DB32T 900-2006 兽药粉剂预混剂中甲氧苄啶的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020.01 B 40 备案号：18645-2006 江苏省地方标准 DB32 DB32/T 9002006 兽药粉剂/预混剂中甲氧苄啶的测定 高效液相色谱法 Determination of trimethoprim in powder/premix of veterinary drug High Performance Liquid Chromatography 2006-03-25 发布 2006-05-25 实施 江苏省质量技术监督局 发布 DB32/T 9002006 前 言 为了防止兽药粉剂/预混剂中长期大量添加甲氧苄啶，使动物产生耐药性与致畸作用，在动物体内的残留给人类健康带来危害，特制定本标准以监控兽药粉剂/预混剂中甲氧苄啶的含量。本标准按GB/T1.1-2000标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则和GB/T1.2-2002标准化工作导则 第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法编制。本标准附录A为资料性附录。本标准由江苏省农林厅提出。本标准由江苏省兽药监察所起草。本标准主要起草人：宋慧敏、时勇、毕昊容、邵德佳、颜京平、王苏华、花继兰、汪云花。DB32/T 9002006 1 兽药粉剂/预混剂中甲氧苄啶的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了兽药粉剂/预混剂中甲氧苄啶的测定 高效液相色谱法的原理、试剂和溶液、仪器及设备、分析步骤、定量测定、结果计算、允许偏差。本标准适用于用高效液相色谱法测定兽药粉剂/预混剂中甲氧苄啶，最低检出浓度为0.25 g/mL。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样中甲氧苄啶经流动相提取后，注入高效液相色谱仪中进行分离，用紫外检测器检测，外标法计算甲氧苄啶的含量。4 试剂和溶液 除特殊说明外，所用试剂均为分析纯；水为双蒸水，符合GB/T6682-1992中一级水规定。4.1 甲醇：色谱纯。4.2 磷酸二氢钾：分析纯。4.3 流动相：取磷酸二氢钾 2.72g，加水使溶解并稀释至 1L，取该溶液 800mL 与 200mL 甲醇混合，摇匀、过滤、脱气、待用。4.4 甲氧苄啶标准品：纯度应不小于 99.0。4.5 甲氧苄啶标准贮备液：准确称取已知纯度的甲氧苄啶标准品 25mg（精确至 0.0001g），置于 100mL容量瓶中，用流动相溶解，置超声波清洗器中超声 10min 后用流动相定容、摇匀，该溶液中甲氧苄啶浓度为 0.25mg/mL,置于 4保存，可使用 3 个月。4.6 甲氧苄啶标准工作液：准确移取标准贮备液 5mL 于 50mL 容量瓶中，用流动相定容至刻度，该溶液中甲氧苄啶浓度为 25g/mL，置于 4保存，可使用 1 个月。5 仪器及设备 高效液相色谱仪（紫外检测器）、超声波清洗器、超纯水处理器。6 分析步骤 6.1 试样溶液的制备 准确称取试样适量（含甲氧苄啶约为2.5mg），置于100mL容量瓶中，加入约三分之二体积的流动相，于超声波清洗器中超声提取10min，再用流动相定容至刻度，摇匀、过滤，滤液过0.45 m滤膜，待用。6.2 色谱条件 6.2.1 色谱柱：C18柱（粒度为 5 m）：150mm4.6mm（i.d.）。DB32/T 9002006 2 6.2.2 流动相：20甲醇溶液，以 1.0mL/min 流速洗脱。6.2.3 进样量：10L。6.2.4 检测器：紫外检测器，检测波长 271nm。7 定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向色谱柱中注入甲氧苄啶标准工作液及试样溶液，得到色谱峰面积响应值，用外标法定量，色谱图参见附录A。8 结果计算 8.1 试样中甲氧苄啶的含量按式（1）计算。Wi Pi V Ci Vst Psti m Vi(1)式中：Wi试样中甲氧苄啶的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）;Pi试样溶液峰面积值;V样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）;Ci标准溶液浓度，单位为微克每毫升（g/mL）;Vst标准溶液进样体积，单位为微升（L);Psti标准溶液峰面积算术平均值;m试样质量，单位为克（g）;Vi试样溶液进样体积，单位为微升（L)。8.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留至小数点后一位。9 允许偏差 同一分析者对同一试样两次平行测定结果的相对偏差不大于10。DB32/T 9002006 3 附 录 A（资料性附录）甲氧苄啶对照色谱图 甲氧苄啶对照色谱图见图A.1。图A.1 甲氧苄啶对照色谱图