DB11T 379-2006 豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定.pdf

ICS 67.080.20 B 31 备案号：19170-2006 北 京 市 地 方 标 准 DB DB11/T 3792006 豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定 Determination of 4-chlorphenoxyacetic sodium,6-benzylam inopurine,2,4-D,gibberellic acid and thiram residues in soybean sprout and mung bean sprout 2006-07-25 发布 2006-09-01 实施 北京市质量技术监督局 发布 DB11/T 3792006 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定.1 3 6-苄基腺嘌呤残留量的测定.3 4 2,4-滴（2,4-二氯苯氧乙酸）残留量的测定.5 5 赤霉素残留量的测定.7 6 福美双残留量的测定.9 DB11/T 3792006 II 前 言 本标准由通州区质量技术监督局提出。本标准起草单位：北京市海淀区产品质量监督检验所（国家食品质量安全监督检验中心）。本标准主要起草人：曹红、金瑛、刘艳琴、许华、王浩、田艳玲、林立。DB11/T 3792006 1 豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定 1 范围 本标准规定了豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定方法。本标准适用于豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的残留量分析。2 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 2.1 原理 试样中的 4-氯苯氧乙酸钠用稀碱提取后，在酸性条件下用固相萃取柱将样品中的 4-氯苯氧乙酸吸附，使其与基体干扰物分离，再用甲醇洗脱并用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。2.2 试剂与材料 2.2.1 氢氧化钠（AR）。2.2.2 盐酸（AR）。2.2.3 磷酸（AR）。2.2.4 冰醋酸（AR）。2.2.5 甲醇（HPLC）。2.2.6 氢氧化钠溶液（0.01 mol/L）：称取 0.40 g 氢氧化钠，溶于水并稀释至 1000 mL。2.2.7 亚铁氰化钾溶液：称取 10.6 g 亚铁氰化钾K4Fe(CN)6 3H2O溶于少量水中，并用水稀释至100 mL。2.2.8 乙酸锌溶液：称取 22.0 g 乙酸锌Zn(CH3COO)2溶于少量水中，然后加入 3 mL 冰醋酸并加水稀释至 100 mL。2.2.9 磷酸盐缓冲液（0.01 mol/L）：称取 1.56 g 的磷酸二氢钠（NaH2PO42H2O）加水溶解，并定容至 1000 mL，用 50%的磷酸溶液调节 pH 值至 4.0。2.2.10 4-氯苯氧乙酸标准溶液：精密称取 4-氯苯氧乙酸（含量99%）0.1 g(精确到 0.0001 g)，用甲醇溶解并移入 100 mL 容量瓶中，稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 1.00 mg 4-氯苯氧乙酸。临用时甲醇稀释浓度为每毫升相当于 0.10 mg 4-氯苯氧乙酸。2.2.11 固相萃取小柱（3 m L/500 mg）：ODS-C18 小柱，用时先经 10 mL甲醇洗脱活化，再用 10 mL水洗去残留甲醇，保持萃取柱润湿状态待用。2.2.12 本标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。2.3 仪器与设备 2.3.1 高效液相色谱仪（带紫外检测器，配 ZORBAX SB C18色谱柱）。2.3.2 超声波仪。2.3.3 酸度计。2.3.4 组织捣碎机。2.3.5 Milli-Q 纯水制备系统。