DB34T 1358-2011 饲料中黄霉素的测定高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120 B 46 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13582011 饲料中黄霉素的测定高效液相色谱法 Determination of flavomycin in feedHigh efficiency liquid chromatographymethod 文稿版次选择 2011-03-16 发布 2011-04-16 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 13582011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：明文庆、刘红云、张莉、蔡一杰、吴蕾、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。DB34/T 13582011 1 饲料中黄霉素的测定高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中黄霉素检验的高效液相色谱法测定方法。本标准适用于饲料中黄霉素的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 试样制备 按 GB/T 14699.1 抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约 200 g，粉碎至过 0.45 mm 孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。4 原理 饲料中黄霉素经 50的甲醇提取后，用 pH 6.0 磷酸盐缓冲液稀释至所需浓度，反相色谱柱进行分离，紫外检测器检测，外标法定量。5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 二级水的规定。5.2 黄霉素对照品：纯度 100。5.3 黄霉素储备液：精密称取黄霉素对照品适量，用甲醇配制成 1 mg/mL，作为标准储备溶（贮存 4 冰箱保存 10 天）。5.4 黄霉素标准工作液：量取适量黄霉素储备液，用 pH 6.0 磷酸盐缓冲液稀释成浓度为 0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.50 g/mL 的系列标准工作液（4 保存 7 天）。5.5 甲醇：色谱纯。5.6 乙腈：色谱纯。5.7 甲酸铵。5.8 磷酸。5.9 pH 6.0 磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢二钾 2 g 与磷酸二氢钾 8 g，加水使溶解成 1000 mL，即得。6 仪器设备 DB34/T 13582011 2 6.1 高效液相色谱仪(配紫外检测器)。6.2 饲料粉碎机。6.3 分析天平，感量 0.0001 g，0.001 g。7 测定步骤 7.1 试样提取 称取粉碎后的饲料样品 5 g（精确至 0.001 g），加入 50.0 mL 50甲醇溶液提取后，过滤，滤液用磷酸盐缓冲液 pH 6.0 稀释至所需的适当浓度，经 0.45 m 滤膜过滤后供高效液相色谱仪分析。7.2 色谱条件 色谱柱：C18 柱(4.6150 mm，5 m)或性能相当的色谱柱。流速：0.7 mL/min。检测波长：258 nm。进样量：20 L。流动相：乙腈:0.2甲酸铵水溶液=45:55（用 10磷酸调节至 pH 4.9）7.3 上机测定 取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8 结果计算 按照下式计算试样中药物的含量：n1000mAs1000VCsAX=.(1)式中：X 试样中药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A 应的色谱峰面积响应值；As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V 定容体积，单位为毫升（mL）；Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；m 试样质量，单位为克（g）；n 稀释倍数。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留 3 位有效数字。9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法的检测限为 0.5 mg/kg。9.2 准确度 本方法添加浓度 1.0 mg/kg，回收率为 80120。DB34/T 13582011 3 9.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV10，批间变异系数 CV15。DB34/T 13582011 4 A A 附 录 A（资料性附录）黄霉素标准溶液色谱图 图A.1 黄霉素标准溶液色谱图 _