DB43T 1064-2015 饲料中喹烯酮的测定 高效液相色谱法.pdf

湖南省地方标准DB43DB43/T 10642015 ICS 65.120B 46湖南省质量技术监督局发 布饲料中喹烯酮的测定High performance liquid chromatographic method高效液相色谱法Determination of Quinocetone in Feeds2015-09-20 实施2015-07-20 发布DB43/T 10642015 I 目 次 前言 1 范围 12 规范性引用文件 13 原理 14 试剂与材料 15 仪器与设备 16 采样与试样制备 27 测定步骤 28 结果计算 29 灵敏度、准确度和精密度 3附录 A（资料性附录）喹烯酮高效液相色谱图 4 DB43/T 10642015 II 前 言 本标准按 GB/T 1.12009 的规则编制。本标准某些内容可能涉及专利，本标准发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。本标准起草单位：湖南省兽药饲料监察所、湖南省畜禽水产品质量检验检测中心。本标准主要起草人：欧阳龙、匡光伟、肖安东、徐丽枚、谭美英、陈启友、隆雪明、邓昉、魏群、张俊波、周玉洁、江燕、邓均红。DB43/T 10642015 1 饲料中喹烯酮的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中喹烯酮的高效液相色谱测定的方法。本标准适用于我省配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中喹烯酮的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 采用乙腈提取试样中的喹烯酮，固相萃取小柱净化，高效液相色谱-紫外法测定，外标法定量。4 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合 GB/T 6682 一级水的规定。4.1 甲醇 色谱纯。4.2 乙腈 色谱纯。4.3 乙腈。4.4 固相萃取柱：中性氧化铝，1000 mg/6mL。4.5 喹烯酮标准品，含量98.0%。4.6 喹烯酮标准储备液：称取喹烯酮标准品 25 mg（精确到 0.01 mg）于 25 mL 的容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，即为 1.0 mg/mL 的喹烯酮标准储备液。4以下避光保存，有效期为三个月。4.7 喹烯酮标准工作液：精密量取适量喹烯酮标准储备液，用乙腈稀释成 0.2 g/mL、0.5 g/mL、1.0 g/mL、5.0 g/mL、10 g/mL、50 g/mL 的标准工作液，现配现用。4.8 微孔滤膜：0.22m，有机膜。5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪：配置二极管阵列检测器或紫外检测器。5.2 分析天平：感量 0.00001 g 和 0.001 g。5.3 离心机：转速10000 r/min，带有 50mL 离心管。5.4 超声波清洗机。DB43/T 10642015 2 6 采样与试样制备 6.1 采样按 GB/T 14699.1 的规定执行。6.2 试样制备按 GB/T 20195 的规定执行。7 测定步骤 7.1 提取 称取试样 2.5 g（精确到 0.001 g）,置于 100 mL 具塞锥形瓶中,准确加入 25.0 mL 乙腈，超声提取 10 min，静置，液体转入 50 mL 离心管中 10 000 r/min 离心 5 min，上清液备用。7.2 净化 上清液过中性氧化铝柱，弃除初滤液，收集滤液过微孔滤膜，待测。7.3 高效液相色谱参数 色谱柱：C18 柱(250mm4.6mm，5m)，或相当者。流动相：甲醇:水（V:V=60:40）。流速：1.0mL/min。进样量：10L。检测波长：314nm。7.4 试样测定 取试样溶液和相应的标准工作液进样，以组分的保留时间定性，以色谱峰面积积分值做单点或多点校准，外标法定量。标准工作液和试样溶液中喹烯酮的响应值均应在仪器检测的线性范围内。喹烯酮高效液相色谱图参见附录 A，喹烯酮标准工作液色谱图参见附录 A 中图 A.1，配合饲料中添加喹烯酮标准物质色谱图参见附录 A 中图 A.2。8 结果计算 试样中喹烯酮的含量由色谱数据处理软件或按下式计算获得：10001000SSCA VfXAm=式中：X试样中喹烯酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A试样中喹烯酮的峰面积；Cs标准工作液中喹烯酮的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；As标准工作液中喹烯酮的峰面积；V提取用溶液的体积，单位为毫升（mL）；m试样质量，单位为克（g）；f稀释倍数。测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，测定结果保留三位有效数字。DB43/T 10642015 3 9 灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中喹烯酮的定量限均为 5 mg/kg。9.2 准确度 本方法在配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中添加 5.0 mg/kg、10.0 mg/kg、50.0 mg/kg喹烯酮三个添加浓度水平上的回收率范围均为（80110）%。9.3 精密度 本方法的批内变异系数10%，批间变异系数15%。DB43/T 10642015 4 附录 A（资料性附录）喹烯酮高效液相色谱图 min02468101214mAU 01020304050 VWD1 A,波长=314 nm(2014KXT 2014-02-27 16-39-05006-0201.D)7.711 图A.1 喹烯酮标准工作液色谱图 min02468101214mAU 05101520253035 VWD1 A,波长=314 nm(2014KXT 2014-02-27 16-39-05016-1201.D)5.180 7.699 图 A.2 配合饲料中添加喹烯酮标准物质的色谱图 喹烯酮 喹烯酮