DB34T 1366-2011 配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林的测定高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120 B 46 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13662011 配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林的测定高效液相色谱法 Determination of Furazolidone,Furalta and Furacilinum residues in formula feed by high performance liquid chromatography 2011-03-16 发布 2011-04-16 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 13662011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：陈文帮、丁作坤、陶小平、吴昊、许世富、汤春莲、李珲。DB34/T 13662011 1 配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林 的测定高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林检验的制样和高效液相色谱法（HPLC）测定方法。本标准适用于配合饲料中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林的定量检测。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 试样制备 按 GB/T 14699.1 抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约 200 g，粉碎过 0.45 mm 孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。4 原理 试样中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林经甲酸和丙酮提取后，用混合阳离子固相萃取柱净化，蒸干后用流动相溶解，HPLC法于 365 nm 进行测定，外标法定量。5 试剂和材料 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。5.2 呋喃唑酮标准品：纯度 99.0。5.3 呋喃它酮标准品：纯度 99.0。5.4 呋喃西林标准品：纯度 99.0。5.5 甲醇，色谱纯。5.6 乙腈，色谱纯。5.7 丙酮。5.8 乙酸。5.9 0.2甲酸水溶液：取甲酸 0.2 mL，加水稀释至 100 mL，即得。5.10 0.1 mol/L 盐酸溶液：取盐酸 0.9 mL，加水稀释至 100 mL，即得。5.11 20的甲醇水溶液：取甲醇 20 mL，加水稀释至 100 mL，即得。DB34/T 13662011 2 5.12 5的氨水甲醇溶液：取氨水 5 mL，加水稀释至 100 mL，即得。5.13 提取液：取甲酸、丙酮等体积混合，即得。5.14 固相萃取柱（SPE）：混合阳离子柱，60 mg/3 mL。5.15 呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林标准储备液（呋喃唑酮、呋喃西林 0.5 mg/mL,呋喃它酮 1.0 mg/mL）：准确称取呋喃唑酮、呋喃西林对照品 50 mg，呋喃它酮对照品 100 mg，用甲醇溶解并稀释至 100 mL，混匀，置-18 避光保存，存放时间不超过 3 个月。5.16 呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林标准工作液：准确移取呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃它酮标准标准储备液（5.14），流动相配制标准系列溶液，呋喃唑酮、呋喃西林标准工作液为 1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 gmL，呋喃它酮标准工作液为 2.0、4.0、10.0、20.0、40.0 gmL。6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪，配置二极管阵列检测器或紫外检测器。6.2 离心机：8000 r/min。6.3 振荡器。6.4 涡旋混合器。6.5 分析天平：感量 0.0001 g，0.001 g。6.6 氮吹仪。6.7 离心管：50 mL，10 mL。6.8 固相萃取装备。7 测定步骤 7.1 样品处理 准确称取（20.05 g）粉碎后的饲料样品于 50 mL 离心管中，加入 5 mL 乙腈和提取液（5.9）15 mL，涡旋 2 min，振荡 10 min，8000 rpm 离心 5 min，取上清液 1 mL，50 水浴氮气吹干，加入 0.2甲酸水溶液（5.8）1 mL，混匀，备用。7.2 试样净化 取固相萃取柱，分别用 3 mL 甲醇和 3 mL 水活化SPE小柱，备用液全部过SPE柱，依次用 0.1 mol/mL的盐酸溶液(5.9)1 mL 和 20的甲醇水溶液(5.10)1 mL 淋洗，抽干。用 5氨水甲醇溶液（5.11）洗脱，收集洗脱液，50 水浴蒸干，加 1 mL 流动相溶解，经 0.45 m 滤膜过滤，供HPLC分析。7.3 色谱条件 色谱柱：C18(4.6250 mm，5 m)，或相当者。柱温：30。进样体积：10 L。流速：1.0 mLmin。检测波长：365 nm。流动相：乙腈-0.2甲酸溶液（28：72）。7.4 上机测定 DB34/T 13662011 3 取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8 结果判定和表述 按照下式计算试样中各种药物的含量：1000mAs1000VCsAX=.(1)式中：X 试样中各种药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A 试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V 定容体积，单位为毫升（mL）；Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；m 试样质量，单位为克（g）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。8.1 灵敏度 本方法呋喃唑酮、呋喃西林检出限均为 1 mg/kg，呋喃它酮检出限为 2 mg/kg。8.2 准确度 本方法在添加浓度为 2 mg/kg（呋喃它酮为 4 mg/kg）的回收率均为 60110。8.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV10，批间变异系数 CV15。DB34/T 13662011 4 A A 附 录 A（资料性附录）高效液相色谱图 A.1 空白饲料样品溶液色谱图 图A.1 空白饲料样品溶液色谱图 A.2 标准物质溶液色谱图 图A.2 标准物质溶液色谱图 DB34/T 13662011 5 A.3 空白饲料中添加标准物质溶液色谱图 图A.3 空白饲料中添加标准物质溶液色谱图 注：1.呋喃唑酮；2.呋喃它酮；3.呋喃西林 _