DB12T 865-2019 水和沉积物中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱串联质谱法.pdf

ICS 65.150 B 50 DB12 天津市地方标准 DB12/T 8652019 水和沉积物中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱串联质谱法 Determination of nitrofuran metabolic residues in waters and sediment by LC-MS/MS method 2019-01-14 发布 2019-02-15 实施 天津市市场监督管理委员会 发 布 DB12/T 8652019 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：农业农村部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心（天津）。本标准主要起草人：李春青、陈永平、高丽娜、时文博、李宝华。DB12/T 8652019 1 水和沉积物中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了水及沉积物中硝基呋喃类代谢物残留量测定的试剂、仪器设备、测定步骤、计算、方法灵敏度、方法回收率、方法精密度。本标准适用于水和沉积物中 3-氨基-2-唑烷基酮（呋喃唑酮代谢物，以下简称：AOZ）、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（呋喃它酮的代谢物，以下简称：AMOZ）、氨基脲（呋喃西林代谢物，以下简称：SEM）和 1-氨基-2-内酰脲（呋喃妥因代谢物，以下简称：AHD）残留量的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 水或沉积物中残留的硝基呋喃类代谢物在酸性条件下水解，用2-硝基苯甲醛衍生化，经乙酸乙酯液-液萃取净化后，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。4 试剂 4.1 甲醇：色谱纯。4.2 醋酸铵：色谱纯。4.3 二甲基亚砜：色谱纯。4.4 2-硝基苯甲醛：色谱纯。4.5 三水合磷酸氢二钾：优级纯。4.6 乙酸乙酯：色谱纯。4.7 乙腈：色谱纯。4.8 盐酸：优级纯。4.9 0.002 mol/L 醋酸铵溶液：称取 0.15 g 醋酸铵，用水（实验用水当符合 GB/T 6682 规定）溶解并定容至 1000 mL。4.10 甲醇溶液：甲醇：水=5：95(v/v）。4.11 0.2 mol/L 盐酸溶液：量取浓盐酸（=1.19 g/mL）16.67 mL，用水稀释至 1000 mL。4.12 0.05 mol/L 2-硝基苯甲醛溶液：称取 0.037 8 g 2-硝基苯甲醛，溶于 5 mL 二甲基亚砜中，现用现配。4.13 1.0 mol/L 磷酸氢二钾溶液：称取 114 g 三水合磷酸氢二钾，溶解于 500 mL 水中。DB12/T 8652019 2 4.14 标准物质 AOZ、AMOZ、SEMHCl 和 AHDHCl：纯度98%。4.15 同位素内标溶液：AOZ-D4、AMOZ-D5、SEMHCl-13C-15N2和 AHD13C3，浓度均为 100 gmL。4.16 AOZ（呋喃唑酮代谢物）标准储备溶液：1.0 mg/mL：准确称取 10.0 mg0.1 mg AOZ，用甲醇溶解并定容至 10 mL 棕色容量瓶中，-20冷藏保存，有效期 6 个月。4.17 AMOZ（呋喃它酮代谢物）标准储备溶液：1.0 mg/mL：准确称取 10.0 mg0.1 mg AMOZ，用甲醇溶解并定容至 10 mL 棕色容量瓶中，-20冷藏保存，有效期 6 个月。4.18 SEM（呋喃西林代谢物）标准储备溶液：1.0 mg/mL：准确称取 14.9 mg0.1mg SEM HCl，用甲醇溶解并定容至 10 mL 棕色容量瓶中，-20冷藏保存，有效期 6 个月。