DB33T 428-2003 乳制品质量安全监督抽查检验细则.pdf

ICS 65.020.01 B 00 备案号：14139-2003 浙江省地方标准DB33DB33/T 4282003乳制品质量安全监督抽查检验细则 Test regulation on quality safety supervision of dairy products 2003-08-12 发布 2003-08-15 实施浙江省质量技术监督局 发布 DB33/T 4282003 I 前 言 为保障人民群众身体健康，全面推进“无公害农产品行动计划”，保证乳制品质量安全，指导有关检验机构进行乳制品质量安全监督抽查检验工作，特制定本检验细则，作为组织监督抽查的依据。本标准所列的检验项目与法律、法规、规章有不一致时，应以法律、法规、规章的规定为准。本标准的附录 A 为规范性附录。本标准由浙江省农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。本标准起草单为：浙江方圆食品与农副产品质量安全检测中心。本标准主要起草人：何乔桑 陈自力 赵淑娟 陈小珍 盛华栋 DB33/T 4282003 1 乳制品质量安全监督抽查检验细则 1 范围 本标准规定了乳制品的分类、检验项目、检验方法、抽样方法及判定原则。本标准适用于浙江省境内生产或销售的乳制品的质量监督抽查。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 4789.2 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 GB 4789.3 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定 GB 4789.4 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验 GB 4789.5 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验 GB 4789.10 食品卫生微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 GB 4789.11 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验 GB 4789.18 食品卫生微生物学检验 乳与乳制品检验 GB/T 5009.11 食品中总砷的测定方法 GB/T 5009.12 食品中铅的测定方法 GB/T 5009.17 食品中总汞的测定方法 GB/T 5009.24 食品中黄曲霉素 M1和 B1的测定方法 GB/T 5009.29 食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法 GB/T 5409 牛乳检验方法 GB/T 5413.32 乳粉 硝酸盐、亚硝酸盐的测定 3 产品分类 乳制品分以下三类：巴氏杀菌乳、灭菌乳、酸牛奶。4 检验项目 检验项目见表 1、表 2、表 3。表 1 巴氏杀菌乳检测项目 序号 检验项目 要求 1 铅（以 Pb 计），mg/kg 0.05 2 砷（以 As 计），mg/kg 0.2 3 汞（以 Hg 计），mg/kg 0.01 DB33/T 4282003 2 表 1(续)4 硝酸盐（以 NaNO3计），mg/kg 8.0 5 亚硝酸盐以 NaNO2计，mg/kg 0.2 6 黄曲霉毒素 M1，g/kg 0.2 7 菌落总数，cfu/mL 30000 8 大肠菌群，MPN/100mL 90 9 青霉素 不得检出 10 链霉素 不得检出 12 致病菌（指肠道致病菌和致病性球菌）不得检出 表 2 灭菌乳检测项目 序号 检验项目 要求 1 铅（以 Pb 计），mg/kg 0.05 2 砷（以 As 计），mg/kg 0.2 3 汞（以 Hg 计），mg/kg 0.01 4 硝酸盐（以 NaNO3计），mg/kg 8.0 5 亚硝酸盐（以 NaNO2计），mg/kg 0.2 6 黄曲霉毒素 M1，g/kg 0.2 7 青霉素 不得检出 8 链霉素 不得检出 9 商业无菌 商业无菌 表 3 酸牛乳检测项目 序号 检验项目 要求 铅（以 Pb 计），mg/kg 0.05 2 砷（以 As 计），mg/kg 0.2 3 汞（以 Hg 计），mg/kg 0.01 4 硝酸盐（以 NaNO3计），mg/kg 8.0 5 亚硝酸盐（以 NaNO2计），mg/kg 0.2 6 黄曲霉毒素 M1，g/kg 0.5 7 纯酸牛乳、调味酸牛乳 0.03 苯甲酸，g/kg 果味酸牛乳0.23 8 纯酸牛乳、调味酸牛乳 0.001 山梨酸，g/kg 果味酸牛乳0.23 9 大肠菌群，MPN/100mL 90 10 致病菌（指肠道致病菌和致病性球菌）不得检出 5 检验方法 DB33/T 4282003 3 5.1 砷的测定 按 GB/T 5009.11 执行。5.2 铅的测定 按 GB/T 5009.12 执行。5.3 汞的测定 按GB/T 5009.17 执行。5.4 硝酸盐及亚硝酸盐的测定 按 GB/T 5413.32 执行。5.5 山梨酸、苯甲酸的测定 按 GB/T 5009.29 执行。5.6 黄曲霉素 M1 的测定 按 GB/T 5009.24 执行。5.7 青霉素的测定 按 GB/T 5409 执行。5.8 链霉素的测定 按附录 A 执行 5.9 菌落总数的测定 按 GB 4789.2 和 GB 4789.18 执行。5.10 大肠菌群的测定 按 GB 4789.3 和 GB 4789.18 执行。5.11 致病菌的测定 按GB 4789.4、GB 4789.5、GB 4789.10、GB 4789.11和GB 4789.18 执行。6 抽样方法 6.1 抽样方法 采取随机抽样的方法进行抽样。6.2 样品数量 规格250mL 的样品，抽取样品数量为 5 瓶（盒），其中 3 瓶（盒）用作检验，2 瓶（盒）作为备样封存留企业，规格250mL 的样品，抽取样品数量加倍。6.3 注意事项 6.3.1 抽样人员抽样时应填写好浙江省农产品质量监督检查抽样单，样品用塑料袋包装，贴好样品标志，并经受检单位或个人对其有效性进行确认。