DB13T 1006-2009 鸡肉中四种氟喹诺酮类药物残留 高效液相色谱-荧光检测法.pdf

I C S 1 3C 5 3DB1 3河 北 省 地 方 标准DB1 3/T 1 0 0 6-2 0 0 9鸡肉中四种氟哇诺酮类药物残留 高效液相色谱一荧光检测法2 0 0 9-0 3-0 9发布2 0 0 9-0 3-2 4实施河 北 省 质 量:技 术 监 督 局 发布D B1 3/T 1 0 0 6-2 0 0 9.山.o I1吕本标准由秦皇岛市质量技术监督局提出。本标准起草单位:秦皇岛正大有限公司、秦皇岛市标准化协会。本标准主要起草人:刘俊华、丛思羞、石丽敏、鹿翠珍。D B1 3/T 1 0 0 6-2 0 0 9鸡肉中四种氟哇诺酮类药物残留 高效液相色谱一荧光检测法范围 本标准规定了鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量检测的原理、仪器、提取和净化。本标准适用于鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定;鸡肝脏、肾脏中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量的测定也可参照执行。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日 期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G B/T 6 6 8 2 分 析实 验室 用水 规格 和试 验方 法3原理 样品中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星用乙睛提取，用正己烷净化，用高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。4 试剂与材料4.，所用试剂除另有指定外，均为色谱纯。4.2 试验用水应符合G B/T 6 6 8 2 中二级水的规定。4.3 乙睛。4.4 饱和正己烷:用乙睛饱和。4.5 正已烷。4.6 无水硫酸钠:分析纯，经6 4 0 灼烧4 h 后，贮于密闭容器中备用。4.7 0.0 1 m o U L 四T基澳化按溶液(p H=3.0):称取3.2 2 g四丁基滨化按，用1 0 0 0 m L 水稀释，冰醋酸调解p H 值到3.0 04.8 恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准品:纯度)9 5.0%04.9 恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准储备溶液:分别称取恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星标准品1 0.0 m g(按实际含量折算)，用0.0 3 m o l/L N a O H 溶液1 0 m L 溶解，再用乙睛稀释定容于1 0 0 m L 棕色容量瓶中，此溶液浓度为1 0 0 5 g/m L。各标准储备溶液置于2 C -8 冰箱中冷藏保存，保存期为六个月。标准使用液用流动相稀释至 适当浓度，使用时现配现用。仪器高效液相色谱仪。配有荧光检测器。高速 组 织均质 器，转 速1 0 0 0 0 r p m 以 上。旋转蒸发器。离心机。涡旋混合器。1 2 3 45!i5.5.5.5.5.DB 1 3/T 1 0 0 6-2 0 0 95.65.75.85.9精密 分 析天 平(感 量 0.0 0 0 1 g);天 平(感 量 0.0 1 g)0振荡器。搅肉机。尼龙微孔过滤膜:c 0.2 5 m06 色谱条件6.16.26.36.46.56.6色谱柱:Z O R B A X S B-A Q 4.6 X 2 5 0 m m,5 5 m 或相当 者。流动相:0.0 1 m o l/L 四T基澳化钱(p H=3.0)+乙睛=(9 7.5+2.5,V N)o流速:1.0 m L/m i n o检测波长:激发波长2 8 0 n m，发射波长4 5 0 r a n,柱温:4 0 c C进样量:2 0 p L o7 样 品 处理7.1 样品制备 取待检胸肉(或腿肉)样品，弃去筋、皮、骨和脂肪，切成小块后，用搅肉机搅碎。7.2 提 取 准确称取绞碎鸡肉 样品5 g(精确至0.0 1 g)于5 0 m L 塑料离心管，加人1 0 g 无水硫酸钠，加2 5 m L乙睛，用高速组织均质器于1 5 0 0 0 r p m 高速均质0.8 m i n v 1.5 m i n 后，3 5 0 0 r p m 离心1 0 m i n，移取上清液转移到另一个5 0 m L 塑料离心管中，残渣用1 5 m L 乙睛重复提取一次，合并上清液。