4.19 AHD（呋喃妥因代谢物）标准储备溶液：1.0 mg/mL：准确称取 13.2 mg0.1 mg AHDHCl，用甲醇溶解并定容至 10 mL 棕色容量瓶中，-20冷藏保存，有效期 6 个月。4.20 硝基呋喃类代谢物混合标准工作溶液：准确吸取 AOZ、AMOZ、SEM 和 AHD 标准储备溶液，用水逐级稀释配成 100 ng/mL 和 10 ng/mL 混合溶液，4冷藏保存，有效期 1 个月。4.21 硝基呋喃类代谢物混合内标工作溶液：准确吸取同位素内标溶液（4.15），用水逐级稀释配成100 ng/mL 混合溶液，4冷藏保存，有效期 1 个月。5 仪器和设备 5.1 液相色谱串联四极杆质谱仪：配备电喷雾（ESI）离子源。5.2 电子天平：感量 0.000 1 g 和 0.01 mg。5.3 涡旋混合器。5.4 恒温水浴振荡器：可控温 37 1。5.5 离心机：4 000 r/min。5.6 氮气吹干仪。5.7 冰箱：具备 4 冷藏功能。6 测定步骤 6.1 样品处理 6.1.1 水样 取充分混匀的水样 100 mL 用 0.45 m滤膜过滤，于4 冰箱保存。6.1.2 沉积物 取沉积物样品 100 g，风干至内外部均干燥无水后，研磨成粉状，用80目圆筛筛分去除大型颗粒，于4 冰箱保存。6.2 水解和衍生化 6.2.1 水样品 量取 10 mL（精确到0.1 mL，V2）水样于 50 mL离心管中，加入 0.05 mL混合内标工作溶液（4.21）涡旋混合 50 s，再加入 5 mL盐酸溶液（4.11）和 0.20 mL 2-硝基苯甲醛溶液（4.12），涡旋振荡50 s后，置于恒温水浴振荡器中 37 避光振荡 16 h。6.2.2 沉积物样品 DB12/T 8652019 3 称取样品 5.00 g（精确到0.01 g，m），加入 0.05 mL混合内标工作溶液（4.21）涡旋混合 50 s，再加入 5 mL盐酸溶液（4.11）和 0.20 mL 2-硝基苯甲醛溶液（4.12），涡旋振荡 50 s后，置于恒温水浴振荡器中 37 避光振荡 16 h。6.3 提取净化 取出离心管冷却至室温，加入 3 mL 5 mL 磷酸氢二钾溶液（4.13），调节 pH 至 7.0 7.5，加入 8 mL 乙酸乙酯，涡旋振荡 50 s，4000 r/min 离心 5 min，取上层清液至 20 mL 玻璃离心管中，再加入 8 mL 乙酸乙酯重复上述操作，合并上清液于 40 下氮气吹干。准确加入 1.0 mL（V1）甲醇溶液（4.10）涡旋振荡溶解残留物，用 0.22 m 滤膜过滤，待测。（若样品杂质较多，可考虑定容后用正己烷净化，即加入 2 mL 正己烷涡旋离心后弃去上层，取下清液过 0.22 m 微孔滤膜，待测）。6.4 标准工作曲线制作 分别准确移取 10 ng/mL混合标准工作液（4.20）0.050 mL、0.10 mL和 100 ng/mL混合标准工作液（4.20）0.020 mL、0.040 mL、0.060 mL、0.080 mL、0.10 mL于 7 个 50 mL离心管中，除不加样品外，按 6.1.2 和 6.1.3 步骤操作，按 6.3 测定，色谱图参见附录A。6.5 测定 6.5.1 色谱条件 色谱柱：C18 柱，100 mm 2.1 mm(i.d.)，5 m，或其他性能相当的色谱柱；柱温：40；进样量：20 L；流动相：A.0.002 mol/L 醋酸铵溶液；B.乙腈；梯度洗脱程序见表 1，平衡时间为 5 min。表1 流动相梯度洗脱程序 时间（min）A（%）B（%）流速（ml/min）0.0 85 15 0.25 1.0 85 15 0.25 4.0 30 70 0.25 8.0 30 70 0.25 8.1 85 15 0.25 10 85 15 0.25 6.5.2 质谱条件 质谱参数应符合以下条件：a)离子化模式：大气压电喷雾离子源（ESI）,正离子模式；b)喷雾电压：4 000 v；c)雾化气压力：35 psi；d)辅助气流量：3 L/min e)离子传输毛细管温度：350；f)源内碰撞诱导解离电压：10 v；g)扫描模式：选择反应监测（SRM），选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表 