇溶液：体积分数为 60%。4.3 氢氧化钠溶液（4 g/L）：称取 4.0 g 氢氧化钠，用水溶解后定容至 1 L。4.4 亚硝酸钠溶液（50 g/L）：称取 5.0 g 亚硝酸钠，用水溶解后定容至 100 mL。4.5 硝酸铝溶液（100 g/L）：称取 10.0 g 硝酸铝，用水溶解后定容至 100 mL。4.6 氢氧化钠溶液(200 g/L)：称取 20.0 g 氢氧化钠，用水溶解后定容至 100 mL。4.7 柠檬酸溶液（200 g/L）：称取 200 g 柠檬酸与烧杯中，用水溶解，转入 1 L 容量瓶中，稀释至刻度。4.8 甲醇。4.9 聚酰胺粉:80 目。4.10 苯。5 仪器和设备 SZDB/Z 3492019 2 5.1 紫外可见分光光度计。5.2 电子分析天平：精度到0.1 mg。5.3 酸度计：精度到0.1 pH单位。5.4 恒温水浴。5.5 超声萃取仪。6 分析步骤 6.1 标准溶液的制备 称取约 0.2 g（精确至 1 mg）经 120 减压干燥至恒重的芦丁标准品，置于 100 mL 容量瓶中，用乙醇溶液（4.2）溶解并定容至刻度，摇匀。为贮备母液。吸取 10 mL 芦丁标准贮备溶液于 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。临用现配。6.2 样品溶液的制备 6.2.1 普通食品的制备 6.2.1.1 液体样品 称取1020 g(精确至1 mg)混合均匀的样品到100 mL烧杯中，加入10 mL氢氧化钠溶液（4.3），用氢氧化钠溶液（4.6）调节pH值至12。静置30 min后，再用柠檬酸溶液（4.7）调节pH值至7.0，转移到100 mL容量瓶中，定容，过滤，收集滤液，备用。6.2.1.2 固体样品 称取经混合均匀的样品 12 g（精确至 1 mg）置于 100 mL 具塞三角瓶中，加乙醇溶液（4.2）50 mL，40 超声提取 50 min 后，滤入 100 mL 容量瓶中。再于三角瓶中加 40.0 mL 乙醇溶液（4.2）后 40 超声提取 20 min，过滤，合并滤液，用 10 mL 热乙醇溶液（4.2）洗涤滤渣，滤液并于容量瓶中，冷却至室温，用乙醇溶液（4.2）定容至刻度，摇匀，备用。6.2.2 凉茶浓缩液的制备 取代表性样品15 g(精确至1 mg)于50 mL具塞比色管中，加入20 mL无水乙醇，旋涡混匀5 min后，超声提取30 min，放置分层后过滤（样品粘稠可以选择抽滤），用乙醇淋洗比色管、滤渣及滤纸（或抽滤瓶），收集滤液于25 mL容量瓶中，并用乙醇定容至刻度，吸取5 mL滤液于100 mL蒸发皿中，加入5 g聚酰胺粉，混匀后于80 水浴上挥干。然后转入层析柱，先用50 mL苯洗，弃去苯液，用甲醇洗脱黄酮于50 mL容量瓶，并用甲醇定容至刻度。注：1、颜色较深的样品则需要过柱净化步骤操作，样品颜色浅则不需进行净化操作；2、根据样品值高低适当调整取样量及稀释倍数。6.3 标准曲线的制备 SZDB/Z 3492019 3 吸取 0.00、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、6.00 mL 芦丁标准溶液，相当于 0.00、0.050、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.20 mg 无水芦丁，分别置于 25 mL 具塞比色管中，用乙醇溶液（4.2）补充至5.0 mL，加 1 mL 亚硝酸钠溶液（4.4），摇匀，放置 6 min，加入 1.5 mL 硝酸铝溶液（4.5），摇匀，放置6 min，加入 4 mL 氢氧化钠溶液（4.6），用乙醇溶液（4.2）定容至刻度，摇匀，放置 15 min。用 1 cm比色皿，以试剂空白调节零点，在波长 510 nm 处测定吸光度。以吸光度值对应含量绘制标准曲线。6.4 试样的测定 吸取 2.0 mL（视样品值高低适当调整取样量，尽量控制样品吸光度 ABS 在 0.20.7 之间）样品溶液（6.2），置于 25 mL 具塞比色管中，用乙醇溶液（4.2）补充至 5.0 mL，加 1 mL 亚硝酸钠溶液（4.4），摇匀，放置 6 min，加入 1.5 mL 硝酸铝溶液（4.5），摇匀，放置 6 min，加入 4 mL 氢氧化钠溶液（4.6），用乙醇溶液（4.2）定容至刻度，摇匀，放置 15 min。用 1 cm 比色皿，以相应的不添加硝酸铝溶液（4.5）的试样液作为空白进行校正，在波长 510 nm 处测定吸光度。根据标准曲线算出试样溶液的芦丁质量。7 结果计算 样品中总黄酮（以芦丁计）的含量（mg/100g）按下列公式（1）计算：=10011VMVm （1）式中：m1 在工作曲线上算出试样溶液的总黄酮质量，单位为毫克（mg）；V 试样的提取体积，单位为毫升（mL）；V1 测定时吸取试样的体积，单位为毫升（mL）；M 试样的质量，单位为克（g）。计算结果应保留至三位有效数字。8 允许差 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。本文件检出限为 12.5 mg/100g。_