DB22T 396.5-2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第5部分：皮肤变态反应试验.pdf

1 ICS 11.020 C 05 备案号：58324-2018 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 396.52017 代替 DB22/T 396-2014保健用品毒理学评价程序与检验方法 第 5 部分：皮肤变态反应试验 Toxicological evaluation procedures and test methods for health care products Part 5:Skin allergy test 2017-11-10 发布 2017-12-30 实施吉林省质量技术监督局 发 布 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 396.52017 前 言 DB22/T 396保健用品毒理学评价程序与检验方法拟分为如下部分：第 1 部分：评价程序；第 2 部分：急性经皮毒性试验；第 3 部分：长期经皮毒性试验；第 4 部分：皮肤刺激性试验；第 5 部分：皮肤变态反应试验；第 6 部分：细菌回复突变试验；第 7 部分：啮齿动物微核试验；第 8 部分：小鼠精子畸形试验；第 9 部分：哺乳动物培养细胞染色体畸变试验；第 10 部分：致畸试验；第 11 部分：致癌试验；第 12 部分：人体皮肤斑贴试验。本部分为DB22/T 396-2071的第5部分。本部分按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本部分代替DB22/T 396-2014保健用品毒理学评价程序与检验方法，与DB22/T 396-2014相比，结构做了较大调整。除编辑性修改外，主要技术内容变化如下：增加了警示；增加了范围；增加了仪器；增加了附录 A。本部分由吉林省卫生与计划生育委员会提出并归口。本部分起草单位：吉林省疾病预防控制中心。本部分主要起草人：孟令仪、宋昕恬、张晶莹、孙兰、吴晓刚、隋自洁、高峰。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：DB22/T 396-2004；DB22/T 396-2014。本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 396.52017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第 5 部分：皮肤变态反应试验 警示使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。1 范围 本标准规定了保健用品毒理学皮肤变态反应试验评价程序。本标准适用于保健用品毒理学皮肤变态反应试验检验方法。2 保健用品毒理学皮肤变态反应试验检验方法 2.1 材料 2.1.1 动物 白色豚鼠30 只，体重250 g300 g。于给受试物前24 h，将豚鼠背部毛脱掉，去毛范围每侧约4 cm26 cm2,体表面积估算值计算方法见附录A。2.1.2 受试物 如为固体粉末，需用适量的赋形剂混匀，以保证受试物与皮肤的良好接触。如受试物是液体或半固体的膏剂，可直接用于试验。2.2 仪器 电子天平：精确到0.1 g。2.3 试验方法 2.3.1 试验分组 将豚鼠按体重随机分组，试验组20只，对照组10只。2.3.2 致敏接触 取受试物0.2 mL(或g)，涂在动物左侧背部脱毛区皮肤上，以二层纱布和一层硫酸纸覆盖，再以无刺激胶布封闭固定6 h，第7 d和第14 d，以同样方法重复一次。2.3.3 激发接触 于末次给受试物致敏后14 d28 d，将受试物约0.2 mL（或g）涂于豚鼠背部右侧脱毛区，然后以二层纱布和一层硫酸纸覆盖，再以无刺激胶布封闭固定6 h。激发接触后24 h、48 h观察皮肤反应情况。按表1皮肤变态反应评分标准评分。2.3.4 试验要求 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 396.52017 2 阴性对照组操作和观察方法同受试物组，在诱导接触时仅涂赋形剂，在激发接触时涂以受试物。对照组动物必须和受试物动物为同一批。在实验室开展变态反应试验初期，或使用新的种属或品系时，需同时设阳性对照组，给予适当浓度的2,4-二硝基氯代苯（DNCB）。2.4 结果评价 2.4.1 当受试物组动物出现皮肤反应积分2 时，判为该动物出现皮肤变态反应阳性，按表 2 判断受试物的致敏率。致敏率的计算是：将出现皮肤变态反应阳性（不论程度轻重）的动物例数除以受试动物总数。2.4.2 如激发接触所得结果仍不能确定，应于第一次激发后一周，给予第二次激发，对照组作同步处理。表 1 皮肤变态反应的评分标准 皮肤反应 积分 红斑和焦痂形成 无红斑 0 轻度红斑（勉强可见）1 明显红斑（散在或小块红斑）2 中度重度红斑 3 严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成 4 水肿形成 无水肿 0 轻微水肿（勉强可见）1 中度水肿（皮肤隆起，轮廓清楚）2 重度水肿（皮肤隆起约 1mm 或超过 1mm）3 最高总分值 7 表 2 变态反应致敏强度 致敏率，%致敏强度 08 弱 928 轻 2964 中 6580 强 81100 极强 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 396.52017 A A 附 录 A（规范性附录）实验动物体表面积估算方法 A.1 兔 32mks.(A.1)式中：s体表面积，cm2；k常数，一般成年家兔为 10；m动物体重，g。例：体重 2 kg 成年家兔体表面积：32200010s 21588S2008.32008.213010.3667.012000lg3210lglgcmS查反对数表：A.2 豚鼠 32mks.(A.2)式中：s体表面积，cm2；k常数，26.9k；m动物体重，g。例:体重 438 g 豚鼠的体表面积：2534S7276.27610.19666.08805.0329666.0438lg3226.9lglgcmS查反对数表：本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 396.52017 4 A.3 大鼠、小鼠 32mks.(A.3)式中：s体表面积，cm2；k常数，0913.0k；m动物体重，g。例：体重 200g 大鼠的体表面积：322.00913.0s 2123.3S1945.25340.19605.23010.1329605.22.0lg320913.0lglgcmS查反对数表：_ 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印