ICS65.020.30B43DB63青海省地方标准DB63/T1709—2018牦牛胚胎快速冷冻保存及解冻技术操作规程2018-12-26发布2019-03-20实施青海省市场监督管理局发布DB63/T1709—2018I前言本标准依据GB/T1.1—2009的规则编写。本标准由青海省农牧业标准化专业技术委员会提出并归口。本标准起草单位：青海省畜牧兽医科学院。本标准主要起草人：徐惊涛、孙永刚、李瑞哲。DB63/T1709—20181牦牛胚胎快速冷冻保存及解冻技术操作规程1范围本标准规定了牦牛胚胎快速冷冻和解冻的操作方法。本标准适用于牦牛胚胎生产技术推广应用的规范化操作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5458液氮生物容器GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T25881牛胚胎GB/T26938牛胚胎生产技术规程NY/T1572牛胚胎移植技术规程DB63/T1163牦牛体外受精胚胎生产技术操作规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1牦牛胚胎yakembryo通过自然交配、人工授精、体外受精等方式产生的牦牛早期受精卵（受精后6d～8d）。3.2胚胎快速冷冻embryorapidcryopreservation经过清洗、胚胎冷冻保护剂平衡后，将胚胎直接置入液氮中保存的一种冷冻方法。3.3胚胎解冻thawingoffrozenembryo将冷冻保存的胚胎按照操作程序融化，去除冷冻保护剂，使胚胎恢复活性的过程。4试剂、耗材、设备和实验室要求4.1试剂、耗材和设备DB63/T1709—20182所用的试剂、耗材和设备以及要求见附录A。4.2实验室要求冷冻保存液、解冻液及移植液必须在符合GB19489相关条款的实验室中配制。4.3器具清洗、消毒所用器具的清洗、消毒见附录B。5试剂配制及保存5.1试剂配制用水试剂配制用水按照GB/T6682中的分级标准采用一级水。5.2冷冻保存液5.2.1基础液（BS）TCM-199中加入20%胎牛血清（FBS）。5.2.2平衡液（ES）TCM-199中加入7.5%乙二醇（EG）、7.5%二甲基亚砜（DMSO）、20%胎牛血清（FBS）。5.2.3冷冻液（VS）TCM-199中加入15%乙二醇（EG）、15%二甲基亚砜（DMSO）、0.5mol/L蔗糖（Su）、20%胎牛血清（FBS）。5.3胚胎解冻液5.3.1解冻液（TS）TCM-199中加入1.0mol/L蔗糖（Su）和20%胎牛血清（FBS）。5.3.2稀释液（DS）TCM-199中加入0.5mol/L蔗糖（Su）和20%胎牛血清（FBS）。5.4改进PBS液（m-PBS）改进PBS液（m-PBS）配制见附录C。5.5胚胎移植液（...
