DB34T 1031-2009 饲料中氯丙嗪的测定-高效液相色谱法.pdf

DB34 安徽省地方标准DB34/T 10312009饲料中氯丙嗪的测定-高效液相色谱法 2009-10-21 发布 2009-10-21 实施安徽省质量技术监督局安徽省质量技术监督局 发布食品伙伴网http:/ 10312009 前 言 本标准的附录A为资料性附录。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)、安徽农业大学。本标准起草人：许世富、汤春莲、丁作坤、丁在亮、阮祥春、陈文帮、明文庆、刘发全。本标准首次发布。食品伙伴网http:/ 10312009 饲料中氯丙嗪的测定-高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中氯丙嗪检验的制样和高效液相色谱法（HPLC）测定方法。本标准适用于饲料中氯丙嗪的定量检测。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样方法 3 试样制备 按 GB/T 14699.1 采样，选取有代表性的饲料样品至少 500，四分法缩减至 100，经粉碎，全部过 1 孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。4 原理 试样中氯丙嗪经氢氧化钠甲醇溶液提取后，离心取出上清液，旋转蒸发至干，用乙醚洗涤残余物，过滤，蒸干，用甲醇溶解，过滤膜后用于 HPLC 测定。5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合 GB/T 6682 二级水的规定。5.2 氯丙嗪对照品 纯度 98.0%。5.3 氯丙嗪标准贮备液（1 mgmL）：准确称取 100 mg 氯丙嗪对照品，用甲醇溶解并稀释至 100 mL量瓶中，贮存于 0 8 冰箱中，有效期 90 d。5.4 氯丙嗪对照溶液：量取适量氯丙嗪贮备液，用流动相稀释成浓度为 0.05 gmL、0.10 gmL、0.25 gmL、0.50 gmL、1.00 gmL、2.50 gmL 的对照溶液，4 保存，有效期 7 d。5.5 甲醇，色谱纯。5.6 乙腈，色谱纯。5.7 乙醚。5.8 三乙胺。5.9 氢氧化钠。5.10 醋酸铵。5.11 提取液：取氢氧化钠 0.1 g 加入到 100 mL 甲醇中，混匀。5.12 流动相：35 mmol/L 醋酸铵-乙腈-三乙胺（35:65:0.05）。6 仪器设备 6.1 高效液相色谱仪(配紫外检测器)。6.2 旋转蒸发器。食品伙伴网http:/ 10312009 6.3 饲料粉碎机。6.4 超纯水机。6.5 回旋振荡器。6.6 高速冷冻型离心机。7 测定步骤 7.1 试样提取 称取 2.00 0.05 g 粉碎后的饲料样品，置于 200 mL 锥形瓶中，加 40 mL 提取液，振荡提取15 min，全部转入 50 mL 离心管，5000 r/min 离心 15 min，取出上清液，于 50 水浴中旋转蒸发至干，用乙醚 20 mL 分两次次洗涤残余物，过滤，精密量取滤液 10.0 mL 蒸干，加甲醇 1.0 mL 溶解，过 0.45 m 滤膜过滤后供高效液相测定。7.2 色谱条件 色谱柱：C18 柱(5 m，4.6250 mm)；流速：1.5 mL/min；检测波长：257 nm；柱温：30；进样量：20 L。7.3 定量测定 取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8 结果计算 按照下式计算试样中药物残留的含量：231VmAs1000VVCsAX=（1）式中：X 试样中药物的含量，单位为微克每千克（g/kg）；A 试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V1 加入乙醚体积，单位为毫升（mL）；V2 取滤液体积，单位为毫升（mL）；V3 加甲醇溶解体积，单位为毫升（mL）；Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；M 试样质量，单位为克（g）。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法的检出限为 50.0 g/kg。9.2 准确度 本方法回收率均为 80 120。9.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV 10，批间变异系数 CV 15。食品伙伴网http:/ 10312009 附 录 A（资料性性附录）色谱图 A.1 氯丙嗪对照溶液色谱图 图 A.1 氯丙嗪对照溶液色谱图 A.2 样品中添加氯丙嗪色谱图 图 A.2 样品中添加氯丙嗪色谱图 注：1氯丙嗪 食品伙伴网http:/