2；h)Q1 半峰宽：0.7 Da；i)Q3 半峰宽：0.7 Da；j)碰撞气压力：氩气，1.5 mTorr DB12/T 8652019 4 表2 选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量 目标化合物 母离子(m/z)子离子(m/z)碰撞能量(v)AOZ（呋喃唑酮代谢物）236 104 19 236 134*15 AOZ-D4（呋喃唑酮代谢物内标）240 134*12 AHD（呋喃妥因代谢物）249 104 20 249 134*12 AHD-13C3（呋喃妥因代谢物内标）252 134*15 SEM（呋喃西林代谢物）209 166*12 209 192 10 SEM-13C-15N2（呋喃西林代谢物内标）212 168*11 AMOZ（呋喃它酮代谢物）335 262 22 335 291*14 AMOZ-D5（呋喃它酮代谢物内标）340 296*12 注：*表示为定量离子 6.5.3 定性依据 在同样测试条件下，阳性样品保留时间与标准物质保留时间相对标准偏差在 5%以内，且检测到的离子的相对丰度，用与最强离子（基峰）的强度百分比表示，应当与浓度相当的校正标准相对丰度一致，校正标准可以是校正标准品溶液，也可以是添加了标准物质的样品。次强碎片离子丰度与基峰丰度比应符合表 3 要求：表3 基峰与次强碎片离子丰度比要求 次强碎片离子相对丰度（%）允许相对偏差(%)50 20 20 50 25 10 20 30 10 50 6.5.4 定量测定 定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片（表 2）。6.6 空白实验 除不加试祥外，按上述 6.2、6.3 测定步骤和 6.5 测定条件进行测定，色谱图参见附录B。7 结果计算 7.1 用仪器自带工作站按内标法进行自动计算，以化合物上机响应的峰面积与内标物峰面积比值为纵坐标、化合物浓度与内标物浓度比值为横坐标，绘制标准曲线，再根据样品的峰面积响应值与内标物峰面积比值，利用标准曲线，得到样品制备液的实际测定浓度。7.2 水样品中硝基呋喃类代谢物残留量按式（1）计算。计算结果须扣除空白值。X=CiV1/V2 .(1)式中：X样品中硝基呋喃类代谢物的含量，单位为微克每升（g/L）；DB12/T 8652019 5 Ci样品制备液中硝基呋喃类代谢物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V1定容体积，单位为毫升（mL）；V2样品体积，单位为毫升（mL）。7.3 沉积物样品中硝基呋喃类代谢物残留量按式（2）计算。计算结果须扣除空白值。X=CiV1/m.(2)式中：X样品中硝基呋喃类代谢物的含量，单位为微克每千克（g/kg）；Ci样品制备液中硝基呋喃类代谢物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V1定容体积，单位为毫升（mL）；m样品质量，单位为克（g）。8 方法灵敏度 8.1 水中四种硝基呋喃类代谢物的检出限为 0.1 g/L，定量限为 0.2 g/L。8.2 沉积物中四种硝基呋喃类代谢物的检出限为 1.0 g/kg，定量限为 2.0 g/kg。9 方法回收率 9.1 水中添加浓度为 0.1 g/L 10 g/L 时回收率为 75%110%。9.2 沉积物中添加浓度为 1.0 g/kg 10 g/kg 时回收率为 75%110%。10 方法精密度 本方法的批内相对标准偏差小于10%，批间相对标准偏差小于15%。11 注意事项 硝基呋喃类代谢物衍生物对光敏感，以上操作应在避光条件下进行。DB12/T 8652019 6 A A 附 录 A（资料性附录）四种硝基呋喃类代谢物混合标准（2.0 ng/mL）特征离子质量色谱图 DB12/T 8652019 7 B B 附 录 B（资料性附录）空白沉积物样品特征离子质量色谱图 DB12/T 8652019 8 C C 附 录 C（资料性附录）沉积物添加样品特征离子质量色谱图 DB12/T 8652019 9 D