DB22T 2908-2018 长白山林蛙油的测定高效液相色谱法.pdf

ICS 67.050 X 04 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 29082018 长白山林蛙油的测定 高效液相色谱法 Determination of changbai mountain ranae oviductus HPLC method 2018-11-12 发布 2018-12-30 实施吉林省市场监督管理厅 发 布 DB22/T 29082018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20001.4-2015 给出的规则起草。本标准由吉林省林业厅提出并归口。本标准起草单位：吉林大学。本标准起草人:王永生、徐阳、王诗涵、鲍慧玮、赵中原、崔庆艳、肖瑶、刘敏、王艳伟、房永清、王道君、王仁祥、伊常青。DB22/T 29082018 1 长白山林蛙油的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱法对长白山林蛙油（Changbai mountain Ranae Oviductus）进行定性测定。本标准适用于长白山林蛙油的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 19507 地理标志产品 吉林长白山中国林蛙油 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 长白山林蛙油 changbai mountain ranae oviductus 长白山林蛙油是主产于长白山的林蛙油，即中华人民共和国药典2015版一部收载的哈蟆油，为蛙科动物中国林蛙Rana temporaria chensinensis David雌蛙的输卵管，经采制干燥而得。4 原理 通过长白山林蛙油高效液相色谱中的特征峰鉴别长白山林蛙油。5 试剂或材料 除特别说明外，所有试剂均为分析纯。5.1 无水乙醇（C2H5OH）。5.2 二氯甲烷（CH2Cl2）。5.3 甲醇（CH3OH）。5.4 胆固醇对照品（供鉴别用）（C27H46O)。5.5 色谱乙腈（C2H3N）。6 仪器设备 6.1 天平（感量 0.00001 g）。6.2 粉碎机（50 HZ60 HZ）。DB22/T 29082018 2 6.3 40 目筛。6.4 圆底烧瓶（100 mL）。6.5 量筒（50 mL）。6.6 水浴锅。6.7 普通漏斗（100 mL）。6.8 滤纸。6.9 圆底烧瓶（250 mL）。6.10 旋转蒸发仪。6.11 循环水式真空泵。6.12 容量瓶（2 mL）。6.13 微孔滤膜（0.45 m）。6.14 容量瓶（100 mL）。6.15 高效液相色谱仪。6.16 十八烷基键合硅胶色谱柱（4.6 mm250 mm，5 m）。7 样品 符合GB/T 19507要求的长白山林蛙油。8 试验步骤 8.1 试样制备 取干燥长白山林蛙油适量（6.1），粉碎（6.2），过40目筛（6.3），置于室温下保存备用。8.2 供试品溶液制备 8.2.1 精密称定上述粉末约 3 g（6.1），置于 100 mL 圆底烧瓶（6.4）中，加入无水乙醇（5.1）40 mL（6.5），80 水浴回流提取 15 min（6.6），放冷，过滤（6.7，6.8），滤渣再同法提取 2 次，合并滤液（6.9），减压回收乙醇（6.10，6.11），得提取物。8.2.2 取上述提取物（8.2.1），加入适量二氯甲烷（5.2）溶解，并转移至 2 mL 的容量瓶（6.12）中，挥干，加甲醇（5.3）定容至刻度，摇匀。用 0.45 m 微孔滤膜（6.13）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。8.3 对照品溶液制备 精密称取胆固醇对照品（5.4）约10 mg（6.1），置于10 mL容量瓶中（6.14），加甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的对照品溶液。8.4 试验条件 高效液相色谱仪（6.15），十八烷基键合硅胶色谱柱（6.16）；流动相：乙腈（A）-水（B）梯度洗脱（5.5，5.6），洗脱条件见表1；检测波长：215 nm；柱温：30；进样量：5 L。表1 流动相洗脱条件 DB22/T 29082018 3 时间 min 流动相 A%流动相 B%流速 mL/min 020 0 100 1 2027 012 10088 2 2729 76 24 2 2940 76 24 0.5 4055 7685 2415 1 5563 85100 150 2 6380 100 0 2 8.5 试样测定 试样测定 分别精密吸取对照品溶液5 L（8.3）、供试品溶液5 L（8.2），注入高效液相色谱仪（6.15），按“8.4”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。9 试验数据处理 供试品图谱中应有10个特征峰，与对照品参照物峰相应的峰为S峰（见附录A 图A,1），计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的10%之内。规定值为：0.10（峰1）、0.24（峰2）、0.28（峰3）、0.38（峰4）、0.67（峰5）、0.68（峰6）、0.71（峰7）、0.73（峰8）、0.74（峰9）、1.00（峰S）（见附录A 图A.2）。积分参数 斜率灵敏度为1.2；峰宽为0.1；最小峰面积为1.1；最小峰高为0.2。10 试验报告 试验报告应包括下列内容：a)本标准的名称和编号；b)样品的详细信息；c)试验条件；d)试验结果；e)在试验过程中观察到的任何异常现象；f)试验日期。DB22/T 29082018 4 A A 附 录 A（规范性附录）对照品图谱和对照特征图谱 图A.1和图A.2给出了对照品图谱和对照特征图谱。图A.1 对照品图谱 峰 S：胆固醇 峰 S：胆固醇 图A.2 对照特征图谱 峰 S：胆固醇 峰 S：胆固醇 _