样品标志的格式统一，包括以下内容：产品名称、种类、抽样地点、抽样时间、抽样人姓名及签字、见证人姓名及签字。6.3.2 抽样后应尽快将样品送至检验机构进行检验。6.3.3 抽样单位或人员应采取必要的措施，保证送检样品满足检验需要。DB33/T 4282003 4 7 判定原则 抽检全部项目符合标准要求，判定该批产品为合格；有一项或一项以上项目不符合标准要求时，判定该批产品为不合格。8 复检 受检方对检验结果异议时，可申请复检。复检指对备样进行检验。复检申请向原检验机构提出，原检验机构应在3个工作日内作出受理或不受理决定。若受检方对不受理决定仍有异议，可向浙江省农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。不合格结果以检验结果通知书的形式送达受检方，受检方应在收到不合格通知书之日起3日内提出复检申请，逾期不予受理。DB33/T 4282003 5 附录 A（规范性附录）乳制品中链霉素残留的测定 A.1 测定原理 测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有结合到蛋白上的链霉素（固相），链霉素抗体、链霉素酶标记物、标准或样品溶液或样本加入后，游离链霉素与链霉素酶标记物竞争链霉素抗体。没有被结合的酶标记物在洗涤时被除去，将酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到微孔中并孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的物质，加入反应停止液后，使微孔中的颜色由蓝转变为黄色。在 450nm 处进行吸光度测量，吸收度与样品中的链霉素浓度成反比，通过计算比例可以获得样本中链霉素的浓度值。A.2 试剂和材料 A.2.1 酶标免疫分析定量测定链霉素残留试剂盒。德国 R-Biopharm 公司制造。A.2.2 正己烷。A.2.3 Carrez I：0.36mol/L 铁氰化钾（II）3 H2O。A.2.4 CarrezII：1.04 mol/L 硫酸锌7 H2O。A.2.5 PBS 缓冲液：(0.55g NaH2PO4H2O;2.85g Na2HPO4 2H2O+9gNaCl+0.1%吐温 20,加入蒸馏水至 1000mL)。A.3 仪器和设备 A.3.1 微孔板酶标仪(450nm)。A.3.2 离心机。A.3.3 振荡器。A.3.4 混合器。A.3.5 磁搅拌器。A.3.6 25L，50L,100L,1000L微量加样器。A.4 样品处理 A.4.1 脱脂牛奶 DB33/T 4282003 6 用 PBS-Tween 缓冲液以 1:40(25L 牛奶+975L 缓冲液)稀释，取 50L 进行测定。A.4.2 脂肪牛奶 150C 离心 10 分钟（3000 转/分钟），去除脂肪(如无冷冻离心机请予冷却样品)。去除上层脂肪,用PBS-Tween 缓冲液以 1:40 稀释脱脂牛奶，取 50L 进行测定。A.5 工作液的准备 制备标准应用液：50uLL 标准浓缩液用 450L 缓冲液稀释并混合均匀，不要用塑料瓶而用玻璃瓶。标准液 1：50L 标准浓缩液 1 用 450L 缓冲液稀释 0g/kg。标准液 2：50L 标准浓缩液 2 用 450L 缓冲液稀释 0.5g/kg。标准液 3：50L 标准浓缩液 3 用 450L 缓冲液稀释 2g/kg。标准液 4：50L 标准浓缩液 4 用 450L 缓冲液稀释 8g/kg。标准液 5：50L 标准浓缩液 5 用 450L 缓冲液稀释 32g/kg。标准液 6：50L 标准浓缩液 6 用 450L 缓冲液稀释 128g/kg。每一批实验所用的标准液应当按上述要求重新制备。A.6 实验步骤 A.6.1 使用之前将所有的试剂回升至室温 20-24。A.6.2 将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架,标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。A.6.3 加入 50L 稀释了的酶标记物到微孔底部,再加入 50L 的标准或处理好的样品到各自的微孔中。标准和样品做两个平行实验。A.6.4 加入 50L 稀释了的抗体溶液到每一个微孔底部充分混合，在室温孵育 2 小时，覆盖上薄膜（防止蒸发）。A.6.5 倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打(每行拍打 3 次)以保证完全除去孔中的液体.用250L 蒸馏水充入孔中,再次倒掉微孔中液体,再重复操作两次。A.6.6 加入 50L 基质和 50L 发色试剂到微孔中,充分混合并在室温暗处孵育 30 分钟。A.6.7 加入 100L 反应停止液到微孔中.，混合好在 450nm 处测量吸光度值，以空气为空白。必须在加入停止液后 60 分钟内读取吸光度值。DB33/T 4282003 7 A.7 结果计算 所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0 标准)的吸光度值再乘以 100。因此 0 标准等于 100%并且以百分比给出吸光度值。标准的吸光度值(或样品)。1000)(%=标准的吸光度值或样品标准的吸光度值吸光度值 计算的标准值绘成一个对应链霉素浓度(g/kg)的半对数坐标系统曲线图,校正曲线在2ug/kg-32ug/kg 范围内应当成为线性.。相对应每一个样品的浓度(g/kg)可以从校正曲线上读出。本方法牛奶中链霉素的检测限是 20g/kg。A.8 注意事项 A.8.1 保存试剂盒于 20C-80C,不要冷冻。A.8.2 在使用中不要让微孔干燥。A.8.3 在 EIA 分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,仔细按照推荐的洗板顺序操作是 EIA测定程序中的要点。A.8.4 在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖子盖住微孔板。A.8.5 无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。A.8.6 为提高回收率，将进样及洗脱速度定为 10 滴/分钟，并将甲醇洗脱液的数量定为 2mL。回收率大于 90%。