DB43T 890-2014 饲料中癸氧喹酯的测定 高效液相色谱法.pdf

DB43/T 8902014湖南省地方标准DB43湖南省质量技术监督局发 布ICS 65.120 46B饲料中癸氧喹酯的测定 High performance liquid chromatographic method高效液相色谱法Determination of Decoquinate in feeds2014-08-10 实施2014-06-10 发布DB43/T 8902014 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 原理 1 4 试剂与材料 1 5 仪器与设备 1 6 采样与试样的制备 2 7 分析步骤 2 8 结果计算 2 9 灵敏度、准确度、精密度 3 附录 A（资料性附录）癸氧喹酯高效液相色谱图 4 DB43/T 8902014 II 前 言 本标准按 GB/T 1.12009 的规则编制。本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。本标准起草单位：湖南省兽药饲料监察所。本标准主要起草人：陈启友、隆雪明、匡光伟、周汝顺、周宇骏、李裕。DB43/T 8902014 1 饲料中癸氧喹酯的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中癸氧喹酯的高效液相色谱测定方法。本标准适用于我省配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中癸氧喹酯的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 采用 1%氯化钙甲醇溶液提取试样中的癸氧喹酯，高效液相色谱-荧光分光法测定，外标法定量。4 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合 GB/T 6682 一级水的规定。4.1 氯化钙。4.2 甲醇 色谱纯。4.3 1%氯化钙甲醇溶液：称取 10g 氯化钙溶于 1000mL 甲醇中，混合均匀。4.4 0.025mol/L 氯化钙溶液：称取 2.77g 氯化钙，加水溶解，定容至 1000mL。4.5 癸氧喹酯标准品，纯度99.7%。4.6 癸氧喹酯标准储备液：称取癸氧喹酯标准品 20mg（精确到 0.01mg）于 100mL 的容量瓶中，用 1%氯化钙甲醇溶液溶解并定容至刻度，即为 0.2mg/mL 的癸氧喹酯标准储备液。4以下避光保存，有效期为 3 个月。4.7 癸氧喹酯标准工作液：移取适量癸氧喹酯标准储备液，用 1%氯化钙甲醇溶液稀释成浓度为0.02g/mL、0.05g/mL、0.10g/mL、0.20g/mL、0.50g/mL、1.00g/mL、2.00g/mL 的癸氧喹酯标准工作液，现配现用。4.8 微孔滤膜：0.22m，有机膜。5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。5.2 分析天平：感量 0.000 01g 和 0.001g。DB43/T 8902014 2 5.3 离心机：转速10000r/min，带有 50mL 离心管。5.4 超声波清洗机。6 采样与试样的制备 6.1 采样按 GB/T 14699.1 的规定执行。6.2 试样制备按 GB/T 20195 的规定执行。7 测定步骤 7.1 提取 称取试样 2g（精确到 0.001g）,置于 100mL 具塞锥形瓶中,准确加入 50mlL1%氯化钙甲醇溶液，振摇 2min,超声提取 15min，静置分层，取上清液于 50mL 离心管中 10000r/min 离心 5min，取适量过微孔滤膜，待测。7.2 测定 7.2.1 高效液相色谱参数 色谱柱：C18柱(250mm4.6mm，5m)，或相当者。流动相：0.025mol/L 氯化钙溶液+甲醇（V+V=15+85）。流速：1.0mL/min。进样量：20L。检测波长：激发波长 326nm，发射波长 384nm。7.2.2 试样测定 取试样溶液和相应的标准工作液进样，以组分的保留时间定性，以色谱峰面积积分值做单点或多点校准，外标法定量。标准工作液和试样溶液中癸氧喹酯的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。癸氧喹酯高效液相色谱图参见附录 A，癸氧喹酯标准工作液色谱图参见附录 A 中图 A.1，饲料中添加癸氧喹酯标准物质色谱图参见附录 A 中图 A.2。7.2.3 空白试验 除不加试料外，采用上述相同步骤操作。8 结果计算 试样中癸氧喹酯的含量由色谱数据处理软件或按下式计算获得：SSCA VfXAm=X试样中癸氧喹酯的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A试样中癸氧喹酯的峰面积；Cs标准工作液中癸氧喹酯的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；As标准工作液中癸氧喹酯的峰面积；DB43/T 8902014 3 V提取用溶液的总体积，单位为毫升（mL）；m试样质量，单位为克（g）；f稀释倍数。计算结果需扣除空白试样，测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，测定结果保留三位有效数字。9 灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 癸氧喹酯在饲料中的定量限为 0.5mg/kg。9.2 准确度 本方法癸氧喹酯在 0.5mg/kg、1.0mg/kg、5.0mg/kg 添加浓度水平上的回收率范围为（80120）%。9.3 精密度 本方法的批内变异系数10%，批间变异系数15%。DB43/T 8902014 4 附录 A（资料性附录）癸氧喹酯高效液相色谱图 0.02.55.07.510.012.515.017.5min0.02.55.07.510.012.515.017.520.0mVDetector B:Ex:326nm,Em:384nm 图 A.1 癸氧喹酯标准工作液色谱图（0.05g/mL）2.55.07.510.012.515.0min0.02.55.07.510.012.515.017.520.0mVDetector B:Ex:326nm,Em:384nm 图 A.2 饲料中添加癸氧喹酯标准物质色谱图（1.0mg/kg）癸氧喹酯 癸氧喹酯