DB440100T 37-2004 草菇菌种生产技术规程.pdf

ICS备案号：1902004广州市农业技术规范DBDB440100/T372004草菇菌种生产技术规程TechnicalRulesofStrawMushroomGenusProduction20040706发布20040801实施 广州市质量技术监督局 发布DB440100/T 372004I前 言 本标准由广州市农业局提出。本标准起草单位：广州市白云区农业科学研究所。本标准起草人：曹裕汉、曹学文、曹湛才、宋占平、王爱民、庄必海、曾志忠。本标准首次发布时间：2004年 07月06 日。DB440100/T 3720041草菇菌种生产技术规程 1 范围 本标准规定了草菇菌种的生产环境和生产技术管理。本标准适用于草菇各级菌种生产。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB5749 生活饮用水卫生标准NY5099 食用菌栽培基质安全技术要求 3 生长环境 草菇菌种生产的环境应符合下列要求：a)应远离有“三废”污染的工厂、生活区、禽畜养殖场等。b)应选用清洁水源，水质符合GB5749规定。c)应选择地势较高，排水良好的环境。菌种培养应在保温、保湿、通风和光照良好的室内进行。4 生产技术管理 4.1 母种生产 4.1.1 培养基的配方 去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000ml。4.1.2 培养基制作 4.1.2.1 配制 按配方将马铃薯切成0.5cm0.5cm0.5cm左右的方形小粒，加入蒸馏水1000ml，置锅内（小铝 锅或不锈钢锅）煮沸 20min30min，马铃薯熟而不烂，趁热用4 层沙布过滤，获得马铃薯抽提液，然后 把琼脂加入抽提液中继续加热，边加热边搅拌，直到琼脂完全液化，加入葡萄糖，补水至 1000ml，充 分搅拌均匀。4.1.2.2 分装 将配制好的培养基分装至18mm180mm或20mm200mm的玻璃试管中，装量为每管8 ml15ml，长度为试管的1/5 左右。试管口应保持干净，随后塞入棉塞或硅胶塞，并用牛皮纸包扎。4.1.2.3 灭菌 将配制分装和包扎好的试管直立放在高压灭菌锅内加热灭菌。加热到 0.05MPa 时，打开排气阀，排尽锅内空气，待压力指针回到零点后，关闭排气阀。重复操作两次。当压力升到 0.1MPa（温度为121）时，维持 30min 后停止加热，待指针回到零点，再打开锅盖，取出试管，并趁热将试管倾斜摆放在桌 面上，试管口比试管底部高1cm1.5cm，做成培养基斜面，斜面长度为试管长度的 1/23/5。4.1.2.4 灭菌效果检查 将灭菌后的培养基置于302条件下 1d2d 检查有没有细菌或霉菌的菌斑。4.1.3 消毒与接种DB440100/T 37200424.1.3.1 消毒 将接种用具、培养基放到接种箱或超净工作台内。接种箱应用气雾消毒剂消毒，用量5g/m3；有紫 外线灭菌灯的，同时开启照射 30min。超净工作台使用前应开机30min 预热。4.1.3.2 接种 消毒后进行接种。接种人员要注意卫生、清洁，戴口罩，按无菌操作要求，手部和试管菌种表面要 用70%75%医用酒精消毒。将接种用具用酒精灯进行火焰灭菌，放于箱内支架上冷却后备用。在酒精 灯火焰四周的无菌区进行接种操作。开始接种时，左手同时握着转接母种和待接斜面培养基，试管口置 于酒精灯火焰上方3cm处的无菌区，用右手迅速分别拔开试管棉花塞，并用接种钩在转接母种试管中 挑取绿豆粒大小的菌种体迅速转接到待接斜面培养基内。接种位置为培养基斜面前端1cm处，且菌种 体菌丝面朝上。接种后迅速塞上棉花塞。将接种好的斜面培养基用牛皮纸包扎试管口，并贴标有菌号和 接种日期的标签。标签粘贴位置为距试管口8cm处。4.1.4 培养 将接种后的试管置于 3032培养箱或培养室恒温培养 5d7d，当菌丝长满试管，并产生少量红 褐色厚垣孢子时结束培养。4.1.5 性状指标 菌丝应呈灰白至黄白色，浓密粗壮，萌发生长快，分布均匀，气生菌丝旺盛，爬壁力强，菌丝分枝 角度大，能产生大量红褐色的厚垣孢子。4.1.6 保藏 在1520下保存，每隔23个月转接一次。每个菌株最多转接4次。4.2 原种生产 4.2.1 栽培基质的要求 应符合NY5099的规定。4.2.2 培养料配方 棉籽壳100kg、麸皮6kg8kg、生石灰4kg5kg、料水比1:1.41.5、pH值为8.09.0。4.2.3 堆制发酵 将培养料按配比混合，预湿后起堆，堆沤发酵4d 5d，中间翻料一次。装料时检查pH值不低于8.09.0，料含水量60%65%。4.2.4 装瓶 用750ml玻璃菌种瓶装料，装料稍压实，装料量至瓶肩为度，后塞棉塞，包扎牛皮纸。4.2.5 灭菌 将分装好的原种培养料移入高压蒸汽灭菌锅内密闭加热升温。当压力表指针升至 0.05MPa 时，打 开排气阀，排放锅内空气，待压力表指针降至零时，关闭排气阀，继续加热升温。当压力表指针升至0.1MPa时，打开排气阀，排放锅内空气，待压力表指针降至零时，关闭排气阀，继续加热升温。保持 压力0.14MPa0.15MPa（温度为126）时，维持2h。保压结束，停止加热，当灭菌锅压力表指针降 至0时，取出培养料进行冷却。4.2.6 消毒与接种 4.2.6.1 消毒 按4.1.3.1。4.2.6.2 接种 按4.1.3.2，每支母种接5瓶至 10瓶原种。4.2.7 培养 在3032下培养 10d12d，待菌丝长满瓶并在瓶肩形成红褐色厚垣孢子时结束培养。4.2.8 性状指标 菌丝灰白至黄白色，粗壮、密集，萌发生长快，分布均匀，在瓶肩形成大量的红褐色厚垣孢子。DB440100/T 37200434.2.9 保藏 在1520下保藏不超过 30d。4.3 栽培种生产 按4.2。装料采用750ml菌种瓶，或采用13cm26cm0.05mm 规格聚丙烯塑料袋。灭菌按4.2.5，也可采用100保持10h12h。每瓶原种接50 瓶100瓶（或袋）栽培种，在1520下保藏不超过 20d。性状指标应符合4.2.8规定。