ICS65.120B46DB13河北省地方标准DB13/T1091一2009饲料用酶制剂中酸性蛋白酶活力的测定—分光光度法2009-06-17发布2009-07-02实施河北省质量技术r(.f:督局发布DB13/T1091-2009.山占...舀.目月Ii舀本标准由河北省畜牧兽医局提出。本标准起草单位:河北省饲料产品质量监督检验站、石家庄市畜产品质量监测中心。本标准主要起草人:武英利、王萍、左晓磊、王作艳、闻超、武利勇。DB13/T1091-2009饲料用酶制剂中酸性蛋白酶活力的测定—分光光度法1范围本标准规定了饲料用酶制剂中酸性蛋白酶活力的单位定义和测定方法。本标准适用于饲料用酶制剂中酸性蛋白酶活力的测定。2规范性引用文件下列文件通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBIT6682-2008分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1酸性蛋白酶活力单位在40'C,pH3.0条件下，1min水解酪素生成15g酪氨酸所需的酶的量，规定为一个酶活力单位。4原理蛋白酶水解酪素产生酪氨酸，在碱性条件下含有酚基的酪氨酸将福林试剂还原生成钥蓝与钨蓝，溶液的颜色与酶解产生的酪氨酸的量成正比，而生成的酪氨酸的量与酶的活力成正比，用分光光度计测定其吸光度值，根据吸光度值计算其酶活力。5仪器和设备5.1分析天平:感量0.0001g05.2研钵。5.3容量瓶:50mL,100mL05.4电炉:温度可调。5.5恒温水浴摇床:温控范围30℃土0.290-60℃土0.29C05.6烧杯:200mL,250mLo5.7砂芯玻璃滤器:孔径0.455m05.8酸度计:精确至0.0105.9秒表。5.10移液器:精度10Al.5.11分光光度计。5.12比色管:25mL06试剂方法中所用试剂，除另有规定外均为分析纯试剂，所用水应符合GB/T6682-2008三级以上用水DB13/T1091-2009要求。6.1浓盐酸。6.2磷酸(85%).6.3钨酸钠(Na2WO4.2H2O)o6.4钥酸钠(Na2MoO4.2H刃)。6.5硫酸锉。6.6浓澳水(99%).6.7碳酸钠。6.8三氯乙酸。6.9乳酸(80%-90%).6.10乳酸钠(70%).6.11酪素。6.12L一酪氨酸标准品(含量大于99.0%)07溶液7.1福林试剂于2000mL磨口回流装置中加人钨酸钠(Na2WO4.2H2O)100g,钥酸钠(Na2MoO4.2H20)25g,水700mL,85%磷酸50mL、浓盐酸100mL，小火沸腾回流10h，取下回流冷却器，在通风橱中加人硫酸铿(Li2SO4)50g、水50mL和数滴浓澳水(99%)，再微沸15min，以除去多余的澳(冷...