2.4 分析步骤 2.4.1 试样制备 称取捣碎混匀的豆芽样品20 g（精确至0.1 g）于100 mL容量瓶中，加入40 ml氢氧化钠溶液振摇，然后分别加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各5 mL，混匀，超声提取30 min，用氢氧化钠溶液稀释至DB11/T 3792006 2 刻度，过滤。取50.0 mL 的滤液，用浓磷酸调pH至2.5，然后以3 mL/min 的流速通过活化的ODS-C18小柱。先用3.0 mL 水洗去水溶性杂质后，再用甲醇洗脱并定容至3.0 mL，过0.45m滤膜后，供液相色谱分析。2.4.2 标准曲线的制备 准确吸取每毫升相当于0.10 mg的4-氯苯氧乙酸0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL于100 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。制成浓度依次为0.20 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、4.00 mg/L的标准使用液，供液相色谱分析。2.4.3 色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB C18柱（4.6 mm250 mm5 m）（或相当型号色谱柱）。检测波长：228 nm。流动相：甲醇+0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液（50+50）(V/V)。流速：1.0 mL/min。柱温：30。2.4.4 测定 吸取 10.0L 标准使用液和试样液分别注入液相色谱仪，按照 2.4.3 项条件进行检测，以保留时间定性，标准曲线法定量。标样及试样图谱见图 1 及图 2。2.5 计算 按式（1）计算。12.110001000=mfAX（1）式中：X试样中 4-氯苯氧乙酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A从标准曲线上求出的试样液中 4-氯苯氧乙酸的质量，单位为微克（g）；f试样的稀释倍数；m试样的取样量，单位为克（g）；1.124-氯苯氧乙酸转换为 4-氯苯氧乙酸钠的系数。计算结果保留两位有效数字。2.6 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。2.7 检测限 在本试验条件下，豆芽中4-氯苯氧乙酸钠的定量检测限为0.10 mg/kg。图 1 4氯苯氧乙酸标样色谱图 DB11/T 3792006 3 图 2 豆芽样品中 4氯苯氧乙酸色谱图 3 6-苄基腺嘌呤残留量的测定 3.1 原理 豆芽中残留的 6-苄基腺嘌呤经酸化甲醇提取后，高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。3.2 试剂与材料 3.2.1 乙酸（AR)。3.2.2 1%乙酸溶液。3.2.3 乙腈（HPLC）。3.2.4 甲醇（HPLC）。3.2.5 酸化甲醇溶液：每 100 mL 甲醇+水（60+40）(V/V)中加入乙酸 50L，混匀。3.2.6 6-苄基腺嘌呤标准溶液：精密称取 6-苄基腺嘌呤 0.1 g（精确到 0.0001 g）（含量99.0%）于 100 mL 容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度。此溶液每毫升相当于 1.00 mg 6-苄基腺嘌呤。临用时用甲醇稀释浓度为每毫升相当于 0.010 mg 6-苄基腺嘌呤。3.2.7 固相萃取小柱（3 mL/500 mg）：ODS-C18 小柱，用时先经 10 mL 甲醇洗脱活化，再用 10 mL水洗去残留甲醇，保持萃取柱润湿状态待用。3.2.8 本标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。3.3 仪器与设备 3.3.1 高效液相色谱仪（带紫外检测器，配 ZORBAX SB C18色谱柱）。3.3.2 Ultra-Turrax 搅拌器。3.3.3 离心机（4500 r/min）。3.3.4 旋转蒸发仪。3.3.5 组织捣碎机。3.3.6 Milli-Q 纯水制备系统。3.4 分析步骤 3.4.1 试样制备 称取捣碎混匀的豆芽样品 10 g（精确至 0.1 g）于 50 mL 聚丙烯离心管中，加入 15 mL 酸化甲醇溶液，用 Ultra-Turrax 搅拌器混匀 3 min,然后以 4500 r/min离心 10 min，上清液转入 100 mL梨形瓶中，样品再用 15 mL 酸化甲醇溶液提取，再次离心，合并上清液。