DB13T 1098-2009 饲料中蛋白质的测定.pdf

I C S 6 5.1 2 0B 4 6DB1 3河 北 省 地 方 标准D B1 3/T 1 0 9 8-2 0 0 9饲料中蛋白质的测定2 0 0 9-0 6-1 7发布2 0 0 9-0 7-0 2实施河 j 匕 省 质 量 主v _ 术 监 督 局 发布食品伙伴网http:/食品伙伴网http:/DB1 3/T 1 0 9 8-2 0 0 9前 月巨 口习本标准由河北省畜牧兽医 局提出。本标准起草单位:河北省饲料产品质量监督检验站、河北农业大学。本标准主要起草人:武英利、王萍、赵国先、李海龙、霍韶瑜、武利勇。食品伙伴网http:/食品伙伴网http:/DB1 3/T 1 0 9 8-2 0 0 9饲料中蛋白质的测定范 围本标准规定了饲料中蛋白质(俗称真蛋白质)的测定方法。本标准适用于饲料蛋白原料、浓缩饲料和配合饲料中蛋白质(俗称真蛋白质)的测定。2 规范性引用文件 下列文件通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日 期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日 期的引用文件，其最新版本适用于 本标准。G B/T 6 0 1-2 0 0 2 化学试剂 标准滴定溶液的制备 G B/T 6 4 3 2-1 9 9 4 饲料粗蛋白质测定方法 G B/T 6 6 8 2-2 0 0 8 分析 实验 室用水 规格 和试 验方 法3 原 理 试样水溶液经煮沸后在碱性条件下加人硫酸铜溶液使蛋白 质变性凝结而沉淀，用热水洗涤沉淀，得到的沉淀物再用凯氏定氮的方法测定其含氮量，然后，将结果乘以6.2 5 即为试样的蛋白质含量。4 仪器和设备4.，分析天平:感量为0.0 0 0 1 g4.2 样品粉碎机。4.3 分析筛:孔径0.5 0 m m o4.4 电炉:温度可调1 5 0 0 W2 0 0 0 W或消煮炉:4 1 0 土 5 c C o4.5 刻度吸管，5 m L,1 0 m L o4.6 烧杯，2 5 0 m L o4.7 三角漏斗。4.8 中速定量滤纸:直径9 c m-1 1 c m o4.9 电热式恒温干燥箱:可控温度7 5 土 2 9 C 04.1 0 凯氏烧瓶:1 0 0 m L 或2 5 0 m L 或消解管。4.1 1 凯氏蒸馏装置或定氮仪(以凯氏定氮原理制造的各种类型半自 动、全自 动蛋白测定仪)。4.1 2 锥形瓶，2 5 0 m L o4.1 3 酸式滴定管，2 5 m L o5 试荆 方法中 所用试剂，除另有规定外均为分析纯试剂，所用水应符合G B/T 6 6 8 2 三级以上用水要求。5.1 浓硫酸，无氮。5.2 五水硫酸铜(C u S O 4.5 H 2 O )5.3 无水硫酸钠或无水硫酸钾。5.4 氢氧化钠。食品伙伴网http:/DB 1 3/T 1 0 9 8-2 0 0 95.5 硼酸。5.6 甲基红。5.7 澳甲 酚绿。5.8 乙醇，9 5%05.9 盐酸。5.1 0 氯化钡。6 溶液6.，混合催化剂 称取0.4 g 五水硫酸铜，6g 无水硫酸钠或无水硫酸钾，研碎混匀。6.2 复教化钠溶液，浓度4 0 0睡 称取氢氧化钠4 0 0.0 g，加水1 0 0 0 m L 溶解，摇匀。6.3 硼酸溶液，浓度2 0 g/L 称取硼酸2 0.0 g，加水1 0 0 0 m L 溶解，摇匀。6.4 混合指示剂 甲 基红 乙 醇溶 液(1 叭):称取甲 基 红 0.1 0 g，加乙 醇1 0 0 m L 溶 解，摇 匀;澳甲酚绿乙醇溶液(5昨):称取甲 基红0.5 0 g，加乙醇1 0 0 m L 溶解，摇匀;上述两溶液等体积混合或按照仪器要求配制，阴凉处保存期为3 个月。6.5 氮舰化钠溶液，浓度2 5叭 称取氢氧化钠2.5 g，加水溶解定容至1 0 0 m L，摇匀。6.6 硫酸铜溶液，浓度1 0 0 g/L 称取五水硫酸铜1 0.0 g，加水溶解定容至1 0 0 m L，摇匀。6.7 盐酸标准滴定溶液，浓度0.1 m o U L 按G B/T 6 0 1 的规定制备、标定。6.8 抓化钡溶液，浓度 5 0叭 称取氯化钡5.0 g，加水1 0 0 m L 溶解，摇匀。7 试样的选取和制备 选取具有代表性的试样，用四分法缩减至2 0 0 g，粉碎至0.5 0 m m，装人密封容器中备用。8 分析步骤8.1 准 确 称取 试 样 0.5 g-1 g，放 人 2 5 0 m L 烧杯中，加水 7 5 m L，搅匀;置于电 炉 上加热 煮 沸3 0 m i n,期间 应不断 搅拌，并补加热水以保持水溶液体积不少于7 5 m L o8.2 将煮过的试样溶液稍冷，慢慢滴加2 m L 氢氧化钠溶液(6.5)，边加边缓慢搅拌，使试样溶液呈碱性，然后，慢慢滴加5 m L 硫酸铜溶液，边加边缓慢搅拌。重复上述操作三次，每次加人氢氧化钠溶液(6.5)6 m L，硫酸铜溶液5 m L。静置陈化2h 以上或过夜。8.3 沉淀用中速定量滤纸采用倾泻法过滤，沉淀用8 0 以上的热水洗涤7-1 0 次，直至用氯化钡溶液检验滤液无沉淀或浑浊产生为止。沉淀物连同滤纸置7 5 干燥箱中干燥1 h a8.4 干 燥后的 沉淀 物连同滤 纸 放人凯氏 烧瓶(或消 化管)中，加 人巧m L 浓硫酸，6.4 g 混合 催化剂，按照G B/T 6 4 3 2 的规定进行消解并测定其中氮的含量。同时做空白试验。8.5 结果计算与表述8.5.1 结果计算食品伙伴网http:/DB 1 3/T 1 0 9 8-2 0 0 9蛋白质含量按(1)式进行计算:(V 2一V 1)x C x 0.0 1 4 0“6.2 5x 1 0 0(1)M 式中:P 蛋白质含量，%;V,空白消 耗盐酸标准滴 定溶液体 积，m L;V 2 试样消 耗盐酸标准滴定溶液 体积，m L;C 盐酸标准滴定溶液浓度，m o U L;M 试样质量，g;0.0 1 4 0每毫摩尔氮的 克数;6.2 5氮换算成蛋白质的平均系数。8.5.2 结果表述 每个样品应取2 份平行样进行测定，以 其算术平均值为分析结果，结果保留 两位小数。9 重复性 当蛋白 质含量在1 0%以 上时，允许相对偏差不超过2%;当蛋白 质含量在1 0%以下时，允许相对偏差不超过3%0食品伙伴网http:/食品伙伴网http:/