DB34T 1367-2011 饲料中硫酸安普霉素的测定高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120 B 46 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13672011 饲料中硫酸安普霉素的测定-高效液相色谱法 Determination of Apramycin sulfate in animal feed High efficiency liquid chromatography method 2011-03-16 发布 2011-04-16 实施安徽省质量技术监督局 发 布DB34/T 13672011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：张莉、蔡一杰、明文庆、吴蕾、刘红云、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。DB34/T 13672011 1 饲料中硫酸安普霉素的测定-高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中硫酸安普霉素检验的高效液相色谱测定方法。本标准适用于饲料中硫酸安普霉素的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 试样制备 按 GB/T 14699.1 抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约 200 g，粉碎至过 0.45 mm 孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中，室温保存，备用。4 原理 试样中的硫酸安普霉素先用水溶解提取，高效液相色谱仪(带蒸发光检测器)测定，外标法定量。5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 二级水的规定。5.2 硫酸安普霉素对照品，纯度99。5.3 标准储备液：准确称取硫酸安普霉素对照品适量，用水配制成 1000 g/mL 标准储备液。4 冰箱保存，备用，有效期 7 天。5.4 标准工作溶液：准确量取适量标准储备液加水稀释成 0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0 gmL 的标准工作液。过 0.45m 滤膜，待用。5.5 甲醇：色谱纯。5.6 三氟乙酸。5.7 0.1三氟乙酸溶液:量取 0.1 mL 三氟乙酸加水溶解定容至 100 mL，混匀。5.8 微孔滤膜：孔径 0.25 m，有机相。6 仪器设备 6.1 高效液相色谱仪(配蒸发光检测器)。DB34/T 13672011 2 6.2 分析天平：感量 0.0001 g，0.001 g。6.3 饲料粉碎机。6.4 旋转蒸发器。6.5 超声波提取仪。7 测定步骤 7.1 试样提取 称取粉碎后的饲料样品 2 g（精确至 0.001 g），置于 200 mL 锥形瓶中，加入 50 mL 水超声提取 30 min,过滤。滤液于 60水浴中旋转减压蒸发至干，加水 1.00 mL 溶解，过 0.45 m 滤膜过滤后供高效液相测定。7.2 色谱条件 色谱柱：C18(1504.6 mm，5 m)或性能相当的色谱柱。流动相：0.1三氟乙酸溶液:甲醇（98:2）。流速：1.0 mL/min。进样体积：20 L。漂移管温度：60。气体压力：35 psi。7.3 上机测定 取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8 结果计算 按照下式计算试样中药物的含量：1000mAs1000VCsAX=.(1)式中：X 试样中药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A 试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V 定容体积，单位为毫升（mL）；Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；m 试样质量，单位为克（g）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留 3 位有效数字。9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法的检测限为 0.5 mg/kg。DB34/T 13672011 3 9.2 准确度 本方法在添加浓度为 1.0 mg/kg 时，回收率为 80120。9.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV10，批间变异系数 CV15。DB34/T 13672011 4 AA 附 录 A（资料性附录）硫酸安普霉素标准溶液相色谱图 图A.1 硫酸安普霉素标准溶液色谱图 _