7.3 净化 在合并后的上清液中加入3 0 m L 饱和正己烷，置振荡器上高速振荡5 m i n,3 5 0 0 r p m 离心1 0 m i l l,去除上层正己烷相，收集下层乙睛于蒸发浓缩瓶中，然后置4 0 水浴上减压蒸发浓缩至干，准确加人2.0 m L 流动相溶解残渣，转移至离心管，加人2 m L 正己烷，置振荡器上高速振荡3 m i n，于4 0 0 0 r p m 离心5 m i n.吸取下层液体用尼龙微孔过滤膜过滤，滤液待测。8测定8.1 标准工作曲线的制作 配制恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星混合标准溶液，使得溶液浓度为1.0 5 岁 m L(其中氧氟沙星浓度为3.0 5 g/m L )，分别移取1.0 5 g/m L 的混合标准溶液2 5 L,1 0 5 L,2 0 5 L,5 0 5 L,1 0 0 5 L,2 0 0 5 L 用流动相稀释成浓度分别为0.0 0 2 5&L,0.0 1 5 g/m L,0.0 2 5 g/m L,0.0 5 5&L,0.1 5&L,0.2 5 g/r L 的混合标准溶液，供高效液相色谱分析，制作标准工作曲线。8.2 液相色谱测定 根据样品溶液中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样品溶液中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样品溶液等体积穿插进样进行测定。四种氟哇诺酮的出峰顺序和参考保留时间见表1 0 表 1药 物 名称保 留 时间氧氟沙星1 3.2 9 mi n诺氟沙星1 7.3 9 mi n环丙沙星2 1.1 9 而 n恩诺沙星3 1.4 8 mi n DB1 3/T 1 0 0 6-2 0 0 98.3 空白试验与空白添加回收试验 每个试验批次的样品中至少必须同时做空白样品和空白 添加样品(实际加人值为已知)。空白 鸡肉添加样品的实际加人值水平可选在等于最大残留限量1 0 g g/k g，或方法检测限2 p g/k g 或略高的实际加人值水平上操作;空白样品和空白添加样品的测定按步骤7 操作。本试验用于计算试验的回收率R c，试验的回收率用于对阳性的 残留结果进行残留量的校正。回收率 R 滋公式(1)计算。式一。，八 八，八C=入I 气 入 J 勿 A m(1)式中:凡 代表回收 率;A 一空白 添加样品中四 种氛喳诺酮 类药物残留 量测定 值，5 吮;A o 空白样品中四 种氟咬诺酮类药物残留量测 定值，A g/g;A m 空白 样品中添 加四 种氛唆 诺酮类药物含 I t,.g/m L;试样中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星残留量(待校正值)按公式(2)计算。C=望 二 生 塑 立丝X 1 0 0 0A S x m(2)式 中:c样品中氧 氛沙星、诺氟沙星、环 丙沙星、恩诺沙星 残留 量，W g/g;A样品溶液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的峰面积A o 一 一 一 空白实验被测物的色谱峰面积或峰高标准工作溶翔标准工作溶泊样品定 容体积准工作溶液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的峰面积准 工作溶液中氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的浓度，5 g/m L;m L;As CsVm样品的克重，g o9 检验报告 结果报告值按公式(3)计算。(3)式中:C,经过回收 校正的 样品中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧 氟沙星残留 量，N g l k g;C 未校 正的 样品中 思诺沙星、环 丙沙星、诺氟沙星、氧 氟沙星 残留 量，5 g/k g;R 一回收 率，%。9.1 线性范围 氧氟沙星在0.0 0 3 5 g/g-0.6 p g/g 范围内呈良 好的线性关系，诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星在0.0 0 1 5 g/g-0.2 p g/g 范围内呈良 好的 线性关系，相关系数均大于0.9 9 9 81 0 检测限1 0.1 鸡肉 产品的检测限:恩诺沙星为2 5 g/k g，环丙沙星为 2 5 g/k g，诺氟沙星为2 5 g/k g,氧氟沙星为6 ji g/k g.1 0.2 四种报哇诺酮类检测色谱图D B1 3/T 1 0 0 6-2 0 0 9四种氟喳诺酮类检测色谱图见图1 0一6L!，。仁 ，J二，、叮gp.尸2。0从人 /了。;卜，.。户一 一仍6N朽一。X曰0未从 啊-一 一一 U 切 J 韦0.1 扣2 0 0走 的叹 田8 山1 以田1 之 的1 斌团1 压 的鸳2 0.加2 2 团2 4.0 0韶.田洲加旅 田左.的3 4.山洲 的图 14aCCO!优CCL卜、代L留二