上清液用旋转蒸发仪蒸发，以去除甲醇，剩余水相以 3 mL/min的流速通过活化的 ODS-C18小柱，先用 3.0 mL水洗去水溶性杂质后，再用甲醇洗脱并定容至 5.0 mL，过 0.2m 有机膜滤过后，供液相色谱分析。3.4.2 标准溶液系列的配制 准确吸取每毫升相当于 0.010 mg 的 6-苄基腺嘌呤 0 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、DB11/T 3792006 4 2.0 mL、5.0 mL 于 25mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。配制成浓度依次为 0 mg/L、0.08 mg/L、0.16 mg/L、0.32 mg/L、0.40 mg/L、0.80 mg/L、2.00 mg/L 的标准溶液系列，供液相色谱分析。3.4.3 色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB C18柱（4.6 mm250 mm5 m）（或相当型号色谱柱）。检测波长：267 nm。流动相：甲醇+乙腈+1%乙酸溶液（60+5+35）(V/V)。流速：1.0 mL/min。柱温：30。3.4.4 测定 准确吸取 10.0 L 标准系列溶液和试样溶液分别注入液相色谱仪中，按照 3.4.3 条件进行检测，以保留时间定性，峰面积外标法定量。标样及试样图谱见图 3 及图 4。3.5 计算 按式（2）计算。10001000=mfAX（2）式中：X试样中 6-苄基腺嘌呤的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A从标准曲线上求出的试样溶液中 6-苄基腺嘌呤的质量，单位为微克（g）；f试样的稀释倍数；m试样的取样量，单位为克（g）；计算结果保留两位有效数字。3.6 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。3.7 检测限 在本试验条件下，豆芽中 6-苄基腺嘌呤的定量检测限为 0.02 mg/kg。min01234567mAU 0102030405060 4.1616-benzylaminopurine 图 3 6苄基腺嘌呤标样色谱图 DB11/T 3792006 5 min01234567mAU 020406080100120140 6-benzylaminopurine 图 4 豆芽样品中 6苄基腺嘌呤色谱图 4 2,4-滴（2,4-二氯苯氧乙酸）残留量的测定 4.1 原理 试样中 2,4-滴用有机溶剂提取，用三氟化硼甲醇溶液将 2,4-滴衍生成 2,4-滴甲酯，液-液萃取，凝胶渗透色谱净化除去干扰物质，以气相色谱电子捕获检测器测定。根据色谱峰保留时间定性，外标法峰面积定量。4.2 试剂与材料 4.2.1 乙腈（AR）。4.2.2 甲醇（AR）。4.2.3 正己烷（AR）。4.2.4 环己烷（AR）。4.2.5 乙酸乙酯（AR）。4.2.6 pH 2 的酸性水溶液：用 50稀硫酸调节水的 pH 为 2。4.2.7 氯化钠（AR）。4.2.8 50 g/L 氯化钠溶液。4.2.9 无水硫酸钠：650 灼烧 4 h 后,保存于干燥器中。4.2.10 三氟化硼乙醚溶液：47(V/V)。4.2.11 衍生剂(14 三氟化硼甲醇溶液)：量取 29.5 mL三氟化硼乙醚溶液，用甲醇定容至 100 mL。4.2.12 2,4-滴标准使用液：精密吸取 1 mL 2,4-滴的甲醇标准溶液（浓度 100g/L），用甲醇溶解并定容至 100 mL。此溶液浓度为每毫升相当于 1.00g 2,4-滴。4.2.13 本标准所用水除另有规定外，均为蒸馏水。4.3 仪器与设备 4.3.1 气相色谱仪：配有电子捕获检测器。4.3.2 凝胶渗透色谱净化系统。4.3.3 组织捣碎机。4.3.4 恒温水浴锅。4.3.5 旋转蒸发器。4.3.6 电动振荡器。4.3.7 顶空分析用 20 mL 玻璃瓶，配套的铝盖和密封垫（或密封紧密的密封瓶）。4.4 分析步骤 4.4.1 提取 称取捣碎混匀的豆芽样品 50.0 g（精确到 0.1 g）于具塞锥形瓶内，加入 20 mL酸性水溶液和 50 DB11/T 3792006 6 mL 乙腈，振荡提取 30 min，过滤，滤渣用 20 mL乙腈洗涤两次,合并滤液于 250 mL分液漏斗中，于上述分液漏斗中加入